【技术实现步骤摘要】
一种石墨烯/聚苯胺纳米线阵列免疫传感器的制备方法及应用
一种石墨烯/聚苯胺纳米线阵列生物传感器的制备方法及应用,属于生物传感
技术介绍
2012年9月发表的《降钙素原急诊临床应用的专家共识》指出:脓毒症患者的降钙素原水平明显高于非脓毒症患者,且降钙素原升高对细菌感染导致的脓毒症特异性很高,可作为诊断脓毒症和鉴别严重细菌感染的生物标志物,与单纯的临床检测标准相比,降钙素原检测可显著提高脓毒症诊断的敏感性和特异性,因此,实现血清中降钙素原浓度的快速、灵敏、精准检测,对于脓毒症的及早发现与治疗具有重要意义;目前用于检测降钙素原的方法主要是电化学生物传感器,由于电致化学发光技术结合了化学发光与电化学两种技术的优势,除了具有易于操作、可控性强、响应速度快等特点,其灵敏度也要比电化学更高,检测限也更低。基于电致化学发光技术制备的生物传感器具备了比电化学技术更强的优势,这为免疫新方法的提出提供了一种更为强有力的技术支持,本专利技术正是基于电致化学发光技术而提出的一种生物传感器的制备方法,旨在为弥补现有检测方法的不足,为降钙素原的早期临床检测提供一种全新的分析方法。
技术实现思路
本专利技术的技术任务之一是为了弥补现有检测技术的不足,提供一种石墨烯/聚苯胺纳米线阵列生物传感器的制备方法,该方法制备过程简单、成本低、信号响应迅速,大大缩短了检测的时间,省时省力。本专利技术的技术任务之二是提供所述免疫传感器的用途,该传感器能够快速检测降钙素原,具有灵敏度高、特异性强、重现性好的优点,检出限为1.2fg/mL,线性范围5fg/mL-50ng/mL,在临床检测中有着较大的潜 ...
【技术保护点】
1.一种石墨烯/聚苯胺纳米线阵列免疫传感器的制备方法及应用,其特征在于,包括以下步骤:(1)将直径为4 mm的玻碳电极依次用1.0 μm、0.3 μm、0.05 μm氧化铝做抛光处理,用超纯水冲洗干净;(2)在玻碳电极表面滴加6 μL、浓度为2 ~ 4 mg/mL捕获抗体Ab1标记的钯杂化石墨烯/聚苯胺溶液,置于4 °C下晾干;(3)滴加3 μL、质量分数为1 ~ 3%的牛血清白蛋白溶液,以封闭电极表面的非特异性活性位点,用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面,置于4 °C晾干;(4)滴加6 μL降钙素原的标准溶液或未知浓度的溶液,37 °C下孵化0.5 ~ 2 h,用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面,置于4 °C晾干;(5)滴加6 μL、浓度为2 ~ 4 mg/mL的检测抗体Ab2标记的铈掺杂二硫化锡‑鲁米诺溶液,用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面,置于4 °C晾干,传感器构建完毕。
【技术特征摘要】
1.一种石墨烯/聚苯胺纳米线阵列免疫传感器的制备方法及应用,其特征在于,包括以下步骤:(1)将直径为4mm的玻碳电极依次用1.0μm、0.3μm、0.05μm氧化铝做抛光处理,用超纯水冲洗干净;(2)在玻碳电极表面滴加6μL、浓度为2~4mg/mL捕获抗体Ab1标记的钯杂化石墨烯/聚苯胺溶液,置于4°C下晾干;(3)滴加3μL、质量分数为1~3%的牛血清白蛋白溶液,以封闭电极表面的非特异性活性位点,用pH7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面,置于4°C晾干;(4)滴加6μL降钙素原的标准溶液或未知浓度的溶液,37°C下孵化0.5~2h,用pH7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面,置于4°C晾干;(5)滴加6μL、浓度为2~4mg/mL的检测抗体Ab2标记的铈掺杂二硫化锡-鲁米诺溶液,用pH7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面,置于4°C晾干,传感器构建完毕。2.如权利要求1所述的一种石墨烯/聚苯胺纳米线阵列免疫传感器的制备方法及应用,所述捕获抗体Ab1标记的钯杂化石墨烯/聚苯胺溶液,其特征在于,制备步骤如下:(1)向0.13~0.15g的四氯钯酸钠与0.13~0.15g的柠檬酸钠固体中,加入30~50mL的去离子水,将混合固体均匀溶解,然后,将0.5~0.7mL的硼氢化钠溶液逐滴加入混合液,最后,通过持续搅拌得到黑色的钯纳米粒子,避光储存于4°C下;(2)将0.4~0.6g氧化石墨烯加入含有90~110mL无水二甲基甲酰胺的烧杯当中,随后,在冰水浴的条件下,取2.78~2.98g1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐加入到上悬浮液中,并且在氮气氛围下搅拌1~3h,然后加入1.8~2.0mL的1,3-二氨基丙烷在室温下搅拌过夜,最后用水和乙醇分别洗涤后干燥得到氨基化氧化石墨烯;(3)取5~15mg氨基化氧化石墨烯分散在5~15mL盐酸溶液中,经过超声波处理15~45min,将其分散均匀,悬浊液放在冰浴中冷却至0°C,然后将0.4~0.6mL苯胺加入到氨基化氧化石墨烯中继续搅拌,并缓慢加入5~15mL溶有1.25~1.45g过硫酸钾的溶液,该反应在冰浴中持续4~6h后,加入浓度为0.1mol/L的盐酸溶液去除所有未反应的反应物,用去离子水和己烷各洗涤3次后,干燥12h,得到石墨烯/聚苯胺溶液;(4)将1~3mL、浓度为2mg/mL的石墨烯/聚苯胺溶液与1~3mL的钯纳米粒子溶液混合,避光振荡24~48h,离心分离弃去上清液,分散到1mL超纯水中,制得钯杂化石墨烯...
【专利技术属性】
技术研发人员:魏琴,杨磊,张诺,李玉阳,冯瑞卿,张勇,范大伟,
申请(专利权)人:济南大学,
类型:发明
国别省市:山东,37
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