河蚌抗氧化活性多糖及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种河蚌抗氧化活性多糖及其制备方法，属于天然物质的提取技术领域，其分子量范围为23‑62kDa，单糖残基中含有葡萄糖、半乳糖和鼠李糖。其制备方法包括如下步骤：将河蚌下脚料加水后超高压处理，打浆，均质，得到匀浆液；将上述匀浆液中加入酶，酶解，离心，得到酶解液；利用Sevage法脱除上述酶解液中的游离蛋白，上清液浓缩，醇沉，得到河蚌粗多糖；将上述河蚌粗多糖用离子水溶解后，分离，干燥，得到河蚌多糖。本发明专利技术河蚌抗氧化活性多糖具有较强的抗氧化效果和抗骨质疏松症的作用，有望成为预防、治疗骨质疏松症的新选择；本发明专利技术制备方法能提高河蚌抗氧化活性多糖的得率，酶解效果佳，所制多糖的生物活性高。

Antioxidant polysaccharides from mussel and their preparation methods

【技术实现步骤摘要】
河蚌抗氧化活性多糖及其制备方法
本专利技术属于天然物质的提取
，具体涉及一种河蚌抗氧化活性多糖及其制备方法。
技术介绍
河蚌，是一种普通的贝壳类水生动物，分布十分广泛，在我国的绝大多数河流湖泊中都有分布，可产珍珠，是高品质珍珠的来源。河蚌浑身是宝，有着食用、饲用、药用、护肤、工艺、生态修复等价值。我国是淡水珍珠养殖大国，淡水珍珠的产量占世界总产量的85％以上。蚌肉和蚌壳是育珠产业的副产品，资源十分可观。蚌壳可作为添加剂添加到饲料中，也可作为人们主食的添加料。蚌肉营养价值很高，除可食用外，多糖及多肽还具有一定的药用价值。然而河蚌的下脚料很少被食用或药用，多用作饲料、肥料或被废弃掉。为充分利用河蚌资源，提高整个珍珠产业的经济效益，解决河蚌副产物对环境的污染问题，亟需对蚌肉深入研究和开发利用。其中贝类多糖是存在于贝类体内的一种生物活性物质，它的主要成分是酸性粘多糖，其结构是由氨基己糖与己糖醛酸两种己糖衍生物所组成的二糖单元聚合而成的直链高分子化合物，由葡萄糖、氨基葡萄糖、半乳糖、葡萄糖醛酸这4种基本单元组成。多糖具有抗癌、抗病毒、调节细胞的生长与衰老和增强机体免疫功能等生理调节功能。另外，多糖可以改善食品的食用品质、加工特性和外观特性，可用于抑制脂质氧化，稳定酸性饮料，也可作为乳化剂等。国内外众多学者对其展开了研究和探索。中国授权公告号CN101503721B的专利技术专利提供了一种蚌肉多糖的提取方法，所述方法是以蚌肉斧足部分为原料，经碱提-离心-酶解-离心-超滤-活性炭去色素-醇沉-干燥，得到较高纯度的蚌肉多糖。其有益效果主要体现在：利用本专利技术方法，加工而成的蚌肉多糖不仅外观漂亮而且纯度高，具有较好的保健功能和一定的药用功能，无毒性，安全性高，而且制备工艺成熟，设备投资少，利于工业化生产，在食品、药品和保健品领域具有广阔前景。中国授权公告号CN101250570B的专利技术专利提供了一种三角帆蚌多糖的制备方法。将三角帆蚌肉搅碎，热水抽提；60～100目过滤，浓缩滤液后加入乙醇沉淀，将沉淀用热水复溶，调节pH至7～10，按复溶物料中的蛋白重量计加入0.3～0.6％的复配蛋白酶，30～60℃酶解4～8h；复配蛋白酶的组成为：碱性蛋白酶(Alcalase)和复合蛋白酶(Protamex)等量混合；酶解后的物料在80～90℃下灭酶，用乙醇二次沉淀，沉淀物真空干燥，粉碎过60目，即得三角帆蚌多糖制品。实验证明：上述方法制备的三角帆蚌精制多糖具有诱导小鼠脾淋巴细胞增殖的能力，可以提高小鼠血清溶血素抗体积数值，能提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率及吞噬指数，有多种生物活性，具有作为药用资源及保健食品的应用前景。中国授权公告号CN101985480B的专利技术专利提供了一种河蚌多糖，经紫外分光光度计检测多糖含量，以葡萄糖(C6H12O6)计算其多糖含量为55％-90％。经高效液相色谱检测其中的单糖组分有葡萄糖、葡萄糖醛酸、氨基葡萄糖等。上述河蚌多糖通过醇处理，水提取、压滤和干燥等工艺制得。临床验证结果认为本专利技术河蚌多糖治疗阴虚内热症及阴虚内热症伴癌痛者疗效确切，且服用方便、安全、无毒副作用，可用于制备滋阴清热、消肿止痛和癌症止痛药物。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的在于提供一种具有较强的抗氧化效果，可抑制破骨细胞前体细胞分化成熟为破骨细胞和抑制破骨细胞骨吸收以及破骨细胞的肌动蛋白环的形成，也对破骨细胞成活具有重要作用，具有抗骨质疏松症的作用，有望成为预防、治疗骨质疏松症的新选择的河蚌抗氧化活性多糖。本专利技术为实现上述目的所采取的技术方案为：河蚌抗氧化活性多糖，其分子量范围为23-62kDa，其单糖残基中含有葡萄糖、半乳糖和鼠李糖。抗氧化活性多糖中葡萄糖的连接方式都是以1→4糖苷键为主，存在1→4、1→6和1→3、1→4分支以及一些末端糖基(1→)，半乳糖和鼠李糖绝大部分或全部都是以1→3糖苷键为主，穿插在葡萄糖主链和支链中，抗氧化活性多糖不具有三股螺旋结构，能够清除H2O2、清除O2·和DPPH·自由基、鳌合Fe2+、还原Fe3+，具有抗氧化作用；更优选地，河蚌抗氧化活性多糖的浓度为1.8-2.3mg/mL时，抗氧化效果最佳。优选地，抗氧化活性多糖的分子量范围为30-56kDa。该分子量范围内的多糖的抗氧化效果更佳。优选地，抗氧化活性多糖的单糖残基中，葡萄糖、半乳糖和鼠李糖的摩尔比为1:(0.15-0.20):(0.22-0.33)。上述河蚌抗氧化活性多糖不仅具有较强的抗氧化效果，而且可抑制破骨细胞前体细胞分化成熟为破骨细胞和抑制破骨细胞骨吸收，还抑制破骨细胞的肌动蛋白环的形成，而肌动蛋白环是成熟破骨细胞具有骨吸收作用的重要标志，也对破骨细胞成活具有重要作用，所以上述河蚌抗氧化活性多糖具有抗骨质疏松症的作用，有望成为预防、治疗骨质疏松症的新选择。本专利技术的第二个目的在于提供一种提高河蚌抗氧化活性多糖的得率，酶解效果佳，所制多糖的生物活性高的河蚌抗氧化活性多糖的制备方法。本专利技术为实现上述目的所采取的技术方案为：河蚌抗氧化活性多糖的制备方法，包括以下步骤：S1步骤：将河蚌下脚料加水后超高压处理，打浆，均质，得到匀浆液；S2步骤：将上述匀浆液中加入酶，酶解，离心，得到酶解液；S3步骤：利用Sevage法脱除上述酶解液中的游离蛋白，上清液浓缩，醇沉，得到河蚌粗多糖；S4步骤：将上述河蚌粗多糖用离子水溶解后，分离得到分子量为20-65kDa部分，干燥，得到河蚌多糖。超高压处理一方面能够改变细胞膜通透性，导致细胞内容物流出，不仅抑制河蚌下脚料中微生物的生长，避免微生物的存在对后续多糖的提取造成影响，同时提高匀浆液的保存时长，而且提高河蚌抗氧化活性多糖的得率；另一方面能够使得蛋白质的高级结构受到了破坏而发生变性，进而导致与这些蛋白质相关的生物功能受到破坏，提高小分子蛋白质的溶解性，不仅导致河蚌下脚料中微生物的失活，避免微生物的代谢产物对多糖的提取及活性影响，而且使得河蚌粗多糖中的蛋白质更易于被脱除，同时在酶解过程中能够增加蛋白酶和蛋白质的接触机会，提高酶解效果。酶解法是指采用蛋白酶水解肽键，将生物活性多糖释放出来的一种多糖提取方法，具有作用条件温和、得率高、多糖的生物活性保留性完好等优点，而且还可使后续的浓缩和除蛋白工艺更简易、省时，更适合于王业化生产。优选地，S1步骤中河蚌下脚料和水的料液比为1:3-5(g/mL)。优选地，S1步骤中超高压处理压力为220-280MPa，处理时间为18-25min。优选地，S2步骤中酶选自木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶或它们的混合物。优选地，S2步骤中酶的添加量为0.25-0.34％，酶解温度为50-60℃、时间为1-2h。本专利技术还公开了上述河蚌抗氧化活性多糖的用途，在制备抗氧化药物、食品或化妆品中的用途。本专利技术还公开了上述河蚌抗氧化活性多糖的用途，在制备治疗和/或预防骨质疏松症制剂中的用途。骨质疏松症(osteoporosis，OP)是一种老年退化性全身骨科疾病，主要特点为骨密度降低及骨微结构破坏,易导致发生骨折，常见脊柱、髋和桡骨三个部位。新骨形成主要由成骨细胞介导，而骨量减少主要取决于破骨细胞的功能，破骨功能强于成骨功能导致骨质疏松症。因此，正常骨重建过程中，能抑制破骨细胞前体细胞分化本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.河蚌抗氧化活性多糖，其特征在于：其分子量范围为23‑62kDa，所述抗氧化活性多糖的单糖残基中含有葡萄糖、半乳糖和鼠李糖。

【技术特征摘要】
1.河蚌抗氧化活性多糖，其特征在于：其分子量范围为23-62kDa，所述抗氧化活性多糖的单糖残基中含有葡萄糖、半乳糖和鼠李糖。2.根据权利要求1所述的河蚌抗氧化活性多糖，其特征在于：所述抗氧化活性多糖的分子量范围为30-56kDa。3.根据权利要求1或2所述的河蚌抗氧化活性多糖，其特征在于：所述抗氧化活性多糖的单糖残基中，葡萄糖、半乳糖和鼠李糖的摩尔比为1:(0.15-0.20):(0.22-0.33)。4.权利要求1或2或3所述的河蚌抗氧化活性多糖的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：S1步骤：将河蚌下脚料加水后超高压处理，打浆，均质，得到匀浆液；S2步骤：将所述匀浆液中加入酶，酶解，离心，得到酶解液；S3步骤：利用Sevage法脱除所述酶解液中的游离蛋白，上清液浓缩，醇沉，得到河蚌粗多糖；S4步骤：将所述河蚌粗多糖用离子水溶解后，分离得到分子量为20-65kDa部分，干...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢雨欣，
申请(专利权)人：浦江县美泽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33