【技术实现步骤摘要】
蜻蜓凤梨AfFT3基因、克隆方法、表达载体及应用
[0001]本专利技术属于生物
,涉及凤梨FT基因、克隆、表达特性分析、表达载体构建、对乙烯的响应途径和对开花的调控作用。
技术介绍
[0002]凤梨科植物为多年生单子叶草本植物,包括重要的热带花卉(观赏凤梨)和重要的热带水果(菠萝)。为了满足市场需求,利用乙烯及其衍生物促进凤梨开花,调节上市时间,已经成为凤梨栽培中采用的重要技术。但实际生产中常有催花质量不佳造成经济损失的情况发生,解决这一问题的理论依据匮乏。已有的研究表明,外源乙烯通过提高内源乙烯的含量诱导凤梨植物开花,而内源乙烯如何启动开花仍是未解问题。
[0003]FLOWERING LOCUS T(FT)是调控植物开花的重要基因,对成花转变具有重要作用,是典型的促花因子。FT属于磷脂酰乙醇胺结合蛋白(phosphatidylethanolamine
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binding protein,PEBP)家族基因,本身受光周期途径中的锌指蛋白诱导,其蛋白由叶片经维管束移动到茎顶端组织。FT是光周期途径关键基因CONSTANS(CO)、春化途径和自主途径关键基因FLOWERING LOCUS C(FLC)等的直接靶基因,它几乎可将所有的开花信号传导途径进行整合。研究表明,拟南芥FT在接收到光周期信号后,先从叶片中被诱导表达,然后FT蛋白在FT
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INTERACTING PROTEIN 1(FTIP1)蛋白的协助下,经过维管束转运至顶端分生组织(shoot apical me
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种蜻蜓凤梨AfFT3基因,其特征在于:该基因序列具有序列表中SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。2.一种蜻蜓凤梨AfFT3基因的克隆方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)以蜻蜓凤梨为材料,利用CTAB法提取总RNA;(2)AfFT3基因的克隆;(2
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1)利用Transgene公司的
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Uni One
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Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix Kit将RNA反转录为cDNA,作为PCR模板备用;(2
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2)设计全长cDNA扩增引物;(2
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3)根据引物的Tm值进行PCR条件的优化后,进行PCR扩增,并将获得的产物连接到大肠杆菌,经PCR和酶切鉴定后进行序列测定。3.根据权利要求2所述的蜻蜓凤梨AfFT3基因的克隆方法,其特征在于,步骤(1)总RNA的提取具体如下:(1
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1)准备工作:将研钵提前放入烘箱180℃烘4h后冷却至室温待用,实验过程中所要用的移液枪、实验台均用酒精擦拭,离心管、枪头均无RNA酶;(1
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2)取850μl CTAB缓冲液到2ml离心管中,放入65℃水浴锅预热;(1
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3)称取0.2g材料于加入液氮的研钵中充分研磨,待材料呈粉末状即可转入(1
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2)中预热的离心管中,加入材料前先加入25μlβ
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巯基乙醇;(1
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4)立即涡旋30s混匀,65℃水浴6min;(1
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5)加入等体积氯仿/异戊醇,剧烈震荡,开盖放气,涡旋30s,室温11000rpm离心15min;(1
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6)吸取上清于新2ml离心管中,加入等体积氯仿/异戊醇再抽提一次,涡旋30s,室温11000rpm离心15min;(1
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7)吸取上清于新1.5ml离心管中,加入1/3体积8mol/l LiCl,颠倒混匀,在4℃下沉淀10
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12h,不要超过16h;(1
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8)4℃下,11000rpm离心30min,弃上...
【专利技术属性】
技术研发人员:徐立,荆永琳,李志英,王小冰,王加宾,
申请(专利权)人:中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所,
类型:发明
国别省市:
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