血清高密度脂蛋白磷脂及低密度脂蛋白磷脂的测定方法技术

血清高低密度脂蛋白磷脂的测定方法。本发明专利技术用不同浓度聚乙二醇（ＰＥＧ）选择性沉淀脂蛋白，经加热消化沉淀物，脂性磷转变为无机磷，测磷试验测定磷的含量，换算成ＰＬ含量，通过各测定管之差即可得到ＨＤＬ－ＰＬ、ＬＤＬ－ＰＬ。本发明专利技术作为一个方法学研究，着重于最佳反应条件，重复性和可靠性。测定结果表明该方法准确度、精确度均较理想；ＨＤＬ－ＰＬ、ＬＤＬ－ＰＬ为血脂测定中新的检测指标，填补了一项空白，且该方法经济简易准确，适合基层医疗单位使用，便于普及推广。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属于医学临床检验测试方法特别是血清中脂蛋白磷脂的测定。磷脂(PL)是构成脂蛋白颗粒的组成部分，PL与胆固醇(TC)一样也是构成与维持细胞膜功能的重要部分。血清PL含量与TC含量密切相关。血清高低密度脂蛋白及载脂蛋白已作为血脂代谢的常规指标，普遍于临床。而该脂蛋白磷脂的测定方法还未见文献报导。磷脂作为脂蛋白重要组成成分，其作用机制有待于进一步阐明，以HDL为例，在肝细胞高尔基复合体中的HDL颗粒-新生HDL，呈圆盘状，主要由载脂蛋白和磷脂组成，呈磷脂双层结构。新生HDL通过表层接触获得胆固醇，另一方面在胆固醇酰基转移酶(TCAT)催化下新生HDL的表面物质(包括磷脂)不断转变为非极性的核心物质，同时表面物质(磷脂等)又不断由其它脂蛋白或细胞膜补充，核心逐渐膨大，推开磷脂双层，形成HDLC，从而被肝细胞APO-E受体识别，转入肝细胞内进行降解。其中磷脂含量的多少是否对于表层接触获取胆固醇，以及对于转变为非极性核心物质的过程等有调节性或反馈性影响，从而影响整个HDL代谢，有待于深入研究。本专利技术正是基于这种思路建立了高低密度脂蛋白磷脂(HDL-PL、LDL-PL)的测定方法。本专利技术目的是提供一种操作简便，重复性、可靠性即测定准确度、精确度较高的。本专利技术沉淀原理用不同浓度聚乙＝醇(PEG)选择性沉淀脂蛋白，经加热消化沉淀物，脂性磷转变为无机磷，测磷试验测定磷的含量，换算成PL含量，通过各测定管之差即可得到HDL-PL、LDL-PL。本专利技术测定方法是按以下步骤进行a、沉淀与洗涤，采取空腹静脉血于一次性塑料管内，凝集后离心取上清备用，将标有A、B、C标记的三个测定试管内各加入血清50ul，再分别加入浓度为5-7％、18-22％、33-37％的沉淀剂PEG6000各50ul，混匀静置5mim1500ipm15min，弃上清后轻轻加入相对应沉淀剂50ul，再弃去上清；b、消化，测定管内加入消化剂，A管加入50ul，B、C管各加入100ul充分混匀后放铁架上，电炉上加热消化，至测定管由棕黑色迅速变清亮为止，放置至冷；c、显色，标准管加入50ul磷标准液，空白管加入50ul蒸馏水，与测定管同时分别加入显色剂2ml混匀，ESC37℃水浴10min取出冷却后700nm处空白管调零，读取各管吸光度A值；d、换算，血清中磷脂，以卵磷脂计，计算如下HDL-PlmmoL/L＝C管PL量-B管PL量＝×1.29×25LDL-PlmmoL/L＝B管PL量-A管PL量＝×1.29×25本专利技术的优点与积极效果本专利技术采用沉淀剂分离脂蛋白，消化后测定无机磷的方法检测血清中HDL-PL、LDL-PL，该方法简易，准确，适合基层医疗单位使用；作为一个方法学研究，本课题着重于最佳反应条件，重复性和可靠性，测定结果表明该方法准确度、精确度均较为理想；(HDL-PL、LDL-PL)为血脂测定中新的检测指标，填补了一项空白，且该方法经济、简便适于推广使用。实施例1、主要试剂PEG6000日本进口分装，钼酸铵、抗坏血酸(Vitc)、高氯酸、磷标准液(北京化工厂)。2、主要仪器721分光光度计、LD24-0.8自动平衡微量离心机、Bs2型电热三用水箱。3、试剂配制a、将PEG6000粉片用蒸馏水分别配制成6％、20％、35％于棕色瓶中4℃；b、显色剂将0.125g钼酸铵溶于30ml蒸馏水中加入1.5ml浓H2SO4，用水稀释至50ml棕色瓶4℃保存临用前按9mg/ml量加入Vitc；显色剂中Vitc用量，因为Vitc不稳定，故宜临时加入，用不同含量Vitc参加显色反应，表明Vitc＞7mg/ml(8-10mg/ml)时显色反应基本无变化，用量要求不严格，故取间值9mg/ml。c、消化剂60％HOLO4，棕色瓶室温保存。4、操作步骤a、沉淀与洗涤，采取空腹静脉血于一次性塑料管内，凝集后离心取上清备用，将标有A、B、C标记的三个测定试管内各加入血清50ul，再分别加入浓度为6％、20％、35的沉淀剂PEG各50ul，混匀静置5mim1500ipm15min，弃上清后轻轻加入相对应沉淀剂50ul(勿混)，再弃去上清；b、消化，测定管内加入消化剂，A管加入50ul，B、C管各加入100ul充分混匀后放铁架上，电炉上加热消化，至测定管由棕黑色迅速变清亮为止，放置至冷；c、显色，标准管加入50ul磷标准液，空白管加入50ul蒸馏水，与测定管同时分别加入显色剂2ml混匀，ESC37℃水浴10min取出冷却后700nm处空白管调零，读取各管吸光度A值；d、换算，血清中磷脂，以卵磷脂计，计算如下HDL-PlmmoL/L＝C管PL量-B管PL量＝×1.29×25LDL-PlmmoL/L＝B管PL量-A管PL量＝×1.29×25血清中磷脂大部分为卵磷脂，卵磷脂分子量中磷占4％，故将脂性磷换算成磷脂因数为25、4mg/dL为磷标准液浓度。测定结果1、重复性实验，将备用血清分成10份，同时测定HDL-PL、LDL-PL做批内精密度实验，血清冰箱保存，每天测定一次，连续10天，做批间精密度试验，结果见表1表 1批内n＝10 批间n＝10X S CV％X S CV％HDL-PL1.29 0.0655.041.30 0.1057.81mmoL/LLdL-pl1.74 0.0875.021.78 0.1327.43mmoL/L2、以此方法测定了166名体检健康者HDL-PL、LDL-PL分成成年组(21-57Y)老年组(60-71Y)见表2表 2组别例数HDL-PL 男女比较 LDL-PL 男女比较X±S t p X±S t p男 45 1.24±0.311.71+0.33成年 女 38 1.20±0.22 1.97＞0.05 1.68±0.40 2.00＞0.05合计 83 1.21±0.271.69±0.37男 51 1.39±0.372.61±0.41老年女 32 1.43±0.41 1.74＞0.05 2.40±0.33 1.83＞0.05合计 83 1.35±0.212.45±0.38两组t 2.23 3.06比较p ＜0.05 ＜0.05t检验均数t检验3、临床应用，将61名高胆固醇血症患者(血脂测定TC均＞5.70mmoL/L。甘油三酸正常)与40名同年龄组健康者HDL-PL、LDL-PL比较(见表3)，经相关分析表明，健康组TC与LDL-PL密切相关，r＝0.801，Y＝1.42+9.36X结果见表4表 3例数 年龄 TC(mmoL/L)HDL-PL LDL-PLX±SX±S X±S高胆固醇 6141.1±2.8 6.06±1.21 1.27±0.21 3.74±0.19血症组健康者 403.97±2.9 3.69±1.49 1.29±0.31 2.14±0.47t 1.772.99 1.98 3.41p＞0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＜0.01t检验为均数t检验表 4高胆固醇血症组 健康组(n＝18)r p r pSTCandR HDL-PL 0.310＞0.050.443＞0.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种血清高密度脂蛋白磷脂及低密度脂蛋白磷脂的测定方法，该方法是按以下步骤进行：ａ、沉淀与洗涤，采取空腹静脉血于一次性塑料管内，凝集后离心取上清备用，将标有Ａ、Ｂ、Ｃ标记的三个测定试管内各加入血清５０ｕｌ，再分别加入浓度为５－７％、１８－ ２２％、３３－３７％的沉淀剂ＰＥＧ６０００各５０ｕｌ，混匀静置５ｍｉｍ１５００ｉｐｍ１５ｍｉｎ，弃上清后轻轻加入相对应沉淀剂５０ｕｌ，再弃去上清；ｂ、消化，测定管内加入消化剂，Ａ管加入５０ｕｌ，Ｂ、Ｃ管各加入１００ｕｌ充分混匀后放铁架上 ，电炉上加热消化，至测定管由棕黑色迅速变清亮为止，放置至冷；ｃ、显色，标准管加入５０ｕｌ磷标准液，空白管加入５０ｕｌ蒸馏水，与测定管同时分别加入显色剂２ｍｌ混匀，ＥＳＣ３７℃水浴１０ｍｉｎ取出冷却后７００ｎｍ处空白管调零，读取各管吸光度 Ａ值；ｄ、换算，血清中磷脂，以卵磷脂计，计算如下：ＨＤＬ－ＰｌｍｍｏＬ／Ｌ＝Ｃ管ＰＬ量－Ｂ管ＰＬ量＝［Ａ↓［Ｃ］－Ａ↓［Ｂ］／Ａ↓［标］］×１．２９×２５ＬＤＬ－ＰｌｍｍｏＬ／Ｌ＝Ｂ管ＰＬ量－Ａ管ＰＬ量＝［Ａ↓［ｂ］－Ａ ↓［ａ］／Ａ↓［标］］×１．２９×２５。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐彬，
申请(专利权)人：徐彬，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]