一种枇杷叶药材的质量评价方法技术

本发明专利技术涉及枇杷叶药材指纹图谱建立的方法及其指纹图谱。首先采集１０批次以上的枇杷叶药材，制备供试品溶液，再配制对照品溶液，参照《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》，运用高效液相色谱法和高效毛细管电泳法进行测定，最后运用中药指纹图谱相似度计算软件分析（国家药典委员会推荐）。本发明专利技术的优点是方法简便、稳定、精密度、重现性好、易于掌握，能从色谱的整体特征面同高貌上把握枇杷叶的品种和质量情况，可将其作为枇杷叶质量评价和真伪鉴别的方法之一。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及枇杷叶药材的鉴别及质量评价方法，具体地说是用指纹图谱来鉴别和评价枇杷叶质娱的方 法，尤其涉及用高效毛细管电泳指纹图谱或高效液相色谱指纹图谱鉴别枇杷叶真伪和质量稳定的方法。背条技术枇杷叶为蔷薇科植物枇杷Eriobotrya japonica (Thunb.) Lindl,的干燥叶，是常用大宗中药材，具 有清肺.!h咳，降逆止呕等功效，用于肺热咳嗽，气逆喘急，胃热呕逆，烦热口渴等(国家药典委员会编.中 华人民共和国药典.第一部.北京:化学工业出版社，2005: 142)。近年来大量研究发现(林玉森，林文 津，林立强.枇杷叶研究现状与开发前景，中药材.2006， 29 (10): 1111-1114),枇杷叶的主要活性成分 有熊果酸、齐墩果酸、苦杏仁甙、皂苷类、多糖类等，A有止咳、祛痰、抗炎、保肝、止痛、抗肿瘤及调 节免疫等多种药理作用；临床可用于治疗呼吸道炎症、风湿性关节炎、肾小球肾炎、过敏性紫癜、荨麻疹、 湿疹及高血糖等病症。有关枇杷叶的质量标准，2005年版《中国药典》 一部只检査简单的性状、理化鉴别及水溶性浸出物， 尚未对有效成分的检测做出规定。目前已有文献报道用HPLC法测定枇杷叶药材指纹图谱的研究涨吕浩，吴 松吉，朱延萍，等.枇杷叶高效液相指纹图谱研究.时珍国医国药.2007, 18( 2): 269-271)。但由于不同K 域枇杷叶的质量差异较大，针对福建省地道药材枇把叶的高效液相色谱指纹图谱未见报道。毛细管电泳是一种高效分离技术，具有高效、快速、进样体积小、溶剂消耗少和抗污染能力强等特点， 在中药有效成分分析、指纹图谱研究方面显示出显著的优势(马欣,孙毓庆.银杏叶提取物的毛细管电泳指 纹图谱研究.中草药,2004, 35(8) :876-878)。目前，未见采用毛细管电泳指纹图谱鉴别及评价枇杷叶药 材质量的报道，本申请人对不同产地枇杷叶进行了考察比较，于2002年在福建莆田建成枇杷叶GAP示范种 植基地，实行GAP管理。为建立枇杷叶药材质量的综合评价方法，特以国家食品药品监督管理局2000年颁 发的关于中药注射剂指纹图谱技术要求，对福建枇杷主栽品种及枇杷叶GAP基地的10批以上枇杷叶药材进 行了测定，建立了福建地道药材枇杷叶指纹图谱测定方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用指纹图谱鉴别和评价枇杷叶药材质量的方法，并可将其用于枇杷叶质量控制及 其真伪鉴别的指标之一。本专利技术通过下列步骤实施-第一步，先建立枇杷叶的标准指纹图谱，主要步骤包括(a) 采集10批次以上具代表性的枇杷叶药材，并鉴定其品种及质量。(b) 枇杷叶药材标准品溶液的制备取枇杷叶药材，粉碎，过筛，干燥至恒重。精密称取枇杷叶粉末适量，用醇性溶剂(C数小于5，优选为甲醇或正丁醇)超声提取2 3次，合并提取液。滤过，滤液浓縮后， 加醇性溶剂(C数小于5，优选为甲醇或正丁醇)或者流动相稀释至一定浓度，摇匀，即得。进样前用微孔滤膜滤过。采用高效毛细管电泳色谱法测定的指纹图谱，其枇杷叶药材标准品溶液的具体制备优选的步骤为取 枇杷叶粉末(过四号筛)约lg，精密称定，加30倍量正丁醇，静置15min，超声提取3次，每次30min，滤过， 取滤液，加热挥去溶剂，用甲醇溶解，移至5ml量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀；即得。采用高效液相色谱法测定的指纹图谱，其枇杷叶药材标准品溶液的具体制备过程为取枇杷叶药材， 粉碎，过四号筛，粉末6(TC干燥至恒重。精密称取枇杷叶粉末lg，置50m慮瓶中，用甲醇30ml超声提取2 次，每次30min，合并提取液。滤过，滤液在水浴上浓縮，移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀， 即得。(c)参照物溶液的制备参照物为枇杷叶中的有效成分，优选为三萜酸类化合物，更优选为熊果酸。其 供试液具体制备方法为精密称取熊果酸对照品5 rag置于10 ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释到刻度，摇 匀，即得。(d)测定方法的选择测定方法为色谱法，优选为高效毛细管电泳法(HPCE)或高效液相色谱法(HPLC)。(f)测定精密吸取枇杷叶药材标准品溶液及参照物溶液，分别注入检测仪器，测定枇杷叶标准指纹图谱。采用高效毛细管电泳色谱法测定的指纹图谱，其优选的条件为毛细管柱(60cm长，50nm内径)；缓 冲液(0.1mol/L硼酸溶液0.2mol/L氢氧化钾溶液-4 : 2);分离电压20kV;实验温度25°C;检测波 长为200nm。理论板数按熊果酸峰计算不低于3000。采用高效液相色谱法测定的指纹图谱，其优选的条件为色谱柱Eclipse XDB-C18柱(4. 6mmX150咖， 5um),流动相甲醇1%醋酸水溶液(90 : 10)，检测波长215nm，流速1. Oml min '，柱温为室温，进 样量10 u 1。理论板数按熊果酸峰计算不低于2000。 第二步，以上述相同的方法测定待测枇杷叶样品指纹图谱；第三步，将待测枇杷叶样品指纹图谱与枇杷叶标准指纹图谱对比，筛选符合枇杷叶标准指纹图谱的枇杷叶 药材。以高效毛细管电泳色谱法测定的指纹图谱，其9个共有峰的相对保留时间的相对标准偏差RSD均小 于3% ，其中1号峰的平均相对保留时间RT为0.656,相对标准偏差RSD为0.62% ; 2号峰的平 均RT为0.712， RSD为0.50% ; 3号峰的平均RT为0.818, RSD为1.08% ; 4号峰的平均RT为 0.871， RSD为0.34% ;5号峰的平均RT为0.892， RSD为0.30% ;6号峰的平均RT为0.919 ，RSD 为0.29 % ; 7号峰的平均RT为0.953， RSD为0.62 % ; 8号峰为熊果酸，即参照物，其平均RT为 1.000 ， RSD为0.00% ; 7号峰的平均RT为1.070， RSD为0.54 % 。以高效液相色谱法测定的指纹图谱，其8个共有峰的相对保留时间的相对标准偏差RSD均小于3 % ,其中i号峰的平均相对保留时间RT为0.322,相对标准偏差RSD为2.34% ; 2号峰的平均RT 为0.344 ， RSD为2.17 % ; 3号峰的平均RT为0 .372, RSD为1.57 % ; 4号峰的平均RT为 0.574, RSD为2.01% ; 5号峰的平均RT为0.607， RSD为1.18% ; 6号峰的平均RT为0.762， RSD为2.92% ; 7号峰的平均RT为0.950， RSD为1.28% ; 8号峰为熊果酸，即参照物，其平均RT 为1.000 ， RSD为0.00% 。本专利技术的优点如下(1) 所建立的枇杷叶指纹图谱，能有效地表征枇杷叶药材的质量，对枇杷叶中的全部化学成分进行检 测，既不现实也没必要。大量的药理和临床研究结果表明枇杷叶中的三萜酸类成分为其重要的有效成分之 一，故选用其中的熊果酸作为参考品就很有代表性。(2) 以枇杷叶整个指纹图谱作为一个整体看待，注重各个构成指纹特征峰的前后顺序和相互关系，注 重整体面貌特征，既避免了因只测定一两个化学成分而判定枇杷叶整体质量的片面性，又减少了为质量达 标而人为处理的可能性，本专利技术为完整、准确评价枇杷叶的质量提供了新的对照标准，将为提高枇杷叶及 其中成药制剂的质量及疗效做出贡献。(3) 本本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种枇杷叶药材的质量评价方法，包括如下步骤：　第一步，先建立枇杷叶的标准指纹图谱，主要步骤包括：　（ａ）采集１０批次以上的枇杷叶药材，并鉴定其品种及质量；　（ｂ）枇杷叶药材标准品溶液的制备；　（ｃ）参照物溶液的制备；　（ｄ）测定方法的选择；　（ｆ）测定：精密吸取枇杷叶药材标准品溶液及参照物溶液，分别注入检测仪器，测定枇杷叶标准指纹图谱。　第二步，以上述相同的方法测定待测枇杷叶样品指纹图谱；　第三步，将待测枇杷叶样品指纹图谱与枇杷叶标准指纹图谱对比，筛选符合枇杷叶标准指纹图谱的枇杷叶药材。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：林玉霖，徐榕青，林文津，林力强，
申请(专利权)人：莆田市中医药研究所，
类型：发明
国别省市：35[中国|福建]