【技术实现步骤摘要】
生物医药体外检测与诊断技术
技术介绍
基因克隆与重组技术、蛋白质原核表达与纯化技术、酶联免疫技术。
技术实现思路
原发性胆汁性肝硬化(Primary biliary cirrhosis，PBC)是一种慢性进行性疾病，在女性中多见，是由于肝内中小胆管进行性破坏并伴有门脉炎症性改变，进一步发展为纤维化、肝硬化。临床表现为进行性肝功能异常。早期表现为皮肤瘙痒、嗜睡、肝区隐痛，晚期出现黄疸、肝腹水、肝硬化。PBC的发病率约为2～24/10万，有家族倾向，患者的亲属比普通人群发病风险明显增高。PBC是一种自身免疫性疾病，80％的患者伴有其他的免疫性疾病，如干燥综合症、甲状腺炎、关节炎等。PBC患者的血清中可检测到抗线粒体(AMA)M2抗体、抗核抗体、抗核孔复合物抗体等多种自身抗体，其中以抗丙酮酸脱氢酶复合物(PDC)抗体为特征性免疫学异常。抗PDC抗体是一种抗线粒体抗体(AMA)M2型抗体。PDC由多种酶和蛋白组成，其中与PBC相关的最重要的抗原成分是PDC-E2成分，即二氢脂乙酰胺乙酰转移酶(DPAT)。人DPAT是由细胞核编码的蛋白，位于线粒体内膜。DPAT含有四个功能结构区，分别是N-端硫辛酸结合区，富含脯氨酸和丙氨酸的铰链连接区，与PDC E1、E3、亚单位结合区，C端为酶催化功能区。原核表达及重组实验证实，内侧硫辛酸结合区是与自身抗体结合实际的主要部位，其重组多肽可以检测出百分之九十以上的PBC M2抗体阳性血清，与纯天然的DPAT蛋白的检出率和灵敏度相同。本专利技术的内容涉及到DPAT1-335aa多肽的原核表达及纯化技术，该多肽包括除C端酶催化区以外的D...
【技术保护点】
丙酮酸脱氢酶复合体（ＰＤＣ）Ｅ↓［２］抗原的表达与纯化技术及其应用属于生物医药领域体外检测与诊断技术。该技术采用基因工程原核表达法，在大肠杆菌中表达与硫氧还蛋白融合的ＰＤＣ Ｅ↓［２］抗原－二氢脂乙酰胺乙酰转移酶（ＤＰＡＴ）１－３３５氨基酸残基的部分多肽，采用金属亲和层析法纯化融合蛋白，肠激酶水解获得重组ＰＤＣ Ｅ↓［２］多肽抗原。用此多肽抗原酶联免疫法检测原发性胆汁性肝硬化（ＰＢＣ）患者血清中的抗线粒体抗体（ＡＭＡ）Ｍ↓［２］抗体，作为ＰＢＣ的特异性免疫学诊断试剂。本专利技术专利的权利要求如下：ＤＰＡＴ１－－３３５氨基酸残基部分多肽序列的克隆表达与纯化技术。
【技术特征摘要】
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