本发明专利技术涉及一种检测原发性胆汁性肝硬化特征蛋白的优化质谱模型及其制备方法，属于质谱检测技术领域。本发明专利技术为进一步发现新的原发性胆汁性肝硬化生物标志提供了基础。本发明专利技术对于原发性胆汁性肝硬化的检测优于目前所采用的任何单一检测方法，为原发性胆汁性肝硬化的早期发现、早期治疗提供了一种非侵入性检测技术，从而为降低原发性胆汁性肝硬化的病死率、提高原发性胆汁性肝硬化的治愈率，并进一步为高危人群筛查原发性胆汁性肝硬化提供了一种新方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于质谱检测
，特别涉及对原发性胆汁性肝硬化血液优化的质谱检测方法。 一种通过能与蛋白质结合的磁珠基质去捕获生物标志，并用有定量控制的质谱分析来检测原发性胆汁性肝硬化生物标志。在此提及的此项专利技术涉及蛋白质检测领域，为一种新的非侵入性的体外质谱检测方法。本专利技术可以应用到已经脱离人体的体液中的原发性胆汁性肝硬化生物标志组合的检测方法或试剂盒。
技术介绍
原发性胆汁性肝硬化(PBC)是一种慢性自身免疫性肝脏疾病，该病以肝内细小胆管非化脓性进行性破坏并伴门脉炎症性改变，长期持续性肝内胆汁淤积、最终导致肝纤维化和肝硬化的慢性进展性自身免疫性疾病为主要特征。近年的调査研究表明，PBC在世界范围内已经不再是罕见疾病，特别是在东方人群中，无症状的PBC患者可能远远超过我们现在估计的数量，而且PBC在中国人群中的发病率和死亡率可能都高于其它地方。目前，对于PBC诊断最可靠的方法仍然是肝脏组织病理活解。然而，很多PBC患者不愿意接受这种具有创伤性的侵入检查，很多接受检查的PBC患者肝脏组织病理活解并不能找到特征性的病理改变。除此之外，血清中高滴度的抗线粒体抗体(AMA)目前也作为诊断PBC的一个重要指标，但是该抗体对于PBC的诊断并不特异，在其它疾病状态，如感染性肝病等也经常出现，这对于像我们这样的肝炎大国来说显得非常不利。还有研究发现，1(m左右的PBC患者血清中检测不到AMA。由于现有的检测技术限制导致很多PBC患者到了疾病终末期才被检测，这一现状已经不能满足临床对于疾病早期诊断、早期治疗的要求，在临床医疗中仍然迫切需要诊断PBC的新方法。原发性胆汁性肝硬化(PBC)是一种慢性自身免疫性肝脏疾病，以肝内细小胆管非化脓性进行性破坏并伴门脉炎症性改变，长期持续性肝内胆汁淤积、最终导致肝纤维化和肝硬化为主要特征。由于现有的检测技术限制导致很多PBC患者到了疾病终末期才被检测，在临床医疗中迫切需要检测PBC的新方法。现有的研究表明蛋白指纹图谱技术可用于很多疾病的早期检测，胆汁郁积性疾病在人群中的发生率非常高，因此把PBC患者从这类人群中区分出来在临床诊疗中显得非常重要(KimWR, LudwigJ, Lindor KD.Variant forms of cholestatic diseases involving small bile ducts in adults. 勘/fe^roe/7"rW 2000;95:1130-1138)。目前依靠组织病理活解、生化检查以及血清自身抗体检查仅能发现并诊断50-60y。的PBC患者，这一现状无法很好的满足临床诊疗需求，因此，PBC的诊断仍旧显得并不十分完善(He XS， Ansari AA， Ridgway WM， C叩pel RL，Gershwin ME. New insights to the i鹏unopathology and autoimmune responses inprimary biliary cirrhosis. /鹏""o7 2006;239:1-13.)。蛋白质的分离技术在蛋白质组学中应用分离技术有两个目的。第一、通过将蛋白质的混合物分离成单一蛋白质或蛋白质小组以简化复杂的蛋白质混合物；第二、通过标记的方法可以比较两个蛋白质的混合物样品中蛋白质的不同表现。其中主要的技术有双向电泳(two_dimensional gel electrophoresis, 2-DE)、高效液相层析(high-performanceliquid chromatography, HP1X)、毛细管电泳(capillary electrophoresis, CE)、亲禾口层析(affinity choromatography)、蛋白芯片(protein microarray)、磁性微球(magneticbeads,简称磁珠)和免疫组等。特别是蛋白芯片和磁珠两项新的蛋白指纹图谱技术克服了以往技术的缺点，具有高灵敏度、高通量、结果重复性好、可机械化操作和方法灵活等特点。待测样品来源广泛，不需作特殊前处理，可以直接点样检测，如血清、尿液及组织液等；检测快速， 一般一例标本的检测时间仅需约5分钟，从标本制备到出结果全过程仅约1小时。蛋白芯片和磁珠两项新的蛋白指纹图谱技术有可能在体液中潜在生物标志(biomarker)检测方面创造革命性突破(许洋，蛋白质指纹图谱技术在实验诊断与临床医学中的研究进展，基础医学与临床，2007,27:134-142)。基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱 (matrix-assisted laser desorption/ionization time of fight massspectrometry, MALDI-T0F-MS)与蛋白芯片分离技术联合应用即为表面增强激光解析/电离飞行时间质谱(surface enhanced laser desorption /ionization time of fight massspectrometry, SELDI-T0F-MS)。 2-DE最先被用于临床蛋白组学研究，但其对疏水性、强酸性和强硷性蛋白的分辩率不够，而且不能检测低丰度蛋白，故实用价值受限。近来，蛋白芯片与质谱技术(SELDI-T0F-MS)的结合，己被成功地用于肿瘤研究；但由于磁珠表面的结合面积远远大于蛋白芯片，从而磁珠的灵敏性比蛋白芯片更高(刘建栋等，血液蛋白质组与质谱仪检测流程标准化初探。基础医学与临床，2007,27:193-197)。磁珠具有优于二维电泳、蛋白芯片和其他质谱方法的特点，已被广泛地用于肿瘤生物标志的筛査等研究(屠世良等，癌胚抗原阴性结直肠癌的检测和结直肠癌预后相关生物标志，基础医学与临床，2007， 27: 926-931)。该技术具有操作简便、无需离心样品、可直接分析原始生物样本(如血清、尿液等)、样本用量小等特点，同时适合多样品平行检测和直接进行蛋白质全景式的搜索和分析，特别是对小分子量蛋白和低丰度蛋白具有较高的捕获效果，可以与其他蛋白质组学方法互补，目前已被广泛地用于肿瘤标志的筛査和临床检测，并均己获得很好的结果。但国内迄今尚无采用磁珠与质谱技术获得检测原发性胆汁性肝硬化血清特征蛋白的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是为克服对目前原发性胆汁性肝硬化血清检测技术的不足之处，建立一种检测原发性胆汁性肝硬化特征蛋白的优化质谱模型及其制备方法和应用，该模型为早期检测提供了新的途径和方法，并为进一步发现新的生物标志提供了基础。本专利技术提出的检测原发性胆汁性肝硬化血清蛋白质的质谱模型，其特征在于从血清中筛选出69蛋白作为特征蛋白；选取上述69个特征蛋白中的任意两个或两个以上的蛋白，根据各蛋白质峰的质荷比m/z值及以该蛋白的临界峰值均值M,建立了原发性胆汁性肝硬化患者与正常人相鉴别的患者两两鉴别的血清特征蛋白检测质谱模型，所说的特异蛋白质质荷比m/z和临界峰值均值M分别为m/z二8133， M《9.27; m/z=3445， M《1.67; m/z=16290，M》0. 23; m/z=4260， M《2. 19;分子量(m/z)误差〈0.01°/。，临界峰值均值M的CV < 5 亂本专利技术提出上述的检测原发性胆汁性本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测原发性胆汁性肝硬化血清特征蛋白的质谱模型，其特征在于：从血清中筛选出６９蛋白作为特征蛋白；选取上述６９个特征蛋白中的任意两个或两个以上的蛋白，根据各蛋白质峰的质荷比ｍ／ｚ值及以该蛋白的临界峰值均值Ｍ，建立了原发性胆汁性肝硬化患者与正常人相鉴别的患者两两鉴别的血清特征蛋白检测质谱模型，所说的特异蛋白质质荷比ｍ／ｚ和临界峰值均值Ｍ分别为ｍ／ｚ＝８１３３，Ｍ≤９．２７；ｍ／ｚ＝３４４５，Ｍ≤１．６７；ｍ／ｚ＝１６２９０，Ｍ≥０．２３；ｍ／ｚ＝４２６０，Ｍ≤２．１９；。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李永哲，胡朝军，李宁，许洋，
申请(专利权)人：许洋，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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