一种新的多肽——人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人低密度脂蛋白受体相关蛋白８．６９，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如胆固醇代谢紊乱及其相关产物的生理功能紊乱性疾病等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人低密度脂蛋白受体相关蛋白８．６９的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。受体结构和功能的研究重点在于在正常状态和疾病状态下的胆固醇内环境稳定性以及细胞内吞作用的细胞生物学。LDL受体不可能是阿扑脂蛋白E(apoE)的唯一受体，因为乳糜微粒残余、HDLc和β-VLDL微粒水平并在动物或缺乏LDL受体病人体内并没有升高。而且，在过表达LDL-受体的转基因鼠中，LDL聚集现象减少。在肝脏这个脂蛋白代谢的中心器官中，发现有低摩尔量的wt阿扑脂蛋白E结合蛋白，但是这些结合蛋白并不是真正的阿扑脂蛋白E受体，阿扑脂蛋白E受体是那些高摩尔量的wt脂蛋白受体。不同的阿扑脂蛋白E受体可能同时与损伤性神经组织的再生功能、免疫反应的调节以及细胞生长和分化的调节有关。直到现在，还没有受体被纯化或克隆出来。但是，已经克隆出了一个与LDL-受体以及表皮生长因子前体同源性非常高的细胞表面蛋白，取名为LDL-受体相关蛋白(LRP)。LDL-受体相关蛋白都是由LDL-受体和EGF-前体的序列结构域组成。该分子可能包括以下功能区域(1)与LDL-受体相似的由四个拷贝组成的分子外结构域；(2)一个与EGF相似的生长因子重复区域；(3)一个转膜片段；(4)一个细胞质尾巴，可能包含引导积聚物质进入内吞小窝的两拷贝的信号肽。在LDL-受体相关蛋白的分子外结构域中，有四个A类半胱氨酸富含结构域簇，这些结构域簇类似于LDL-受体中负责与阿扑脂蛋白B和阿扑脂蛋白E结合的结构域。这些结构域总共带有158个负电荷，其共有序列比末端的补足成分更象LDL-受体。这表明该分子是一个能与脂蛋白微粒中带正电荷的配基(例如阿扑脂蛋白B或阿扑脂蛋白E)结合的表面受体蛋白。LDL-受体与高胆甾醇血病直接相关。LDL-受体的研究对细胞内吞作用的了解意义非凡，并将使基因治疗成为可能。LDL-受体相关蛋白因为与LDL-受体蛋白的结构和生化特征密切相关，所以它可能是另一种脂蛋白受体家族的成员，该脂蛋白受体与不同的包括阿扑脂蛋白E和阿扑脂蛋白B的配基有特异性结合。研究表明，LDL-受体相关蛋白与动脉硬化症密切相关。通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1 024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本专利技术的多肽的表达谱与人低密度脂蛋白受体相关蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69。由于如上所述人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中302-541位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-1970位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人低密度脂蛋白受体相关蛋白８．６９，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]