铁线莲属植物通用SSR引物及应用制造技术

技术编号:22155899 阅读:79 留言:0更新日期:2019-09-21 06:27
本发明专利技术属于植物SSR引物开发技术领域,具体涉及一种铁线莲属植物通用SSR引物及应用。第1‑10对通用SSR引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.20所示。通用SSR引物同时适用于粗齿铁线莲、陕西铁线莲、太行铁线莲和大叶铁线莲四种种群材料,通用性好,将有助于为今后铁线莲属植物遗传多样性分析、种质资源保护、优异基因定位及遗传育种等方面奠定基础。

General SSR Primers for Clematis and Their Application

【技术实现步骤摘要】
铁线莲属植物通用SSR引物及应用
本专利技术属于植物SSR引物开发
,具体涉及一种铁线莲属植物通用SSR引物及应用。
技术介绍
铁线莲属(ClematisL.)隶属于毛茛科(Ranunculaceae),共有300多种植物,铁线莲属植物具有利尿、止痛祛风炎、抑制溃疡肿瘤的作用,且经济价值也很高。另外该属植物具有花色艳丽,花型丰富,姿态优美等特点,所以也可适用于绿化。铁线莲属植物不仅在城市园林上具有潜在的园林观赏价值和应用前景,同时还在医学方面有极高的应用价值,具有广阔的综合应用发展前景。目前,国内对大叶铁线莲的研究主要集中在生物学特性、化学成分分析、种子萌发等方面,分子水平上的研究尚未开展。简单重复序列(simplesequencerepeat,SSR)也可称为微卫星(microsatellite),广泛分布于真核生物基因组的编码区和非编码区。SSR分子标记的基本原理是首先根据微卫星重复序列两端的保守序列来设计引物,然后通过PCR扩增反应扩增微卫星片段,最后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增产物。SSR分子标记具有多态性强,共显性遗传和操作简单等优点,在基因定位、遗传多样性和比较基因组学等方面具有广泛的应用前景。采用SSR分子标记研究不同地理环境下的铁线莲属植物基因特性及其生理表型特性,对于优良铁线莲属植物品种的市场化应用具有重要价值。然而,由于目前我国的铁线莲属植物品种多,铁线莲属种群间的基因存在诸多差异,所以目前的SSR引物可适用的铁线莲属植物品种数量有限,通用性差。
技术实现思路
本专利技术提供了一种铁线莲属植物通用SSR引物及应用,提供的通用SSR引物同时适用于粗齿铁线莲、陕西铁线莲、太行铁线莲和大叶铁线莲四种种群材料,通用性好。本专利技术的第一个目的是提供一种铁线莲属植物通用SSR引物,第1-10对通用SSR引物的核苷酸序列依次如SEQIDNO.1~SEQIDNO.20所示。本专利技术的第二个目的是提供一种上述的铁线莲属植物通用SSR引物在粗齿铁线莲、陕西铁线莲、太行铁线莲和大叶铁线莲四种种群材料中的应用。优选的,上述应用中,利用第1-10对通用SSR引物进行PCR反应时,退火温度Tm依次为52℃、53℃、52℃、51℃、53℃、52℃、50℃、51℃、52℃、52℃。优选的,上述应用中,利用第1-10对通用SSR引物进行PCR反应时,PCR程序如下:95℃5min;94℃50s,Tm45s,72℃60s,30循环;72℃10min。优选的,上述应用中,所述铁线莲属植物来源于河南省的新安县青要山、栾川龙峪湾、偃师双龙山、新乡万仙山、栾川鸡冠山、汝阳王坪、栾川老君山、偃师万安山、栾川养子沟。与现有技术相比,本专利技术提供的一种铁线莲属植物通用SSR引物及鉴定方法及应用,至少具有以下有益效果:本专利技术首先从100对SSR引物中筛选出78对能扩增出目的条带的引物,然后从78对引物中进一步的筛选,得到58对能扩增出多态性的引物,最后从58对引物中继续筛选,得到19对多态性较好的引物,然后研究这19对引物在铁线莲属种群间的通用性,最终获得能同时用于粗齿铁线莲、陕西铁线莲、太行铁线莲和大叶铁线莲四种种群材料PCR鉴定的通用SSR引物,通用性好。通过开发这些通用性SSR引物,将有助于为今后铁线莲属植物遗传多样性分析、种质资源保护、优异基因定位及遗传育种等方面奠定基础。附图说明图1是SSR引物RAD-1在20个铁线莲属个体的通用性PCR电泳结果;图2是SSR引物RAD-4在20个铁线莲属个体的通用性PCR电泳结果;图3是SSR引物RAD-5在20个铁线莲属个体的通用性PCR电泳结果;图4是SSR引物RAD-8在20个铁线莲属个体的通用性PCR电泳结果;图5是SSR引物RAD-10在20个铁线莲属个体的通用性PCR电泳结果;图6是SSR引物RAD-12在20个铁线莲属个体的通用性PCR电泳结果;图7是SSR引物RAD-13在20个铁线莲属个体的通用性PCR电泳结果;图8是SSR引物RAD-14在20个铁线莲属个体的通用性PCR电泳结果;图9是SSR引物RAD-16在20个铁线莲属个体的通用性PCR电泳结果;图10是SSR引物RAD-18在20个铁线莲属个体的通用性PCR电泳结果。图1-10中,1-5泳道为粗齿铁线莲的5个供试个体材料、6-10泳道为陕西铁线莲5个供试个体材料、11-15泳道为太行铁线莲5个供试个体材料、16-20泳道为大叶铁线莲5个供试个体材料,M泳道为Marker。具体实施方式为了使本领域技术人员更好地理解本专利技术的技术方案能予以实施,下面结合具体实施例和附图对本专利技术作进一步说明。下面各实施例以及上述
技术实现思路
中未注明具体条件的试验方法,均按照本领域的常规方法和条件进行。本专利技术提供了10对多态性且通用性均较好的SSR引物,第1-10对SSR引物的核苷酸序列依次如SEQIDNO.1~SEQIDNO.20所示。我们还提供了另外9对多态性较好的SSR引物,第11-19对SSR引物的核苷酸序列依次如SEQIDNO.21~SEQIDNO.38所示。19对SSR引物特点如表1所示。表119对SSR引物特点为了检测19对多态性较好的SSR引物的种间通用性,我们进行了19对SSR引物的种间通用性检测实验,实验过程及结果如下:1.供试材料:我们从铁线莲属中选取粗齿铁线莲、陕西铁线莲、太行铁线莲和大叶铁线莲四种材料,每个种群分别选取5个个体。粗齿铁线莲(Clematisargentilucida):为毛茛科铁线莲属植物,叶片为卵形或椭圆状卵形,且叶片边缘有粗大的锯齿状牙齿,另外,其藤茎入药,能杀虫解毒。陕西铁线莲(Clematisshensiensis):为毛茛科铁线莲属植物,有纵条纹和短柔毛,花瓣为白色,耐寒、耐旱。另外,因其花大色艳,具有独特的风格,因此常被用来点缀围墙、假山、栅栏等。太行铁线莲(Clematiskirilowii):为毛莨科铁线莲属野生植物,其茎有短小的柔毛,花瓣为白色。另外,该植物的根茎能起到祛风湿和活血通络的作用。大叶铁线莲(Clematisheracleifolia):为多年生草本或灌木,隶属于毛茛科(Ranunculaceae)铁线莲属(ClematisL.),具有明显的主根,且主根粗大,具有膨大的结节。大叶铁线莲具有叶对生、被毛和花瓣为蓝紫色等特点,另外其花序有很强的观赏性,具有较强的耐荫能力。供试材料20个铁线莲属个体的来源见表2。表2铁线莲属供试材料的信息2.实验方法2.1DNA的提取本实验提取粗齿铁线莲、陕西铁线莲、太行铁线莲和大叶铁线莲的叶片DNA时采用的是改良的CTAB法。首先在CTAB溶液中提前加入β-巯基乙醇,并使巯基乙醇的最终体积分数为1%,两者混合摇匀,然后将其放入65℃的水浴锅中预热,预热时间为10min。CTAB总用量=700μL×需要提取的DNA样品个数,巯基乙醇总用量=7μL×需要提取的DNA样品个数。单个DNA样品提取步骤如下:(1)取100mg干重材料(拇指盖大小)加入至2mLEP管中,并在EP管中放入2个钢珠,然后用SCIENTZ-48型高通量组织研磨器充分研磨,研磨时间通常为90s,研磨至粉末状,随后加入预热好的CTAB溶液700μL,充分震荡。(2)将上述E本文档来自技高网
...

【技术保护点】
1.一种铁线莲属植物通用SSR引物,其特征在于,第1‑10对通用SSR引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.20所示。

【技术特征摘要】
1.一种铁线莲属植物通用SSR引物,其特征在于,第1-10对通用SSR引物的核苷酸序列依次如SEQIDNO.1~SEQIDNO.20所示。2.根据权利要求1所述的铁线莲属植物通用SSR引物在粗齿铁线莲、陕西铁线莲、太行铁线莲和大叶铁线莲四种种群材料中的应用。3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,利用第1-10对通用SSR引物进行PCR反应时,退火温度Tm在48-55...

【专利技术属性】
技术研发人员:周晓君张凯卢晓玉王海亮马文杰程彦伟孙姗姗韩建明
申请(专利权)人:洛阳师范学院
类型:发明
国别省市:河南,41

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1