检测及鉴定结核菌和非结核菌感染的诊断方法及结核杆菌对利凡平耐药性的确认及其试剂组技术

本申请涉及一种基于QuantaMatrix测定平台同时检测和鉴定结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌以及判断结核分枝杆菌的利福平和异烟肼耐药性的诊断方法和试剂组。

Diagnostic methods for detection and identification of tuberculosis and non-tuberculosis infections and confirmation of drug resistance of tuberculosis to rifampicin and its reagent group

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】检测及鉴定结核菌和非结核菌感染的诊断方法及结核杆菌对利凡平耐药性的确认及其试剂组
本申请涉及一种基于QuantaMatrix测定平台同时检测及鉴定结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌以及判断结核分枝杆菌的利福平耐药性的诊断方法和试剂组。
技术介绍
结核病是一种由结核分枝杆菌(mycobacteriumtuberculosis,MTB)引起的慢性传染病，其在韩国的患病率正在稳步下降，但仍高于其他国家。尽管使用了有效的抗结核药物，但无法治愈的结核病，如耐多药结核病和广泛耐药结核病，已经增加。全世界每年约有800万人患上结核病，每年大约有200万人死于这种疾病。因此，快速判断难以治疗的结核分枝杆菌的耐药性对于患者的有效治疗和存活是必不可少的。结核病也会由非结核分枝杆菌(nontuberculousmycobacteria,NTM)引起。在韩国以外的国家，特别是在经常发现非结核分枝杆菌的地区，30％至50％的痰样本对于非结核分枝杆菌呈涂片阳性。据报道，随着各国的发展，非结核分枝杆菌引起的结核病患者人数正在增加。因此，分枝杆菌鉴定非常重要[WrightPW,WallaceRJJr,WrightNW,BrownBA,GriffithDE.JClinMicrobiol1998；36:1046-9；MarrasTK和DaleyCL.ClinChestMed2002；23:553-67；非结核分枝杆菌引起的疾病的诊断和治疗。这是美国胸科协会的官方声明。致病性分枝杆菌感染的管理：1999年联合结核委员会指南.Shorax2000；55:210-8]。已知韩国非结核分枝杆菌引起的疾病发病率很低。在这种情况下，大多数分枝杆菌涂片呈阳性反应的患者被诊断患有结核病，并且通常用抗结核药物治疗。据报道，在韩国10.3-12.2％的分枝杆菌涂片阳性痰样本中检测到非结核分枝杆菌，这一比例增加到30％[KohWJ,KwonOJ,YuCM,JeonK,SuhGY,ChungMP,etal.TubercRespirDis2003；54:22-32]。此外，非结核分枝杆菌可在免疫抑制患者中引起疾病并且难以诊断。由于非结核分枝杆菌的天然耐药性因其种类而异，因此非结核分枝杆菌引起的结核病的治疗方法可能与结核分枝杆菌引起的结核病的治疗方法不同[KohWJ,KwonOJ,LeeKS.JKoreanMedSci2005；20:913-25；WagnerD和YoungLS；非结核分枝杆菌感染：临床综述。Infection2004；32:257-70]。因此，需要一种用于快速区分结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的合适的测试方法。分枝杆菌涂片和培养测试通常用于结核病诊断。分枝杆菌涂片测试是有优点的，因为可以快速获得结果并且该方法易于实施，但具有灵敏度和特异性差以及结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌之间难以区分的缺点。培养测试是结核病最准确的诊断标准。然而，培养测试的缺点在于，结核分枝杆菌的缓慢生长需要很长时间来诊断结核病，长期培养会导致其他细菌的频繁污染[YangHY,LeeHJ,ParkWY,LeeKK,SuhJT.KoreanJLabMed2006；26:174-8]。最近出现了使用液体培养基的自动化测试方法以减少结核分枝杆菌培养所需的时间。然而，这些方法还需要额外的鉴定程序，因为它们不能区分结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌[YangHY,LeeHJ,ParkWY,LeeKK,SuhJT.KoreanJLabMed2006；26:174-8]。基于微生物的诊断用作判断耐药性的黄金标准。根据这些方法，通过在患者的痰样本中培养结核分枝杆菌，然后在含有药物的培养基中培养来确定耐药性。所述程序需要至少4-8周来判断结核分枝杆菌是否对药物具有耐药性。耐药性结核分枝杆菌延迟的结核病治疗导致耐药性结核分枝杆菌感染的局部传播。因此，在初始结核病诊断时判断结核分枝杆菌的耐药性是非常重要的。为此，需要进行分子诊断以快速判断耐药性。最近开发了许多基于先进分子诊断技术的结核病诊断[ChakravortyS和TyagiJS。通过涂片镜检、培养和PCR检测肺和肺外样本中分枝杆菌的新型多功能方法。JClinMicrobiol2005；43:2697-702；KimYJ,ParkMY,KimSY,ChoSA,HwangSH,KimHH,etal.KoreanJLabMed2008；28:34-8]。结核病的稳定诊断基于结核分枝杆菌感染的证据。因此，直接检测临床样本中的MTB被认为是最可靠的方法。在这种情况下，越来越多地使用基于快速分子生物学技术以高灵敏度和特异性从患者身上直接分离出检测结核分枝杆菌的方法。这种分子生物学技术包括，例如，PCR[YangHY,LeeHJ,ParkWY,LeeKK,SuhJT.KoreanJLabMed2006；26:174-8；ChakravortySandTyagiJS.JClinMicrobiol2005；43:2697-702]，实时PCR[KimYJ,ParkMY,KimSY,ChoSA,HwangSH,KimHH,etal.KoreanJLabMed2008；28:34-8；JungCL,KimMY,SeoDC,LeeMA.KoreaJClinMicrobiol2008；1；29-33]，杂交[MakinenJ,MarjamakiM,MarttilaH,SoiniH.ClinMicrobiolInfect.2006；12:481-3；PadillaE,GonzalezV,ManterolaJM,PerezA,QuesadaMD,GordilloS,etal.JClinMicrobial.2004；42:3083-8；SanguinettiM,BPosteraro,FArdito,SZanetti,ACingolani,LSechi,etal.JClinMicrobiol.1998；36:1530-3；Tortuli,E,AMariottiniandGMazzarelli.JClinMicrobiol.2003；41:4418-20]和寡核苷酸阵列[ParkH,JangH,SongE,ChangCL,LeeM,JeongS,etal.JClinMicrobial2005；43:1782-8]。用于鉴定非结核分枝杆菌的最广泛使用的方法之一是PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析(PRA)。通过PCR扩增可以鉴定结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的基因区域进行PRA，用适当的限制酶处理扩增的基因区域，并根据片段的特征来鉴定细菌[LeeHY,ParkHJ,ChoSN,BaiGH,KimSJ.JClinMicrobiol.2000；38:2966-71；BannalikarAS,VermaR.IndianJMedRes.2006；123:165-72；AravindhanV,SulochanaS,NarayananS,ParamasivamCN,NarayananPR.IndianJMedRes.2007；126:575-9]。然而，在两种或更多种细菌物种(包括结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌)共存的情况下，用限制酶处理后的片段的特征是复杂的，使得其不可能用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于同时检测及鉴定结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌以及判断结核分枝杆菌的利福平和异烟肼耐药性的方法，其特征在于，所述方法包含：a)从样本中分离出DNA，b)使用具有序列编号1‑12所示序列的引物通过PCR扩增DNA，和c)使PCR扩增产物与偶联有具有序列编号13‑68所示序列的寡聚物探针的磁盘杂交，并通过QuantaMatrix测定平台软件对磁盘成像。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.08.04 KR 10-2016-00995151.一种用于同时检测及鉴定结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌以及判断结核分枝杆菌的利福平和异烟肼耐药性的方法，其特征在于，所述方法包含：a)从样本中分离出DNA，b)使用具有序列编号1-12所示序列的引物通过PCR扩增DNA，和c)使PCR扩增产物与偶联有具有序列编号13-68所示序列的寡聚物探针的磁盘杂交，并通过QuantaMatrix测定平台软件对磁盘成像。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述结核分枝杆菌和所述非结核分枝杆菌菌株选自由结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)H37Rv、鸟型分枝杆菌(M.avium)、胞内分枝杆菌(M.intracellulare)、瘰疬分枝杆菌(M.scrofulaceum)、脓肿分枝杆菌(M.abscessus)、龟分枝杆菌(M.chelonae)、偶发分枝杆菌(M.fortuitum)、溃疡分枝杆菌(M.ulcerans)、海洋分枝杆菌(M.marinum)、堪萨斯分枝杆菌(M.kansasii)、日内瓦分枝杆菌(M.genavense)、猿分枝杆菌(M.simiae)、土分枝杆菌(M.terrae)、不产色分枝支菌(M.nonchromogenicum)、隐藏分枝杆菌(M.celatum)、戈登分枝杆菌(M.gordonae)、楚尔恙分枝杆菌(M.szulgail)、黏液分枝杆菌(M.mucogenicum)、欧巴涅分枝杆菌(M.aubagnense)、玛尔摩分枝杆菌(M.malmoense)、草分枝杆菌疫苗(M.phlei)、耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)、蟾蜍分枝杆菌(M.xenopi)、外来分枝杆菌(M.peregrinu...

【专利技术属性】
技术研发人员：李惠泳，王惠英，
申请(专利权)人：致优制药株式会社，延世大学校原州产学协力团，
类型：发明
国别省市：韩国,KR