O型口蹄疫病毒新型基因工程亚单位疫苗制造技术

技术编号:22153800 阅读:24 留言:0更新日期:2019-09-21 05:48
本发明专利技术揭示了一种免疫组合物,其包含:O型口蹄疫病毒结构蛋白VP3和VP1蛋白,以及,O型口蹄疫病毒结构蛋白VP2和/或VP4蛋白。进一步的,所述免疫组合物还可包括O型口蹄疫病毒结构蛋白VP0。所述免疫组合物可用于制备O型口蹄疫病毒新型基因工程亚单位疫苗,该疫苗的抗原性、免疫原性和功能与天然蛋白质相似,表达水平较高,免疫原性强,对动物没有致病性,并且本发明专利技术的疫苗可以通过生物反应器大规模无血清悬浮培养制备,大大降低了疫苗生产成本。

New Genetically Engineered Subunit Vaccine of Foot and Mouth Disease Virus Type O

【技术实现步骤摘要】
O型口蹄疫病毒新型基因工程亚单位疫苗
本专利技术涉及动物免疫药物
,具体而言,涉及一种O型口蹄疫病毒新型基因工程亚单位疫苗。
技术介绍
口蹄疫(foot-and-mouthdisease,FMD),是一种由口蹄疫病毒(footandmouthdiseasevirus,FMDV)感染偶蹄类动物(如猪、牛、羊、鹿等)所产生的疾病,其特征为受感染之偶蹄类动物的口、足等部位皮肤会出现水泡,从而造成部分动物死亡。FMDV属于小RNA病毒科(Picornaviridae)口疮病毒属(Aphthovirus),是偶蹄类动物高度传染性疾病(口蹄疫)的病原。在病毒的中心为一条单链的正链RNA,由大约8000个碱基组成,是感染和遗传的基础;周围包裹着蛋白质决定了病毒的抗原性、免疫性和血清学反应能力;病毒外壳为对称的20面体。FMDV的免疫是依赖T细胞的B细胞应答,疫苗接种主要诱导中和抗体的产生。FMDV包括A、O、C、Asia1和SAT1、SAT2、SAT3等7个没有交叉免疫保护的血清型,在长期的相互传播感染中又形成了80多个亚型,为口蹄疫的防控带来严峻挑战。患口蹄疫的动物会出现发热、跛行和在皮肤与皮肤黏膜上出现泡状斑疹等症状。对于畜类,口蹄疫的症状主要是二至三天后快速下降的高烧;口中的水疱导致粘性或泡沫状唾液的过度分泌并流淌出口外;足部的水泡有可能破裂并导致残废。成年动物感染后可能会伴有数月无法恢复的体重减轻,以及成年雄性动物的睾丸肿胀,对于母牛,牛奶产量会明显减少。虽然大部分动物得病后可自行恢复,但该疾病严重时亦可能导致心肌炎(心脏肌肉感染)或死亡,对于新生动物特别如此。一些受感染动物可能没有症状,它们不会出现发烧或是任何得病症状;但这些动物也是口蹄疫载体,它们同样会传染该疾病。口蹄疫的感染一般为地域性,病毒通过直接接触受感染的动物传播给易感染动物,或者通过被污染的畜舍或运输牲畜的货车。病畜和带毒畜是主要的传染源,它们既能通过直接接触传染,又能通过间接接触传染(例如分泌物、排泄物、畜产品、污染的空气、饲料等)传给易感动物。动物管理人(如农场工人)的外衣或皮肤、动物接触过的水,和未煮过的食物碎屑以及包含感染动物产品的饲料添加剂都可能是病毒的携带源。过去,口蹄疫曾在全球许多地区(包括欧洲、非洲、亚洲和南美洲)发生,该病的大范围蔓延及迅速的传播引起了国际社会的广泛关注。世界动物卫生组织将其列在A类动物疾病名单之首,我国政府也将其排在一类动物传染病首位。我国作为世界第一的猪肉产销国,猪肉安全问题密切关系着我国畜牧业的良性可持续发展。现在随着分子生物学和免疫学不断发展进步,性价比高、安全性好的新型疫苗也是势在必行。目前有一些研究是使用大肠杆菌分别表达VP1、VP3和VP0三个蛋白,然后体外组装,此方法蛋白纯化难度大,蛋白体外组装效率非常低;另有一些研究是使用多个杆状病毒分别表达VP1、VP0和VP3蛋白,然后以多个病毒共感染Sf9细胞从而共表达这三个蛋白,此方法需要病毒感染复数很大,同一个细胞需要同时感染2个或者更多的病毒,存在效率非常低的问题。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种免疫组合物,以解决现有技术中的问题。为了实现上述目的,根据本专利技术的一个方面,提供了一种免疫组合物,其包含:采用序列如SEQIDNO:1所示的核酸分子或者与SEQIDNO:1的核苷酸序列95%以上相同的核酸分子编码的O型口蹄疫病毒结构蛋白VP3蛋白;采用序列如SEQIDNO:12所示的核酸分子或者与SEQIDNO:12的核苷酸序列95%以上相同的核酸分子编码的O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1蛋白;以及,选自O型口蹄疫病毒结构蛋白VP2蛋白或O型口蹄疫病毒结构蛋白VP4蛋白的一种或两种的任意组合。本专利技术进一步的技术方案是:所述的O型口蹄疫病毒结构蛋白VP3蛋白包含SEQIDNO:19的氨基酸序列或者与SEQIDNO:19的全长氨基酸序列95%以上相同的氨基酸序列;所述的O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1蛋白包含SEQIDNO:22的氨基酸序列或者与SEQIDNO:22的全长氨基酸序列95%以上相同的氨基酸序列。本专利技术进一步的技术方案是:所述免疫组合物还包含O型口蹄疫病毒结构蛋白VP2、VP4中的一种或者两种以上的任意组合;其中,所述的O型口蹄疫病毒结构蛋白VP2蛋白包含SEQIDNO:21的氨基酸序列或者与SEQIDNO:21的全长氨基酸序列95%以上相同的氨基酸序列;所述的O型口蹄疫病毒结构蛋白VP4蛋白包含SEQIDNO:23的氨基酸序列或者与SEQIDNO:23的全长氨基酸序列95%以上相同的氨基酸序列。本专利技术进一步的技术方案是:其中,所述的O型口蹄疫病毒结构蛋白VP2蛋白是通过序列如SEQIDNO:8所示的核酸分子或者与SEQIDNO:8的核苷酸序列95%以上相同的核酸分子编码获得;所述的O型口蹄疫病毒结构蛋白VP4蛋白是通过序列如SEQIDNO:16所示的核酸分子或者与SEQIDNO:16的核苷酸序列95%以上相同的核酸分子编码获得。本专利技术进一步的技术方案是:所述免疫组合物进一步包含O型口蹄疫病毒结构蛋白VP0,所述的O型口蹄疫病毒结构蛋白VP0蛋白是通过序列如SEQIDNO:4所示的核酸分子或者与SEQIDNO:4的核苷酸序列95%以上相同的核酸分子编码获得。本专利技术进一步的技术方案是:所述O型口蹄疫病毒结构蛋白VP0蛋白包含SEQIDNO:20的氨基酸序列或者与SEQIDNO:20的全长氨基酸序列95%以上相同的氨基酸序列。本专利技术进一步的技术方案是:所述免疫组合物为包含所述O型口蹄疫病毒结构蛋白VP3、VP1、VP2蛋白的组合物。本专利技术进一步的技术方案是:所述免疫组合物为包含所述O型口蹄疫病毒结构蛋白VP3、VP1、VP4蛋白的组合物。本专利技术进一步的技术方案是:所述免疫组合物为包含所述O型口蹄疫病毒结构蛋白VP3、VP1、VP2和VP0蛋白的组合物。本专利技术进一步的技术方案是:所述免疫组合物为包含所述O型口蹄疫病毒结构蛋白VP3、VP1、VP2、VP4蛋白的组合物。本专利技术进一步的技术方案是:所述免疫组合物为包含所述O型口蹄疫病毒结构蛋白VP3、VP1、VP4和VP0蛋白的组合物。本专利技术进一步的技术方案是:所述免疫组合物为包含所述O型口蹄疫病毒结构蛋白VP3、VP1、VP2、VP4和VP0蛋白的组合物。本专利技术的另一目的在于提供一种所述免疫组合物的制备方法,所述方法包括以下步骤:S1、将O型口蹄疫病毒结构蛋白的基因克隆到对应的穿梭载体上,得到重组穿梭载体;S2、将重组穿梭载体转化到含有杆状病毒基因组的DH10Bac菌中,重组穿梭载体中目的基因表达框定向插入杆状病毒基因组质粒中,获得含有目的基因表达框的重组杆状病毒基因组质粒;S3、将重组杆状病毒基因组质粒转染昆虫细胞获得重组杆状病毒;S4、将获得的重组杆状病毒接种昆虫细胞,在反应器中大规模生产O型口蹄疫病毒结构蛋白;S5、将S4步骤中获得的O型口蹄疫病毒结构蛋白加入到佐剂中,即得所述免疫组合物。本专利技术进一步的技术方案是,步骤S1包括:将O型口蹄疫病毒结构蛋白VP3和VP1的编码基因以及选自VP2、VP4、VP0中的任意一种、两种或者三种的表达框均克隆到同一穿梭载体上,即得到所述的重组穿梭载体。优选的本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种免疫组合物,其特征在于包含:采用序列如SEQ ID NO:1所示的核酸分子或者与SEQ ID NO:1的核苷酸序列95%以上相同的核酸分子编码的O型口蹄疫病毒结构蛋白VP3蛋白;采用序列如SEQ ID NO:12所示的核酸分子或者与SEQ ID NO:12的核苷酸序列95%以上相同的核酸分子编码的O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1蛋白;以及,选自O型口蹄疫病毒结构蛋白VP2蛋白或O型口蹄疫病毒结构蛋白VP4蛋白的一种或两种的任意组合。

【技术特征摘要】
1.一种免疫组合物,其特征在于包含:采用序列如SEQIDNO:1所示的核酸分子或者与SEQIDNO:1的核苷酸序列95%以上相同的核酸分子编码的O型口蹄疫病毒结构蛋白VP3蛋白;采用序列如SEQIDNO:12所示的核酸分子或者与SEQIDNO:12的核苷酸序列95%以上相同的核酸分子编码的O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1蛋白;以及,选自O型口蹄疫病毒结构蛋白VP2蛋白或O型口蹄疫病毒结构蛋白VP4蛋白的一种或两种的任意组合。2.根据权利要求1所述的免疫组合物,其特征在于,所述的O型口蹄疫病毒结构蛋白VP3蛋白包含SEQIDNO:19的氨基酸序列或者与SEQIDNO:19的全长氨基酸序列95%以上相同的氨基酸序列;所述的O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1蛋白包含SEQIDNO:22的氨基酸序列或者与SEQIDNO:22的全长氨基酸序列95%以上相同的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的免疫组合物,其特征在于,所述的O型口蹄疫病毒结构蛋白VP2蛋白包含SEQIDNO:21的氨基酸序列或者与SEQIDNO:21的全长氨基酸序列95%以上相同的氨基酸序列;所述的O型口蹄疫病毒结构蛋白VP4蛋白包含SEQIDNO:23的氨基酸序列或者与SEQIDNO:23的全长氨基酸序列95%以上相同的氨基酸序列。4.根据权利要求1所述的免疫组合物,其特征在于,所述免疫组合物进一步包含O型口蹄疫病毒结构蛋白VP0蛋白,所述的O型口蹄疫病毒结构蛋白VP0蛋白是通过序列如SEQIDNO:4所示的核酸分子或者与SEQIDNO:4的核苷酸序列95%以上相同的核酸分子编码获得。5.根据权利要求4所述的免疫组合物,其特征在于,所述的O型口蹄疫病毒结构蛋白VP0蛋白包含SEQIDNO:20的氨基酸序列或者与SEQIDNO:20的全长氨基酸序列95%以上相同的氨基酸序列。6.根据权利要求3所述的免疫组合物,其特征在于,其中,所述的O型口蹄疫病毒结构蛋白VP2蛋白是通过序列如SEQIDNO:8所示的核酸分子...

【专利技术属性】
技术研发人员:曹文龙孔迪滕小锘易小萍张大鹤
申请(专利权)人:苏州世诺生物技术有限公司
类型:发明
国别省市:江苏,32

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