一株降解聚乙烯同时产生烷烃的季也蒙毕赤酵母制造技术

一株降解聚乙烯同时产生烷烃的季也蒙毕赤酵母，涉及一株季也蒙毕赤酵母。本发明专利技术提供一株季也蒙毕赤酵母，为聚乙烯的生物降解及烷烃的生产提供了新的菌源。该季也蒙毕赤酵母为季也蒙毕赤酵母Meyerozyma guilliermondii ZJC‑1，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰路1号院3号，保藏日期为2018年12月17日，保藏编号为CGMCC No：16956。本发明专利技术季也蒙毕赤酵母Meyerozyma guilliermondii ZJC‑1可降解聚乙烯同时产生烷烃物质，为聚乙烯的生物降解及烷烃的生物合成提供新的菌源。用于降解聚乙烯，也用于制备烷烃。

Pichia mongolica strain degrading polyethylene and producing alkanes at the same time

【技术实现步骤摘要】
一株降解聚乙烯同时产生烷烃的季也蒙毕赤酵母
本专利技术涉及一株季也蒙毕赤酵母。
技术介绍
当前，大部分的废旧聚乙烯塑料主要采用焚烧和填埋的方式进行处理，其中大量聚乙烯塑料废物的填埋导致了严重的环境危害，如破坏土壤理化性质，进而造成土壤硬化，而焚烧会产生CO、HCl、NOx、SO2及二恶英等大量有毒气体进而污染大气环境，这两种处理方式均对环境造成严重的污染，因而，废旧聚乙烯塑料的一个有希望的解决方案是将它们转化为有价值的液体燃料或化学原料。现阶段烷烃的主要来源是天然气和石油。尽管各地的天然气组分不同，但几乎都含有75％的甲烷、15％的乙烷及5％的丙烷，其余的为较高级的烷烃。烷烃不仅是燃料的重要来源，而且也是现代化学工业的原料。目前微生物法生产烷烃是在微生物体内通过一系列代谢通路合成烷烃，该合成途径还存在着代谢副产物过多和烷烃碳链长度不易控制等问题，而且细胞中脂肪酸的合成途径在转录水平和蛋白水平上都被严格地调控，故在自然条件下微生物细胞中无法实现大量积累其合成途径的中间代谢产物。所以，生物降解聚乙烯产生烷烃具有投资小、无需添加其他大量化学试剂、运行费用低，无需对细胞内部进行改造等优点，具有巨大的潜力。总之，自然条件下微生物由于受限于细胞中脂肪酸的合成途径在转录水平和蛋白水平上被严格地调控，无法实现大量积累其合成途径的中间代谢产物。因此，目前利用微生物生产烷烃仍处于实验室阶段，并且细胞体内的烷烃分离面临巨大挑战。目前关于利用聚乙烯转化为烷烃类的研究，大多为物理化学方法，例如JiaX等研究报道在温和条件下使用串联催化交叉烷烃复分解方法使不同分子量、不同类型的聚乙烯转化为有用的液体燃料和蜡，但鲜少有研究报道通过微生物降解聚乙烯生成烷烃，因此，探求能够降解聚乙烯而且同时产生烷烃的菌株具有很好的研究价值，为生物降解聚乙烯以及混合烷烃物质的合成提供了新的研究方向。
技术实现思路
本专利技术提供一株季也蒙毕赤酵母，可以降解聚乙烯的同时产生烷烃，为聚乙烯的降解及烷烃的产生提供新的菌源。本专利技术可降解聚乙烯同时产生烷烃物质的季也蒙毕赤酵母MeyerozymaguilliermondiiZJC-1，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰路1号院3号，保藏日期为2018年12月17日，保藏编号为CGMCCNo：16956。本专利技术季也蒙毕赤酵母MeyerozymaguilliermondiiZJC-1分离筛选自蜡螟幼虫肠道液中。本专利技术季也蒙毕赤酵母MeyerozymaguilliermondiiZJC-1在YPD固体培养基上培养2d后，单菌落直径为2～3mm，呈乳白色，圆形，表面光滑有光泽，质地较为粘稠，不透明。经美兰染色法染色后在油镜下可以观察到该菌为椭球形。本专利技术季也蒙毕赤酵母MeyerozymaguilliermondiiZJC-1可在YPD培养基上生长，最适生长温度30℃。本专利技术季也蒙毕赤酵母MeyerozymaguilliermondiiZJC-1可降解聚乙烯，为降解聚乙烯提供了新的菌源。本专利技术季也蒙毕赤酵母MeyerozymaguilliermondiiZJC-1以聚乙烯为唯一碳源可产生烷烃类物质。本专利技术季也蒙毕赤酵母MeyerozymaguilliermondiiZJC-1属于毕赤酵母属(Pichia)，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰路1号院3号，保藏日期为2018年12月17日，保藏编号为CGMCCNo：16956。附图说明图1为本专利技术菌株MeyerozymaguilliermondiiZJC-1的PCR扩增电泳图；图2为本专利技术菌株MeyerozymaguilliermondiiZJC-1与GenBank中收录的相近菌株进行同源性比对所构建的系统进化树；图3为菌株MeyerozymaguilliermondiiZJC-1降解前后的聚乙烯表面水接触角图。；图4为菌株MeyerozymaguilliermondiiZJC-1降解聚乙烯前后聚乙烯的表面化学结构的红外谱图；图5为菌株季也蒙毕赤酵母MeyerozymaguilliermondiiZJC-1在60天期间降解聚乙烯前后的聚乙烯的失重率。图6为本专利技术MeyerozymaguilliermondiiZJC-1降解聚乙烯产生的烷烃的实体显微镜图；图7为本专利技术菌株MeyerozymaguilliermondiiZJC-1降解聚乙烯产生的烷烃的红外光谱图；图8为菌株MeyerozymaguilliermondiiZJC-1降解聚乙烯产生的烷烃的气质联用谱图。具体实施方式本专利技术技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。具体实施方式一：本实施方式可降解聚乙烯的季也蒙毕赤酵母MeyerozymaguilliermondiiZJC-1，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰路1号院3号，保藏日期为2018年12月17日，保藏编号为CGMCCNo：16956。本实施方式季也蒙毕赤酵母MeyerozymaguilliermondiiZJC-1由蜡螟幼虫肠道液中筛选得到，并按照下述方法进行鉴定。对筛选到的菌株进行分子生物学鉴定：将MeyerozymaguilliermondiiZJC-1接种于YPD液体培养基中，在30℃的恒温振荡培养箱120r/min培养16～24h，取2mL菌液8000rpm离心收集菌体，按照OMEGAHPFungalDNAKit试剂盒提取菌株基因组DNA。以菌株总DNA为模板，使用通用引物NL1:5＇－GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG－3＇和NL4:5＇－GGTCCGTGTTTCAAGACGG－3＇及金唯智PCR试剂盒对菌株26SrDNAD1/D2区进行PCR扩增，PCR扩增条件：94℃预变性2min，94℃变性30s，59℃退火30s，72℃延伸60s，32个循环；最后72℃延伸10min，4℃保存。采用1％琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，在紫外凝胶成像系统中对比Marker分析PCR扩增产物大小。PCR扩增体系：50μL反应体系为：5μLDNA模板，5μL10×PCRBuffer，4μLdNTP(2.5mmol-1)，1μL引物NL1，1μL引物NL4，0.5μLTaqDNApolymerase，34.5μLddH2O。如图1所示，MeyerozymaguilliermondiiZJC-1的扩增条带清晰明亮，无杂带，无拖尾，无非特异性扩增。对菌株ZJC-1的26SrDNA的PCR产物送往生工生物工程有限公司进行测序，将测序获得序列用BLAST程序与GenBank中的序列进行对比，并选取相似度较高的序列，使用MEGA7.0软件构建菌株系统发育树。分子生物学鉴定结果：菌株MeyerozymaguilliermondiiZJC-1的26SrDNA序列长度为593bp，将获得序列用BLAST程序与GenBank中的所有序列进行核苷酸同源性对比，查看碱基序列相似性。选取同源性比较高的已知菌株的ITS序列和和所测菌株ITS序列采用MEGA7.0软件构建系统发育本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株降解聚乙烯同时产生烷烃的季也蒙毕赤酵母，其特征在于该季也蒙毕赤酵母Meyerozyma guilliermondiiZJC‑1，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰路1号院3号，保藏日期为2018年12月17日，保藏编号为CGMCC No：16956。

【技术特征摘要】
1.一株降解聚乙烯同时产生烷烃的季也蒙毕赤酵母，其特征在于该季也蒙毕赤酵母MeyerozymaguilliermondiiZJC-1，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰路1号院3号，保藏日期为2018年12月17日，保藏编号为CGMCCNo：16956。2...

【专利技术属性】
技术研发人员：张杰，盖玉杰，王滨松，刘长莉，张国财，池明眼，王珊珊，郝孔利，董欣欣，姬彦飞，高超，王天顺，
申请(专利权)人：东北林业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23