一种壳聚糖改性增强试纸检测灵敏度的方法技术

本发明专利技术公开了一种壳聚糖改性增强试纸检测灵敏度的方法，具体包括如下步骤：步骤1，制备壳聚糖溶液；步骤2，制作空白试纸条：步骤3，根据步骤2制作的空白试纸条制备壳聚糖改性试纸条；步骤4，制作壳聚糖改性侧流层析试纸；步骤5，对步骤4制作的试纸进行检测。本发明专利技术解决了现有侧流试纸灵敏度提升方法存在的操作复杂、成本高、耗时长及均一性差的问题。

A Method of Chitosan Modification to Enhance the Sensitivity of Test Paper

【技术实现步骤摘要】
一种壳聚糖改性增强试纸检测灵敏度的方法
本专利技术属于试纸灵敏度测试
，涉及一种壳聚糖改性增强试纸检测灵敏度的方法。
技术介绍
在资源受限环境中，侧流层析试纸已被广泛的应用于疾病诊断、食品安全检测和环境检测。相对于传统的成本昂贵、耗时、需要专业技术人员在实验操作才能完成的检测技术。例如：酶联免疫吸附实验、聚合酶链式反应；侧流层析试纸具有成本低廉、操作简单、快速且便携的优点。目前，侧流层析试纸已被用于检测不同的目标物，如：核酸、蛋白、病毒、细菌、重金属等标志物。但是，灵敏度低的缺点限制了侧流层析试纸的广泛应用。目前，研究者已使用不同的方法增强侧流层析试纸检测灵敏度。例如：基于酶的信号增强技术、基于探针的信号增强技术、减慢流速增强信号的技术和浓缩样品增强信号技术等。但是，这些技术需要昂贵的化学试剂或者复杂的编织过程等缺陷。许多研究者试图通过改变材料特性的方法提高纸基检测装置的灵敏度，但目前已有的方法中存在背景噪音高、材料合成时间长、操作复杂等缺陷，不能将其进行批量化生产。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种壳聚糖改性增强试纸检测灵敏度的方法，该方法解决了现有侧流试纸灵敏度提升方法存在的操作复杂、成本高、耗时长及均一性差的问题。本专利技术所采用的技术方案是，一种壳聚糖改性增强试纸检测灵敏度的方法，具体包括如下步骤：步骤1，制备壳聚糖溶液；步骤2，制作空白试纸条：步骤3，根据步骤2制作的空白试纸条制备壳聚糖改性试纸条；步骤4，制作壳聚糖改性侧流层析试纸；步骤5，对步骤4制作的试纸进行检测。本专利技术的特点还在于，步骤1的具体过程为：称取15～25mg壳聚糖溶解在100ml1％冰醋酸溶液中，稀释成0.005-25mg/ml的壳聚糖溶液。步骤2的具体过程为：将硝酸纤维素膜、结合垫、样品垫、吸水纸分别按顺序依次两两相互重叠粘贴在背胶板上，制成空白试纸，然后将空白试纸裁剪成3-7mm宽的试纸条。步骤3的具体过程为：将步骤1配制好的壳聚糖溶液取0.5-2μL直接滴加在步骤2制作的空白试纸条硝酸纤维素膜表面质控线和检测线上，放置于25℃-37℃烘箱烘干30-60min。步骤4的具体过程为：将修饰有检测探针的纳米金溶液取8-15μL滴加于结合垫上，分别将浓度为2.5nM-100nM的质控线探针溶液取0.5-2μL滴加于硝酸纤维素膜表面壳聚糖改性后的质控线位置处、将浓度为2.5nM-100nM的检测探针取0.5-2μL滴加于硝酸纤维素膜表面壳聚糖改性后的检测线位置处，制成壳聚糖改性的侧流层析试纸，然后将侧流层析试纸放置于25℃-37℃烘箱烘干60-120min。步骤5的具体过程为：取步骤4干燥后的侧流层析试纸，将60-120μL的待测样本用移液器滴加在侧流层析试纸的样品垫上，至吸水纸完全浸湿后，观察对照线和检测线的显色情况，若对照线和检测线均显色，表明检测结果为阳性；若对照线显色，检测线未显色，表明检测结果为阴性；若对照线和检测线均不显色，表明试纸失效。本专利技术的有益效果是，本专利技术通过改变对纸基材料(如：硝酸纤维素膜)的特性进行改变而增强试纸检测信号。与传统侧流层析试纸检测方法相比，其最大的改进之处将天然可降解的生物分子壳聚糖引入纸基材料表面，改变材料本身的孔隙率、孔径大小、表面官能团等特性，以期提高材料表面生物分子的吸附能力进而增强显色颗粒的数量，提高试纸检测信号。该方法成本低廉、绿色环保、简单、方便、可实现批量生产，应用广泛，可用于不同纸基检测平台进行核酸、蛋白、金属离子和化学分子等目标物的检测。附图说明图1为本专利技术一种壳聚糖改性增强试纸检测灵敏度的方法的实施例1中正常试纸的灵敏度检测结果示意图；图2为本专利技术一种壳聚糖改性增强试纸检测灵敏度的方法的实施例1中壳聚糖改性试纸的灵敏度检测结果示意图。具体实施方式下面结合附图和具体实施方式对本专利技术进行详细说明。本专利技术一种壳聚糖改性增强试纸检测灵敏度的方法，具体包括如下步骤：步骤1，制备壳聚糖溶液；称取15～25mg壳聚糖溶解在100ml1％冰醋酸溶液中，稀释成0.005-25mg/ml的壳聚糖溶液，备用；步骤2，制作空白试纸条：将硝酸纤维素膜、结合垫、样品垫、吸水纸分别按顺序依次两两相互重叠粘贴在背胶板上，制成空白试纸，然后将空白试纸裁剪成3-7mm宽的试纸条；步骤3，根据步骤2制作的空白试纸条制备壳聚糖改性试纸条；将步骤1配制好的壳聚糖溶液取0.5-2μL直接滴加在步骤2制作的空白试纸条硝酸纤维素膜表面质控线和检测线上，放置于25℃-37℃烘箱烘干30-60min。步骤4，制作侧流层析试纸；正常试纸的制备：将修饰有检测探针的纳米金溶液取8-15μL滴加于结合垫上，分别将浓度为2.5nM-100nM的质控线探针溶液取0.5-2μL滴加于硝酸纤维素膜表面的质控线位置处；将浓度为2.5nM-100nM的检测探针溶液取0.5-2μL滴加于硝酸纤维素膜表面检测线位置处，制成正常侧流层析试纸，然后将侧流层析试纸放置于25℃-37℃烘箱烘干60-120min；壳聚糖改性侧流层析试纸的制备：将修饰有检测探针的纳米金溶液取8-15μL滴加于结合垫上，分别将浓度为2.5nM-100nM的质控线探针溶液取0.5-2μL滴加于硝酸纤维素膜表面壳聚糖改性后的质控线位置处、将浓度为2.5nM-100nM的检测探针取0.5-2μL滴加于硝酸纤维素膜表面壳聚糖改性后的检测线位置处，制成壳聚糖改性的侧流层析试纸，然后将侧流层析试纸放置于25℃-37℃烘箱烘干60-120min；步骤5，取步骤4干燥后的侧流层析试纸，将60-120μL的待测样本用移液器滴加在侧流层析试纸的样品垫上，至吸水纸完全浸湿后，观察对照线和检测线的显色情况，若对照线和检测线均显色，表明检测结果为阳性；若对照线显色，检测线未显色，表明检测结果为阴性；若对照线和检测线均不显色，表明试纸失效。实施例1一种壳聚糖改性增强试纸检测灵敏度的方法，包括以下步骤：步骤1，制备壳聚糖溶液；称取15mg壳聚糖溶解在100ml1％冰醋酸溶液中，稀释成0.005mg/ml的壳聚糖溶液，备用；步骤2，制作空白侧流层析试纸条：将硝酸纤维素膜、结合垫、样品垫、吸水纸按顺序互相重叠2mm的方式粘贴在背胶板上，然后将其裁剪成3mm宽的试纸条；步骤3，将1.5μL浓度为0.005mg/ml的壳聚糖溶液直接滴加在空白试纸条的硝酸纤维膜表面质控线和检测线上，并放置于37℃烘箱烘干30min；步骤4，正常试纸的制备：将10μL修饰有检测探针的纳米金滴分别加于正常试纸条结合垫上，将0.5μL浓度为5nM的质控线滴加于正常硝酸纤维素膜表面质控线位置；将0.5μL浓度为5nM的检测线滴加于正常硝酸纤维素膜表面检测线位置，放置于37℃烘箱烘干120min。壳聚糖改性侧流层析试纸的制备：将修饰有检测探针的纳米金溶液取10μL滴加于结合垫上，分别将浓度为2.5nM的质控线探针溶液取0.5μL滴加于硝酸纤维素膜表面壳聚糖改性后的质控线位置处；将浓度为2.5nM的检测探针取0.5μL滴加于硝酸纤维素膜表面壳聚糖改性后的检测线位置处，制成壳聚糖改性的侧流层析试纸，然后将侧流层析试纸放置于25℃烘箱烘干60min；步骤5，取100μL浓度分别为50nM、25nM、10nM、5nM、2.5nM、1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种壳聚糖改性增强试纸检测灵敏度的方法，其特征在于：具体包括如下步骤：步骤1，制备壳聚糖溶液；步骤2，制作空白试纸条：步骤3，根据步骤2制作的空白试纸条制备壳聚糖改性试纸条；步骤4，制作壳聚糖改性侧流层析试纸；步骤5，对步骤4制作的试纸进行检测。

【技术特征摘要】
1.一种壳聚糖改性增强试纸检测灵敏度的方法，其特征在于：具体包括如下步骤：步骤1，制备壳聚糖溶液；步骤2，制作空白试纸条：步骤3，根据步骤2制作的空白试纸条制备壳聚糖改性试纸条；步骤4，制作壳聚糖改性侧流层析试纸；步骤5，对步骤4制作的试纸进行检测。2.根据权利要求1所述的一种壳聚糖改性增强试纸检测灵敏度的方法，其特征在于：所述步骤1的具体过程为：称取15～25mg壳聚糖溶解在100ml1％冰醋酸溶液中，稀释成0.005-25mg/ml的壳聚糖溶液。3.根据权利要求1所述的一种壳聚糖改性增强试纸检测灵敏度的方法，其特征在于：所述步骤2的具体过程为：将硝酸纤维素膜、结合垫、样品垫、吸水纸分别按顺序依次两两相互重叠粘贴在背胶板上，制成空白试纸，然后将空白试纸裁剪成3-7mm宽的试纸条。4.根据权利要求1所述的一种壳聚糖改性增强试纸检测灵敏度的方法，其特征在于：所述步骤3的具体过程为：将步骤1配制好的壳聚糖溶液取0.5-2μL直接滴加在步骤2制作的空白试纸条硝酸纤维素膜表面质控线和检测线上，...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐蕊华，刘丽娜，张素风，钱立伟，
申请(专利权)人：陕西科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61