本发明专利技术公开了一种化学氧化法测定总胆红素的试剂盒：试剂１：磷酸二氢钾０．５～３ｇ／Ｌ，磷酸氢二钠１６～８２ｇ／Ｌ，氯化钠２．５～１２．５ｇ／Ｌ，聚乙烯吡咯烷酮１～３０ｇ／Ｌ，乙二胺四乙酸二钠０．２～１ｇ／Ｌ，曲通１０００．５～３ｍｌ／Ｌ，硫柳汞０．０５～０．２５ｇ／Ｌ，磷酸氢二钠－磷酸二氢钾缓冲液ｐＨ值７．６～８．４；试剂２：磷酸氢二钠１～５．５ｇ／Ｌ，磷酸二氢钾０．２５～１．５ｇ／Ｌ，过硫酸钾１２．５～６５ｇｇ／Ｌ，氯化钠４．５～２２．５ｇ／Ｌ，硫柳汞０．０５～０．２５ｇ／Ｌ，磷酸氢二钠－磷酸二氢钾缓冲液ｐＨ值６．８～７．６。该试剂盒线性上限大、抗干扰性强、测定准确度、精密度和灵敏度高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种测定血清、血浆或尿液中总胆红素的试剂盒，具体讲是一种化学氧化法测定总胆红素的试剂盒。
技术介绍
总胆红素是人体内由血红素代谢产生的结合或非结合型胆红素的总称，总胆红素异常偏高常见于肝胆疾病，近年来一些研究表明血液中胆红素低于正常值常与冠心病有关。因此，对人体的血清、血浆或尿液中总胆红素的测定，是医学检验最常规的项目之一。测定总胆红素的试剂盒目前主要有以下三种重氮法测定总胆红素的试剂盒、酶法测定总胆红素的试剂盒和化学氧化法测定总胆红素的试剂盒。重氮法测定总胆红素的试剂盒历史最久，在严格控制操作环境温度、时间、步骤下，采用该试剂盒对总胆红素水平偏高的样本检出率较高，且试剂价格低廉。所以目前仍广泛应用。但采用该试剂盒对总胆红素的检测操作复杂、试剂不稳定、反应不专一等问题一直是困扰医学工作者的难题，虽然100多年来人们作过无数次的改良，但至今仍无满意的结果。酶法测定总胆红素的试剂盒采用该试剂盒测定总胆红素具有简单、特异的特点。但由于酶催化胆红素反应速度慢，尤其是难以催化δ胆红素反应，因此实际测得为葡萄糖醛酸结合胆红素与非结合型胆红素的值，而不能真实反映总胆红素。且某些特殊病人样本如光照疗法后产生的光胆红素(不属于胆红素)亦可参与此反应，导致测值不准确，这些缺点大大限制了其应用。另外酶法测定总胆红素的试剂盒酶热稳定性差，保存时间短，价格过高，不利于推广应用。所以，目前虽然已能进入临床应用，但远非完善，还需继续研究。化学氧化法测定总胆红素的试剂盒从上世纪九十年代起，化学氧化法中的钒酸氧化法测定总胆红素的试剂盒开始在国外实际应用，从1998年起钒酸氧化法测定总胆红素的试剂盒开始进入我国。与重氮法测定总胆红素的试剂盒和酶法测定总胆红素的试剂盒相比，钒酸氧化法测定总胆红素的试剂盒逐步显示出测定总胆红素时其操作简单方便、试剂稳定、保存时间长(如双试剂剂型在室温下可以稳定一年，置于仪器的试剂仓中可以稳定一个月以上)以及价格低廉等优点。但该试剂盒测低值样本时，副反应较明显而影响结果，且有一定毒性，尤其是废弃物可能被还原成剧毒的偏钒酸盐而污染环境。国内外最新研究结果表明，化学氧化法中的过硫酸钾氧化法测定总胆红素的试剂(盒)既保留了钒酸氧化法测定总胆红素的试剂盒原有的优点，又具有钒酸氧化法测定总胆红素的试剂盒所不具有的对环境无污染、测低值样本时副反应小于钒酸氧化法测定总胆红素的试剂盒等优点。但它仍然存在以下缺点1、线性上限小，不能完全覆盖全部的病理变化；2、抗干扰性差3、副反应的影响仍较明显，反应曲线不规范，且未到终点；4、测定的准确度、精密度和灵敏度尚低，且在测低值时尤其明显。由于以上缺点的存在，所以，过硫酸钾氧化法测定总胆红素的试剂盒迄今为止仍没有得到实际应用。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是，提供一种既具有现有技术的过硫酸钾氧化法测定总胆红素试剂盒的优点，又线性上限大、抗干扰性强、反应曲线规范、能迅速到达终点且测定的准确度、精密度和灵敏度高且能实际应用的化学氧化法(过硫酸钾氧化法，下同)测定总胆红素的试剂盒。本专利技术的技术方案是，提供一种化学氧化法测定总胆红素的试剂盒，该试剂盒由试剂1和试剂2组成，其中试剂1的各组份及其浓度范围(浓度以克/升即g/L或毫升/升即ml/L表示)如下磷酸二氢钾 0.5～3g/L磷酸氢二钠 16～82g/L氯化钠 2.5～12.5g/L聚乙烯吡咯烷酮 1～30g/L乙二胺四乙酸二钠 0.2～1g/L曲通100 0.5～3ml/L硫柳汞 0.05～0.25g/L以上磷酸氢二钠与磷酸二氢钾溶解混合后调PH值为7.6～8.4；其中试剂2的各组份及其浓度范围(浓度以克/升即g/L)如下磷酸氢二钠 1～5.5g/L磷酸二氢钾 0.25～1.5g/L过硫酸钾 12.5～65g/L氯化钠 4.5～22.5g/L 硫柳汞 0.05～0.25g/L以上磷酸氢二钠与磷酸二氢钾溶解混合后调PH值为6.8～7.6。其中试剂1的各组份及其浓度的优选范围(浓度以克/升即g/L或毫升/升即ml/L表示)如下磷酸二氢钾1～2g/L磷酸氢二钠25～50g/L氯化钠4～7.5g/L聚乙烯吡咯烷酮5～20g/L乙二胺四乙酸二钠 0.3～0.7g/L曲通100 0.75～1.75ml/L硫柳汞0.08～0.15g/L以上磷酸氢二钠与磷酸二氢钾溶解混合后调PH值为7.8～8.2；其中试剂2的各组份及其浓度范围(浓度以克/升即g/L)如下磷酸氢二钠1.6～3.3g/L磷酸二氢钾0.4～0.8g/L过硫酸钾 20～40g/L氯化钠7～15g/L硫柳汞0.08～0.15g/L以上磷酸氢二钠与磷酸二氢钾溶解混合后调PH值为7.0～7.4。其中试剂1的各组份及其浓度的最佳值(浓度以克/升即g/L或毫升/升即ml/L)如下磷酸二氢钾1.5g/L磷酸氢二钠35g/L氯化钠5g/L聚乙烯吡咯烷酮15g/L乙二胺四乙酸二钠 0.5g/L曲通100 1.2ml/L硫柳汞0.1g/L磷酸氢二钠与磷酸二氢钾混合后调PH值为8.0；其中试剂2的各组份及其浓度的最佳值(浓度以克/升即g/L)如下磷酸氢二钠2.5g/L 磷酸二氢钾 0.6g/L过硫酸钾30g/L氯化钠 10g/L硫柳汞 0.1g/L磷酸氢二钠与磷酸二氢钾混合后调PH值为7.2。在以上组分中，磷酸二氢钾和磷酸氢二钠形成稳定的缓冲液，利于试剂中各种成分的分散稳定性。乙二胺四乙酸二钠，可络合微量元素等金属离子，减少胆红素的自氧化。氯化钠，模拟人体内真实的生化环境，对于样本中胆红素成分保持原有空间构像，且有增强溶液的离子强度，产生原盐效应，加速反应速率的作用。聚乙烯吡咯烷酮是一种非离子型水溶性高分子化合物，可提高灵敏度。曲通100表面活性剂，是非水溶性间胆的增溶剂，是反应的促进剂、润滑剂，它提高检测的灵敏度，促进样本中各种物质溶解，减少样本脂浊等对测定的影响。过硫酸钾，主要起氧化性的作用。硫柳汞，主要起防腐剂的作用。本专利技术试剂1和试剂2的配置方法为常规方法，即试剂1和试剂2分别加入水如蒸馏水(蒸馏水的量根据实际需要加入)后各自混合搅匀即可。用本专利技术的化学氧化法测定总胆红素的试剂盒基于下列原理测定总胆红素总胆红素在表面活性剂存在下，被化学氧化剂氧化，生成胆绿素，可测定到350-550nm处吸光度的减少与总胆红素的浓度成正比。温度 30～45℃；比色杯光径 1.0cm。波长350-550nm(主)/450-650nm(副)(副波长可消除标本中其它基质的干扰，提高检测灵敏度，即仪器读取的吸光度A为A主波长-A副波长。)。样品(标准) 8μl；试剂1(R1) 180～320μl；试剂2(R2) 40～120μl样品(校准管以校准品作样品)加R1混匀，30-40℃孵育3～5min后读取吸光度A0；加入R2混匀，30-45℃孵育5min后，读取吸光度A1，ΔA＝A1-A0。计算 附图说明图1是现有技术的过硫酸钾氧化法的测定总胆红素的试剂盒线性范围示意图。图2是本专利技术化学氧化法的测定总胆红素的试剂盒线性范围示意图。图3是现有技术的过硫酸钾氧化法的测定总胆红素的试剂盒反应曲线图。图4是本专利技术化学氧化法的测定总胆红素的试剂盒反本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种化学氧化法测定总胆红素的试剂盒，其特征在于：该试剂盒由试剂１和试剂２组成，其中试剂１的各组份及其浓度范围（浓度以克／升即ｇ／Ｌ或毫升／升即ｍｌ／Ｌ表示）如下：磷酸二氢钾０．５～３ｇ／Ｌ磷酸氢二钠１６～８２ｇ／Ｌ氯化钠２．５～１２．５ｇ／Ｌ聚乙烯吡咯烷酮１～３０ｇ／Ｌ乙二胺四乙酸二钠０．２～１ｇ／Ｌ曲通１０００．５～３ｍｌ／Ｌ硫柳汞０．０５～０．２５ｇ／Ｌ以上磷酸氢二钠与磷酸二氢钾溶解混合后调ＰＨ值为７．６～８．４；其中试剂２的各组份及其浓度范围（浓度以克／升即ｇ／Ｌ）如下：磷酸氢二钠１～５．５ｇ／Ｌ磷酸二氢钾０．２５～１．５ｇ／Ｌ过硫酸钾１２．５～６５ｇ／Ｌ氯化钠４．５～２２．５ｇ／Ｌ硫柳汞０．０５～０．２５ｇ／Ｌ以上磷酸氢二钠与磷酸二氢钾溶解混合后调ＰＨ值为６．８～７．６。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：邹炳德，
申请(专利权)人：宁波美康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：97[中国|宁波]
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