本发明专利技术属于肿瘤治疗和分子免疫学领域，具体地，本发明专利技术涉及一组抗CTLA‑4的单克隆抗体及其在肿瘤和免疫医学中的应用。本发明专利技术通过杂交瘤技术获得了一组在阻断CTLA‑4与CD80/CD86的相互作用方面有优异效果的抗CTLA‑4单克隆抗体，并成功的对其进行了人源化改造。所述抗体在制备阻断，调节CTLA‑4水平相关药物以及治疗癌症相关药物方面表现出巨大的应用前景。
A Group of Monoclonal Antibodies Against CTLA-4 and Their Medical Use
【技术实现步骤摘要】
一组CTLA-4单克隆抗体及其医药用途
本专利技术属于肿瘤治疗和分子免疫学领域，具体地，本专利技术涉及一组抗CTLA-4的单克隆抗体及其在肿瘤和免疫医学中的应用。技术背景细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4，是一种由CTLA-4基因编码的跨膜蛋白，该基因位于人类第2号染色体2q33。CTLA-4是免疫球蛋白超级家族的一员，由胞外V区，跨膜区和胞浆区组成。CTLA-4与T细胞表面的协同刺激分子受体CD28具有同源性，两者竞争结合其配体B7-1(CD80)或B7-2(CD86)，这类配体主要表达于抗原递呈细胞表面。与CD28相比，CTLA-4与CD80和CD86的结合亲和力更高，因此能够竞争和阻断CD28介导的激活作用。CTLA-4通常表达在抑制性T细胞(Tregs)和活化状态的T细胞表面上，与B7类分子结合后，抑制T细胞的激活，参与免疫反应的负调控,所以CTLA-4在免疫调节中起到非常重要的作用。T细胞的激活需要两个信号的刺激，第一个信号来自T细胞受体(TCR)特异性结合抗原递呈细胞(APC)表面的抗原肽-MHC复合物，第二个信号通路则需要共刺激分子(如CD28)的参与，当CD28和B7-1/B7-2(CD80/CD86)结合后可以进一步活化T细胞，促进其成熟和增殖。目前的研究表明，在免疫应答过程中，CTLA-4通过下列途径下调T细胞的功能：其一，CTLA-4通过其与CD80/CD86的高亲和力，竞争性阻断CD28与CD80/86共刺激信号的传递，进而抑制T细胞的增殖，减少IL-2的分泌。其二，通过降低CD80/CD86在抗原递呈细胞(APC)的表达水平或者通过反式内吞作用将CD80/CD86分子从抗原递呈细胞(APC)表面移除，从而减少了CD28参与的T细胞激活。其三，CTLA-4可以通过介导树突状细胞结合CD80/CD86并诱导色氨酸降解酶IDO的表达，抑制TCR信号。此外，CTLA-4还可以通过招募抑制性分子结合到免疫突触，诱导产生调节性细胞因子,从而抑制APC和TCR信号的传递。CTLA-4信号紊乱与疾病的发生和发展密切相关。CTLA-4基因敲除小鼠会出现严重的淋巴组织增生，并且在出生后四周内会因大量的组织浸润和器官破坏而死亡。在过敏性脑脊髓炎(EAE)实验模型中，CTLA-4抗体通过阻断CTLA-4对T细胞的负调控信号，进一步加剧自身免疫性疾病，增加死亡率。研究表明，CTLA-4通过负向调节免疫反应参与癌症的发生，阻断CTLA-4信号传导可以抑制肿瘤生长。体内实验表明，CTLA-4抗体可以阻断CTLA-4介导的免疫抑制信号而促进机体的免疫功能，可用于治疗肿瘤，如纤维肉瘤，结肠癌和前列腺癌等。CTLA-4阻断性抗体还可与多种治疗方案，如化学疗法、放射疗法、疫苗、以及其他抗体药物联合使用，进一步提高肿瘤的治疗效果。虽然目前已经有少量CTLA-4抗体药物上市但是其核心技术都掌握在国外厂商手中。因此开发新的具有自主知识产权的阻断CTLA-4与CD80/CD86结合的抗体及其人源化抗体是一个迫切的任务。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术通过杂交瘤技术获得了一组在阻断CTLA-4与CD80/CD86的相互作用方面有优异效果的抗CTLA-4单克隆抗体，并成功的对其进行了人源化改造。所述抗体在制备阻断，调节CTLA-4水平相关药物以及治疗癌症相关药物方面有巨大的应用前景。本专利技术提供一组CTLA-4单克隆抗体或其抗原结合片段，所述重链的CDR1的氨基酸序列选自SEQIDNO：37、43、49中的一种；所述重链的CDR2的氨基酸序列选自SEQIDNO：38、44、50中的一种；所述重链的CDR3的氨基酸序列选自SEQIDNO：39、45、51中的一种；所述轻链的CDR1氨基酸序列选自SEQIDNO：40、46、52中的一种；所述轻链的CDR2的氨基酸序列选自SEQIDNO：41、47、53中的一种；所述轻链的CDR3的氨基酸序列选自SEQIDNO：42、48、54中的一种；其中所述抗原结合片段的重链和轻链包含分别跨越所述抗体的重链和轻链的CDR1到CDR3的氨基酸序列。进一步的，上述抗体或其抗原结合片段，所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQIDNO：3、7、11、15、19、23、27、31、35中的一种；所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQIDNO：4、8、12、16、20、24、28、32、36中的一种。进一步的，上述抗体或其抗原结合片段，所述重链和轻链经过人源化；所述人源化重链可变区的氨基酸序列选自SEQIDNO：55、59、63中的一种；所述人源化轻链可变区的氨基酸序列选自SEQIDNO：56、60、64中的一种。进一步的，上述抗体或其抗原结合片段，所述人源化重链的全长氨基酸选自SEQIDNO：57、61、65中的一种；所述人源化轻链的全长氨基酸选自SEQIDNO：58、62、66中的一种。进一步的，本专利技术公开了编码上述氨基酸片段的DNA序列，所述序列包括SEQIDNO：1、2、5、6、9、10、13、14、17、18、21、22、25、26、29、30、33、34。进一步的，本专利技术公开了表达上述DNA序列的载体。进一步的，本专利技术公开了所述CTLA-4单克隆抗体或其抗原结合片段在制备如下药物中的用途：阻断CTLA-4与B7结合的药物、调节CTLA-4活性或CTLA-4水平的药物、解除CTLA-4对机体免疫抑制的药物、激活T淋巴细胞的药物或者提高T淋巴细胞中IL-2表达的药物。进一步的，本专利技术公开了一种单克隆抗体偶联物，包括单克隆抗体和偶联部分，其中，所述单克隆抗体为上述抗CTLA-4单克隆抗体或其抗原结合片段，所述偶联部分为选自放射性核素、药物、毒素、细胞因子、酶、荧光素、和生物素中的一种或多种。进一步的，本专利技术公开了上述单克隆抗体偶联物在制备如下药物中的用途：阻断CTLA-4与B7结合的药物，调节CTLA-4活性或CTLA-4水平的药物、解除CTLA-4对机体免疫抑制的药物、激活T淋巴细胞的药物或者提高T淋巴细胞中IL-2表达的药物。进一步的，本专利技术公开了上述单克隆抗体偶联物在制备预防或者治疗肿瘤的药物中的用途。本专利技术的进步性表现为：本专利采用哺乳动物细胞表达系统制备重组CTLA-4作为抗原免疫小鼠，将小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合获得杂交瘤细胞。通过对大量杂交瘤细胞的多次克隆及筛选后，得到一些单克隆杂交瘤细胞株。这些杂交瘤细胞株能够产生和CTLA-4特异性结合的单克隆抗体，并且这些单克隆抗体能够有效阻断CTLA-4与CD80或CD86的结合，并能促进金黄色葡萄球菌B型肠毒素(SEB)刺激的外周血单核细胞分泌细胞因子IL-2。通过RT-PCR克隆编码抗体轻链和重链可变区的基因，采用互补决定簇嫁接方法构建人源化抗体。体外功能试验表明，这些人源化的CTLA-4抗体能特异性结合CTLA-4蛋白，高效的阻断CTLA-4与CD80或CD86的结合，并能促进T细胞分泌细胞因子IL-2。以上实验结果表明本专利技术所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，或者包含本专利技术所述单克隆抗体或其抗原结合片段的单克隆抗体偶联物在制备阻断CTLA-4与B7结合的药物、调节CTLA-4活性或CTLA-4水平的药物、解除CTLA-4对机体免疫抑制本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一组CTLA‑4单克隆抗体或其抗原结合片段，包括重链和轻链，其特征在于，所述重链的CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO：37、43、49中的一种；所述重链的CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：38、44、50中的一种；所述重链的CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：39、45、51中的一种；所述轻链的CDR1氨基酸序列选自SEQ ID NO：40、46、52中的一种；所述轻链的CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO：41、47、53中的一种；所述轻链的CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO：42、48、54中的一种；其中所述抗原结合片段的重链和轻链包含分别跨越所述抗体的重链和轻链的CDR1到CDR3的氨基酸序列。
【技术特征摘要】
1.一组CTLA-4单克隆抗体或其抗原结合片段，包括重链和轻链，其特征在于，所述重链的CDR1的氨基酸序列选自SEQIDNO：37、43、49中的一种；所述重链的CDR2的氨基酸序列选自SEQIDNO：38、44、50中的一种；所述重链的CDR3的氨基酸序列选自SEQIDNO：39、45、51中的一种；所述轻链的CDR1氨基酸序列选自SEQIDNO：40、46、52中的一种；所述轻链的CDR2的氨基酸序列选自SEQIDNO：41、47、53中的一种；所述轻链的CDR3的氨基酸序列选自SEQIDNO：42、48、54中的一种；其中所述抗原结合片段的重链和轻链包含分别跨越所述抗体的重链和轻链的CDR1到CDR3的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的一组CTLA-4单克隆抗体或其抗原结合片段，所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQIDNO：3、7、11、15、19、23、27、31、35中的一种；所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQIDNO：4、8、12、16、20、24、28、32、36中的一种。3.根据权利要求2所述的一组CTLA-4单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链和轻链经过人源化；所述人源化重链可变区的氨基酸序列选自SEQIDNO：55、59、63中的一种；所述人源化轻链可变区的氨基酸序列选自SEQIDNO：56、60、64中的一种。4.根据权利要求3所述的一...
【专利技术属性】
技术研发人员：王振生，孙锴，潘剑峰，陈均勇，孙键，区日山，
申请(专利权)人：东大生物技术苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。