一种抗丙型肝炎病毒感染合成肽及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药工程技术领域，提供了一种抗丙型肝炎病毒感染合成肽及其在制备预防或治疗丙型肝炎病毒感染药物中的用途，本发明专利技术的合成肽具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。通过实验证实，该合成肽能够抑制HCV对靶细胞的感染，并且可以有效阻断病毒蛋白和基因组RNA在靶细胞中的表达与复制，从而证实了本发明专利技术的合成肽具备有效阻断HCV对宿主细胞的感染能力。此外，通过细胞毒性实验，本发明专利技术各浓度的合成肽对细胞正常的生理功能不会产生任何影响，安全性高。因此，本发明专利技术为丙型肝炎的防治和治疗提供了新的思路，具备潜在的良好的临床应用价值。

A Synthetic Peptide Against Hepatitis C Virus Infection and Its Application

【技术实现步骤摘要】
一种抗丙型肝炎病毒感染合成肽及其应用
本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种抗丙型肝炎病毒感染合成肽、其在制备抗丙肝药物中的潜在医学应用以及以该合成肽为活性成分的药物。
技术介绍
近年来，生物活性肽研究已成为全球医药研制的热点之一。它不仅具有来源广泛、安全性好、靶向专一和生物活性强等优点，而且具有免疫调节、抗病毒、抗肿瘤、抗血栓、抗氧化、降低胆固醇等多种生理功能，成为当前国际药品与保健品行业竞相追逐的研究对象，应用发展前景十分看好。由于多数生物活性肽都是分离自各种动物、植物和微生物，其本身就属于动物生理活性调节因子，不易产生耐药，甚至有替代某些抗生素的趋势，且不会对环境造成污染，这也是研究者们发掘其药用、食用及保健作用的关键所在。此外，肽类物质的结构类型呈现多样化，具有强大的药物活性筛选潜力，可利用半合成、全合成等方法进行人工合成，并能保持其真实结构和活性功能。当前，病毒性疾病已成为威胁人类健康和生命安全的重大威胁之一。虽然临床上已研发有多种抗病毒药物，但是大部分病毒感染仍然缺乏有效的治疗办法，无法治愈。近些年的相关研究表明，最早在先天免疫系统中发现的多肽还可通过抑制病毒入侵、病毒蛋白合成以及提高宿主免疫功能等方面来发挥抗病毒效应，从而为抗病毒药物的研发提供了新的来源，尤其是在针对病毒入侵环节的人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)抑制肽成功应用于临床治疗之后，多肽药物更是成为抗病毒研究的焦点(GómaraMJ,HaroI.UpdatingtheuseofsyntheticpeptidesasinhibitorsofHIV-1entry.CurrentMedicinalChemistry,2014,21(10):1188-1200)。研究者们通过不同的方法，尝试建立多种寻找病毒抑制肽的方法，包括从病毒自身编码的结构蛋白氨基酸序列或从噬菌体展示文库中筛选(CastelG,ChtéouiM,HeydB,TordoN.Phagedisplayofcombinatorialpeptidelibraries：applicationtoantiviralresearch.Molecules,2011,16(5):3499-3518；SkalickovaS,HegerZ,KrejcovaL,PekarikV,BastlK,JandaJ,KostolanskyF,VareckovaE,ZitkaO,AdamV,KizekR.PerspectiveofUseofAntiviralPeptidesagainstInfluenzaVirus.Viruses,2015,7(10):5428-5442.)。比如，针对I类包膜病毒(如HIV-1、中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)和流感病毒等)入侵靶细胞的过程中形成六股螺旋结构这一特点，设计研制的肽类抗病毒药物可特异性地抑制该类病毒的感染，像源自HIV跨膜蛋白gp41七肽重复结构的C34或T20多肽可强烈抑制HIV感染；通过对噬菌体展示文库或随机肽库的反复筛选，也已获得了针对流感病毒、单纯疱疹病毒、汉坦病毒、肠道病毒71型、辛诺柏病毒等多种病毒的抑制肽。丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus，HCV)属于黄病毒家族的肝炎病毒属，是引起丙型肝炎(以下简称丙肝)的病原体。HCV感染者中约80％会发展成慢性丙肝，其中约33％会逐渐发展成肝硬化、肝纤维化甚至肝癌。据估计，当前全球约1.8亿人感染HCV，年新增患者300～400万例，每年约35万人死于与丙肝相关的肝病，是全球重要的公共健康问题。尤其是我国，作为HCV感染的高发区，丙肝患者约一千万。由于HCV存在高度的变异性和复杂性，目前尚无预防或治疗丙肝的疫苗，因此，抗HCV治疗的研究更加备受关注。目前，临床上针对HCV感染的治疗药物主要包括长效干扰素(pegylatedinterferon，Peg-IFN)联合利巴韦林(ribavirin，RBV)和直接抗病毒药物(direct-actingantiviralagents，DAAs)两大类。前者治疗毒副作用大且病毒应答率低，尤其是对于HCVI基因型(为我国主要流行基因型)患者应答率仅40-50％；DAAs药物主要针对的是HCV的NS3/4A蛋白酶、NS5A蛋白酶及NS5B多聚酶，自2011年美国食品药品管理局(FDA)批准以来，总体的临床治愈率约达90％，但随着DAAs使用人群的不断增加，该药存在的一些问题也逐渐开始暴露，比如，耐药变异，在HBV/HCV共感染患者中用药会刺激HBV复制(不幸的是，我国乙肝感染者甚多)，DAAs药物间存在相互作用，价格比较昂贵(故而我国绝大部分HCV患者仍然实行以Peg-IFN/RBV为主的治疗方案)，药物本身的不良反应也逐渐显现，包括肝损伤、肾损伤、皮肤损伤等，此外，全口服方案是否可以降低肝细胞癌的风险也需进一步明确等一系列问题。因此，对于我国HCV患者尤其是临床难治丙肝患者的预防和治疗，仍需要进一步深入研究，以便开发出新型且可行的治疗药物方案。
技术实现思路
本专利技术是为解决上述问题而进行的，从前期自行设计的随机肽库中筛选出一种能抑制HCV感染的生物活性肽。本专利技术的另一目的在于，提供该生物活性肽在制备预防或治疗丙型肝炎病毒感染药物中的用途，以及其作为抗丙型肝炎病毒感染药物活性组分的用途。本专利技术的主要技术方案是：利用现有的网络资源和常用生物学软件，结合包膜病毒入侵与感染特点，尤其是位于病毒颗粒表面的包膜蛋白负责介导病毒与宿主细胞的黏附与结合以及随后的内吞、融合等步骤这一重要理论，自主设计出一套随机肽库；然后，以人肝癌细胞系(Huh7.5.1)作为HCV感染的靶细胞，以基于细胞培养HCV(HCVcc)系统为感染模型，以期筛选出能抑制HCV感染能力的生物活性肽。我们发现，合成肽QLP-09在HCV感染Huh7.5.1细胞中发挥着重要的抑制作用，它能下调病毒蛋白的表达，阻断病毒基因组RNA的复制，从而显著降低HCV的感染活性。本专利技术的第一方面，提供了一种抗丙型肝炎病毒感染合成肽(编号为QLP-09)，该合成肽具有如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列，具体如下：IWMAFYGCMIRCNAPELDNTLSG。该合成肽为包含23个氨基酸的肽段，主要靶向作用于位于HCV病毒颗粒表面的包膜蛋白与宿主细胞的互作环节。本专利技术涉及的抗HCV合成肽副作用小，活性高，合成、纯化工艺简单方便，生产成本不高。具有阻断HCV感染宿主细胞(Huh7.5.1细胞)，抑制病毒与宿主细胞的入侵以及在宿主细胞中复制增殖的作用。专利技术人对前期自行设计的随机肽库进行病毒感染抑制实验筛选，结果发现该合成肽能够抑制HCV对靶细胞的感染(参见说明书附图1)，并且可以有效阻断病毒蛋白和基因组RNA在靶细胞中的表达与复制(参见实施例3和4)，证实本专利技术的合成肽可以有效阻断HCV对宿主细胞的感染能力。因此，本专利技术的第二方面，特别提供了合成肽在制备预防或治疗丙型肝炎病毒感染药物中的用途。特别地，该用途指的是阻断病毒蛋白和基因组RNA在靶细胞中的表达与复制的用途。本专利技术的第三方面，提供了一种抗丙型肝炎病毒感染的药物组合物，该药物组合物以上述合成肽或其药学上可接受的盐为活性组分，还包括药学上可接受本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗丙型肝炎病毒感染合成肽，其特征在于，该合成肽具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种抗丙型肝炎病毒感染合成肽，其特征在于，该合成肽具有如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列。2.权利要求1所述的合成肽在制备预防或治疗丙型肝炎病毒感染药物中的用途。3.根据权利要求2所述的合成肽在制备预防或治疗丙型肝炎病毒感染药物中的用途，其特征在于，所述用途为阻断病毒蛋白和基因组RNA在靶细胞中的表达与复制的用途。4.一种抗丙型肝炎病毒感染的药物组合物，其特征在于，以权利要求1所述的合成肽或其药学上可接受的盐...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦照玲，戚中田，刘彬，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海,31