血清抗血管α1-和AT1-受体自身抗体检测方法及试剂盒技术

一种血清抗α１－和ＡＴ１－受体自身抗体检测试剂盒，其特征在于该检测试剂盒由包被有α１、ＡＴ１抗原的抗原包被板、样品稀释液、阴性对照血清、阳性对照血清、洗液、酶标二抗、显色剂Ａ、显色剂Ｂ和终止液组成，可用于血清抗血管α１－和ＡＴ１－受体自身抗体的检测。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及医用检测试剂，特别是血清抗血管α1-受体自身抗体(抗α1-肾上腺素受体自身抗体)及AT1-受体自身抗体(抗血管紧张素II-受体1自身抗体)检测试剂。
技术介绍
高血压是严重危害人类健康的常见病和多发病，在欧美国家，高血压的患病率多在20％以上，我国也是高血压的高发国家，据1991年全国部分省市抽样普查，总患病率已达11.88％，据上海市的卫生服务调查，高血压的患病率居各种慢性病的第一位。高血压是一个长期逐渐进展的慢性疾病，高血压与脑卒中、左室肥厚、心力衰竭、冠心病、主动脉夹层、慢性肾功能衰竭、高血压眼底病变密切相关，是导致心血管疾病死亡的主要危险因素。在我国，70％的高血压患者属于轻型，病情进展缓慢，约10％的患者属于难治性高血压和重症高血压，是导致心脑血管死亡的主要人群，必须加强血压控制并注意早期预防和监测。高血压的发病机制十分复杂，常常是多种因素综合作用的结果，包括肾脏调节血压功能紊乱、肾素-血管紧张素系统及交感神经系统活性增强、血管内皮细胞功能异常、胰岛素抵抗代谢综合征及遗传因素等；其中，自1970年Ebringe和Doyle发现30％良性高血压和恶性高血压病人中存在血清免疫球蛋白水平的显著增高以来，众多资料表明在实验性高血压动物和高血压病人中存在自身免疫现象，免疫因子的作用可能是高血压发生发展的重要机制，高血压病中存在的免疫功能异常成为高血压发病及高血压并发症产生机制研究的重要领域。近年来，还发现高血压病人中存在着针对机体心血管调节受体的自身抗体，尤其是抗G蛋白偶联受体的自身抗体，在可能是高血压尤其是恶性高血压发病的重要因素。G蛋白偶联受体是与GTP调节蛋白相关的跨膜受体分子超家族，包括M2-毒蕈碱受体、β-肾上腺素受体、α-肾上腺素受体、血管紧张素受体-1(AT1)等。G蛋白偶联受体是将胞外信号传导给胞内的通用信号分子，在心血管调节中具有极为重要的作用，其肽链结构七次穿越胞膜并形成胞外三个环肽和胞内三个环肽。目前发现约有1/3的扩张型心肌病病人中存在针对G蛋白偶联受体胞外第二个环肽的抗M2和β1受体自身抗体，并且发现抗M2-受体自身抗体可通过M2受体对新生鼠心肌细胞产生持久的剂量依赖性负性频率作用，表现为不随时间而失敏感的毒蕈碱受体激动活性。抗β1-受体自身抗体也具有β1-受体激动活性，并可导致心肌细胞钙超负荷而引起心肌损害。抗M2-受体自身抗体及抗β1-受体自身抗体的存在及其病理性激动剂样活性可能是扩张型心肌病发病及心力衰竭的产生的重要机制；。α1-受体和AT1-受体也属于G蛋白偶联受体超家族，并且在血压调节中具有十分重要的作用。α1-受体的激动可以激活磷酯酶C，动员胞内钙离子而收缩血管、升高血压。AT1-受体的激动除可通过收缩血管而升高血压外，还可增加肾脏的潴钠潴水并通过刺激肾上腺醛固酮的分泌，加强水钠的潴留而升高血压，并可引起心肌及血管平滑肌的肥厚。已有证据表明在恶性高血压病人中存在抗α1-受体和AT1-受体自身抗体滴度的升高，并且抗α1-受体自身抗体和AT1-受体自身抗体均具有激动剂样活性；；[参见Fu ML，Schulze W，Wallulat G etal.Immunohistochemical localization of angiotensin II receptors(AT1)in the heartwith anti-peptide antibodies showing a positive chronotropic effect.Receptors Fu等人发现在恶性高血压病人中存在着抗血管α1-受体自身抗体，在恶性原发性高血压和恶性继发性高血压病人中，抗α1-受体自身抗体阳性反应的患者分别占20％和40％，并且这种自身抗体可以显著增强培养的新生大鼠心肌细胞的收缩频率，起到α1-受体起到激动剂样活性。Fu等人还发现恶性高血压中尚存在高滴度的抗AT1-受体自身抗体，免疫细胞化学技术发现大鼠源性抗AT1-受体自身抗体可对新生大鼠心肌细胞起到正性变时效应。另外，Wallukat等发现，在先兆子痫的病人中，亦存在抗AT1-受体自身抗体的阳性反应，其阳性率明显高于正常血压产妇，这一抗体可与ATI-受体特异性结合，产生受体激动剂样活性。自身抗体通过相应受体所引起的病理效应可能是恶性高血压及先兆子痫发生发展的重要因素。恶性高血压是原发性高血压或继发性高血压血压严重升高所致的一种并发症，常伴有广泛而严重的靶器官损害，病情发展迅速，如不积极治疗，多数病人于半年内死于肾功衰、脑卒中、急性心肌梗塞及心力衰竭等心脑血管并发症。难治性高血压-即三种有效抗高血压药物足够剂量联合使用，仍然不能将血压控制在140/90mmHg的高血压病人，它是一种特殊类型高血压，病程较长，容易发生心、脑、肾损害，难治性高血压的产生与降压药选择欠佳等有关，因此，对难治性高血压的诊断是当前该领域所面临的重要课题。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种检测血清抗血管α1受体及AT1-受体自身抗体的方法。本专利技术的另一个目的是提供一种用于血清抗血管α1受体及AT1-受体自身抗体检测试剂盒。为了探讨难治性高血压与免疫功能异常的关系，我们共收集了难治性高血压病人58例，普通高血压病人96例以及正常血压对照40例，难治性高血压的诊断按美国JNC-VI提出的标准，即三种有效抗高血压药物足够剂量联合使用，仍然不能将血压控制到140/90mmHg的高血压病人称为难治性高血压病人。两组高血压病例在性别、年龄、初治血压水平、高血压靶器官损害状况等方面相匹配，高血压病例组与正常血压对照组资料在性别、年龄上相匹配，结果发现在难治性高血压病例组，这两种自身抗体的阳性率明显高与其它两组，分别为43％，10.4％及7.5％，差异具有显著性。我们还观察了抗体阳性病人对不同的作用于肾素-血管紧张素系统药物的差别，初步结果提示这种自身抗体可模拟血管紧张素，激动血管紧张素受体，在高血压病发生及其并发症进展中具有重要的意义，抗α1-受体和AT1-受体抗体是难治性高血压患者血压不易控制的潜在因素之一。抗α1-受体和AT1-受体抗体的临床检测不仅有助于寻找难治性高血压的发病因素，还有助于指导难治性高血压患者降压药物的选择，特异性阻断α1-受体和AT1-受体的抗高血压药物可能更有利于此类难治性高血压病人的血压控制和并发症防治。抗α1-受体和AT1-受体抗体的临床检测具有重要的临床应用价值。本专利技术提供用于检测血清抗血管α1-受体自身抗体及AT1-受体自身抗体的试剂盒由抗原包被板、样品稀释液、阴性对照血清、阳性对照血清、洗液、酶标二抗、显色剂A、显色剂B、终止液组成。抗原包被板包被有α1、AT1抗原，包被板为聚苯乙烯板(8×12孔)或条(12孔)，聚苯乙烯对蛋白质有良好的吸附性能，可将抗原溶液与聚苯乙烯载体接触，在一定的温度、经过一定的时间即可达到包被(将抗原结合于固相载体上的过程称为包被)的目的.将α1和AT1抗原多肽片段溶解于碳酸缓冲液中(PH 9-11)，以每孔1μg/100μl的量包被，置4℃冰箱过夜，加1％牛血清白蛋白+PBS封闭，置37℃温浴2小时，以消除非特异性反应；拍干、干燥后保存于4℃或-20℃冰箱备用；样品稀释液为0.01M本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种血清抗α１－和ＡＴ１－受体自身抗体检测试剂盒，其特征在于该检测试剂盒由包被有α１、ＡＴ１抗原的抗原包被板、样品稀释液、阴性对照血清、阳性对照血清、洗液、酶标二抗、显色剂Ａ、显色剂Ｂ和终止液组成。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：王敏，廖玉华，魏宇淼，黄凯，汪朝晖，程龙献，董继华，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属协和医院，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]