一种环维黄杨星D的含量测定方法技术

本发明专利技术公开了一种以异氰酸苯酯为衍生剂，柱前衍生化法测定环维黄杨星Ｄ原料药及其各种剂型（如黄杨宁滴丸，黄杨宁片等）中环维黄杨星Ｄ含量的高效液相色谱测定方法。该方法利用高效液相色谱法测定环维黄杨星Ｄ的含量，测定每０．２ｍｇ环维黄杨星Ｄ加入浓度为１μｌ／ｍｌ的异氰酸苯酯试液为０．０５～０．６ｍｌ，流动相为乙腈－水体系，采用紫外检测器检测。该方法简便易行，专属性强，样品与杂质分离度佳，准确度高，衍生剂用量适中，降低毒副作用，能够准确测定环维黄杨星Ｄ原料药及其各种剂型中环维黄杨星Ｄ的含量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种环维黄杨星D的原料药及其各种剂型(如黄杨宁滴丸，黄杨宁片等)中环维黄杨星D的含量测定方法，具体的说是一种柱前衍生化的高效液相色谱测定法，并且采用紫外检测器检测。
技术介绍
环维黄杨星D是从黄杨科植物小叶黄杨Buxs mincrophylla Sieb.etZucc.var.sinica Rehd.et Wils.及其同属植物中提取出来的总生物碱(环维黄杨星D的原料药，也称黄杨宁)中的主要成分。它的化学结构中无共轭双键，所以在紫外光区无吸收，不能直接利用紫外检测器检验。目前2005版药典一部第276页对环维黄杨星D的含量测定采用非水滴定法，此法虽然简便，但专属性差，所测得的为总生物碱含量，不能准确的测定出环维黄杨星D的真实含量。而2005版药典一部第591页对黄杨宁片的含量测定采用酸性染料比色法，此法虽然灵敏度高，但不易操作，专属性差，检测的也是总生物碱含量，也不能准确的测定出环维黄杨星D的真实含量。《中国药科大学学报》第408-411页《HPLC/MS与柱前衍生化HPLC/UV法测定环维黄杨星D有关物质比较》一文中公开了一种采用柱前衍生化法，以异氰酸苯酯为衍生剂，甲醇-水为流动相的高效液相色谱测定法。但存在样品与杂质分离效果不佳，衍生剂异氰酸苯酯未确定合适用量等缺点。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了提供一种简便易行，数据稳定可靠，专属性强的环维黄杨星D的含量测定方法，弥补现有方法专属性差或灵敏度不高、样品与杂质分离效果不佳，异氰酸苯酯衍生剂未确定合适用量等的缺点，节约试剂、降低毒副作用，有效监控药物质量。本专利技术通过对环维黄杨星D的柱前衍生化，即环维黄杨星D经异氰酸苯酯(Pheynl isocyanate，PIC)衍生，可生成N，N’-取代脲，衍生产物在242nm波长处有紫外吸收，可用HPLC法紫外检测器进行测定，可以准确的测定其含量，方法简便，重现性好，专属性强，提高样品与杂质分离效果，节约试剂、降低毒副作用，能够准确测定环维黄杨星D原料药及其各种剂型中环维黄杨星D的含量，从而达到保证药品质量的目的。本专利技术通过如下技术方案实现一种环维黄杨星D原料药及其各种剂型中环维黄杨星D含量的高效液相色谱测定法，样品经异氰酸苯酯衍生化后，用高效液相色谱法测定环维黄杨星D的含量，流动相采用乙腈-水体系，检测器为紫外检测器。本专利技术对紫外检测波长的确定，是经过二极管阵列检测器检测，得到一系列不同波长的吸收值，最终确定在242nm处为最大吸收波长，将其作为检测波长(见图1)。本专利技术对不同极性的流动相进行实验，环维黄杨星D经异氰酸苯酯衍生化后，以十八烷基键合相硅胶为固定相，检测波长为242nm。以甲醇-水体积比为85∶15作为流动相时，流速1.0ml/min，滴丸样品保留时间为5.6min，在5.9min有杂峰干扰，发现以甲醇-水为流动相时样品和杂质分离效果不佳，分离度小于药典要求的1.5(见图2)。改用乙腈-水为流动相时，对照品、样品分离度高，无杂质干扰，达到药典要求，并且阴性滴丸样品溶液无干扰(见图3、4、5)。经实验验证流动相优选为乙腈-水体积比为50∶50～90∶10。改用乙腈-水体积比为70∶30作为流动相时，对照品、样品保留时间为7.8min，样品分离度最佳，达到药典要求，并且无杂质干扰，所以乙腈-水的最优选的体积比为70∶30。本专利技术对衍生试剂用量的确定如下对照品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的环维黄杨星D对照品适量，加三氯甲烷制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。异氰酸苯酯试液的配制精密量取异氰酸苯酯0.1ml，置100ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，即得。测定法精密量取对照品溶液1ml置10ml量瓶中，共6份，分别加入不同量的异氰酸苯酯试液，振摇1分钟，室温避光放置30分钟，加90％甲醇至刻度，摇匀，精密吸取10μl注入液相色谱仪，测定。结果见表1。考察结果表明异氰酸苯酯试液用量可以选用范围为0.05-0.6ml。对照品溶液1ml，异氰酸苯酯试液加入量为0.2ml时峰面积达到最大(A＝1251640)；而当异氰酸苯酯试液加入量为0.3ml以上时峰面积不再增加；考虑到样品含量有一定的波动范围，为保证有足够量的衍生试剂，故确定异氰酸苯酯试液更优选的用量为0.3ml。表1 衍生剂用量考察 实验进一步证明，用环维黄杨星D加聚乙二醇等辅料制得的滴丸剂采用酸性染料比色法测定因辅料有较大的干扰，所以本技术方案特别优选适用于滴丸剂。对于投料原料，采用非水滴定法测定，含量为99.57％，符合药典要求。但由于非水滴定法测定的是总生物碱，采用柱前衍生化HPLC法进行测定，原料含量为86.85％。该值跟样品平均含量0.4373mg与标示量(0.5mg)的比值87.46％非常接近，说明柱前衍生化HPLC法准确可行。用柱前衍生化HPLC法对3批黄杨宁滴丸(每丸含环维黄杨星D0.5mg)进行了含量测定的结果见下表2，平均含量为87.46％。(含量测定采用外标法样品含量＝{/标示量}×100％，其中A1表示样品峰面积，A2表示对照品峰面积，C表示对照品浓度，V表示样品体积。以下具体实施例的含量测定方法均与此相同。)表2 样品含量测定 与紫外分光光度法相比，柱前衍生化HPLC专属性更强。该方法快速、方便，能准确检出环维黄杨星D的含量。附图说明下面给出环维黄杨星D对照品在波长为242nm处的紫外吸收光谱图和色谱图，黄杨宁滴丸以不同流动相体系得到的色谱图、黄杨宁阴性滴丸的色谱图、环维黄杨星D原料药色谱图、黄杨宁滴丸和黄杨宁片的含量测定色谱图，进一步说明本专利技术的特点。图1环维黄杨星D在242nm处紫外吸收光谱2黄杨宁滴丸以甲醇-水为流动相(85∶15)的色谱3环维黄杨星D对照品色谱4黄杨宁滴丸以乙腈-水为流动相(70∶30)的色谱5黄杨宁阴性滴丸以乙腈-水为流动相(70∶30)的色谱6环维黄杨星D原料药含量测定色谱7环维黄杨星D原料药含量测定色谱8黄杨宁滴丸含量测定色谱9黄杨宁片含量测定色谱图具体实施方式以下通过具体实施例来进行进一步说明实施例1(原料药河南龙都制药厂提供)含量测定照高效液相色谱法(中华人民共和国药典2005年版一部附录VID)检查。色谱条件与系统适应性以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(体积比70∶30)为流动相；检测波长为242nm。理论板数按环维黄杨星D峰计算应不低于5000。异氰酸苯酯试液的配制精密量取异氰酸苯酯0.1ml，置100ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，即得。对照品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的环维黄杨星D对照品适量，加三氯甲烷制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的制备精密称取样品10mg，置50ml量瓶中，加三氯甲烷溶解，用三氯甲烷定容至刻度，即得。测定法精密量取对照品溶液1ml置10ml量瓶中，加异氰酸苯酯试液0.3ml，振摇1分钟，室温避光放置30分钟，加90％甲醇至刻度，摇匀，精密吸取10μl注入液相色谱仪。另取供试品溶液1ml同法操作，测定，记录色谱图，见图6。外标法计算含量，结果含量为86.85％。实施例2(原料药江苏东台神天植物药有限公司提供)含量测定照高效液相色谱法(中华人民共和国药本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种环维黄杨星Ｄ原料药及其各种剂型中环维黄杨星Ｄ含量的高效液相色谱测定法，采用了柱前衍生化法，以异氰酸苯酯为衍生剂，其特征在于，流动相为乙腈－水体系，采用紫外检测器检测。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：何风雷，许招懂，杨能英，王冰，
申请(专利权)人：广州陈李济药厂，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]