疟疾疫苗制造技术

本发明专利技术例如涉及多肽和包含该多肽的疟疾疫苗，所述多肽由选自下述中的氨基酸序列组成：(a)SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的氨基酸序列；(b)通过1~10个、优选1~5个、更优选1、2或3个氨基酸的置换、缺失、添加或插入而不同于SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的氨基酸序列的氨基酸序列；和(c)与SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95%、优选97%、更优选99%的序列一致性的氨基酸序列。

Malaria vaccine

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】疟疾疫苗
本申请要求日本专利申请第2016-220512号和第2017-161442号的优先权，其以参考的方式整体并入本文中。本专利技术涉及例如在预防疟原虫感染或预防疟疾发病中使用的疫苗抗原。
技术介绍
疟疾是疟原虫属的寄生原虫如恶性疟原虫(Plasmodiumfalciparum)的感染，在热带和亚热带区域广泛蔓延。疟疾感染在疟原虫通过利用按蚊作为载体而进入人体、并经过孢子体(sporozoite)阶段、肝脏阶段、和血红细胞阶段而增殖从而发病。在各阶段中，疟原虫在人体体内产生蛋白质。诱导对该蛋白质的抗体的疫苗因此被期待攻击疟原虫，或者抑制疟原虫的感染或在感染后的体内的增殖。尽管全世界已研究或正在开发疟疾疫苗，但临床上尚未使用疟疾疫苗。也被称为Ripr的Rh5相互作用蛋白(PlasmoDBgenecode:PF3D7_0323400,http://plasmodb.org/)是被认为在恶性疟原虫的裂殖子(merozoite)阶段表达的蛋白质之一。Ripr被认为是疟疾疫苗的抗原(非专利文献1、2、和专利文献1~4)。现有技术文献专利文献专利文献1：美国专利申请公开第2015/0366958号专利文献2：WO2012/061882专利文献3：WO2015/144874专利文献4：WO2014/174054非专利文献非专利文献1：Nature(London)(1999),400(6744),532-538非专利文献2：Nature(London,UnitedKingdom)(2002),419(6906),527-531。
技术实现思路
专利技术要解决的课题本专利技术的目的之一在于，提供作为疟疾疫苗抗原有用的多肽。用于解决课题的手段本专利技术人的深入研究已发现，以来自疟原虫的蛋白质Ripr的片段作为抗原而得到的抗体抑制了疟原虫的增殖，由此完成了本专利技术。即，本专利技术涉及：[1]多肽，其由选自下述中的氨基酸序列组成：(a)SEQIDNO:4或SEQIDNO:8的氨基酸序列；(b)通过1~10个氨基酸残基、优选1~5个氨基酸残基、更优选1、2或3个氨基酸残基的置换、缺失、添加或插入而不同于SEQIDNO:4或SEQIDNO:8的氨基酸序列的氨基酸序列；和(c)与SEQIDNO:4或SEQIDNO:8的氨基酸序列具有至少95%、优选97%、更优选99%的序列一致性的氨基酸序列。[2]多肽，其包含根据项1所述的多肽和连接于其的携带体（carrier）。[3]根据项2所述的多肽，其中，所述携带体是病毒颗粒、脂质颗粒、或携带体蛋白质。[4]根据项1~3中任一项所述的多肽，其中，所述多肽被用作疟疾疫苗抗原。[5]疟疾疫苗，其包含根据项1~4中任一项所述的多肽。[6]根据项5所述的疟疾疫苗，其中，所述疟疾疫苗进一步包含选自CSP、TRAP、MSP1、AMA-1、SERA5、GAMA、EBA175、RH5、Pfs25或Pfs230中的至少一种疟疾疫苗抗原、或与所述至少一种疟疾疫苗抗原组合给药。[7]根据项5或6所述的疟疾疫苗，其中，所述疟疾疫苗进一步包含针对选自脊髓灰质炎、白喉、百日咳和破伤风中的至少一种感染症的疫苗抗原、或与该疫苗抗原组合给药。[8]根据项5~7中任一项所述的疟疾疫苗，其中，所述疟疾疫苗用于疟原虫的感染预防、疟原虫感染后疟疾的发病预防、或疟疾的治疗。[9]多核苷酸，其由编码根据项1所述的多肽的核苷酸序列组成。[10]多核苷酸，其包含根据项9所述的多核苷酸、和连接于其的使根据项9所述多核苷酸能够在宿主细胞中表达的启动子和/或调控元件。[11]表达载体，其包含根据项9或10所述的多核苷酸。[12]疟疾疫苗，其包含根据项9或10所述的多核苷酸、或根据项11所述的表达载体。[13]用根据项11所述的载体转化的重组宿主细胞。[14]根据项13所述的重组宿主细胞，其中，所述细胞为细菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞。[15]抗体，其特异性地识别根据项1所述的多肽。[16]药物组合物，其含有根据项1~4中任一项所述的多肽、根据项9或10所述的多核苷酸、根据项11所述的表达载体、或根据项15所述的抗体作为有效成分。专利技术的效果本专利技术提供例如作为疟疾疫苗抗原有用的多肽、和包含所述多肽的疟疾疫苗。附图说明图1示出通过用在小麦胚芽无细胞蛋白质表达系统中制作的Ripr或Ripr的片段对兔进行免疫而得到的多克隆IgG抗体的疟原虫增殖抑制率。图2示出通过用在小麦胚芽无细胞蛋白质表达系统中制作的Ripr1-5(WGCFS-Ripr1-5)和在杆状病毒/昆虫细胞表达系统中制作的Ripr1-5(Bac-Ripr1-5)免疫而得到的兔多克隆IgG抗体的疟原虫增殖抑制率。具体实施方式1.定义本说明书中使用的氨基酸、(多)肽、(多)核苷酸等缩写具有如IUPAC-IUBCommunicationonBiologicalNomenclature,Eur.J.Biochem.,138:9(1984)]、或JPO的“Guidelinesforthepreparationofthedescriptioncomprisingaminoacidsequenceornucleotidesequence”中定义的含义，或者如本领域中常规使用的含义。如本文中使用的，术语“Rh5相互作用蛋白”(或“Ripr”)是指被认为在恶性疟原虫的裂殖子(merozoite)阶段中表达的蛋白质，并且包括包含对应于PlasmoDBgenecode：PF3D7_0323400(http://plasmodb.org/)或NCBIReferenceSequence：XP_001351305(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)的SEQIDNO:2的氨基酸序列的蛋白质、以及包含与SEQIDNO:2实质上相同的氨基酸序列的蛋白质。“与SEQIDNO:2实质上相同的氨基酸序列”包括：(a)通过1~10个氨基酸残基、优选1~5个氨基酸残基、更优选1、2或3个氨基酸残基的置换、缺失、添加或插入而不同于SEQIDNO:2的氨基酸序列的氨基酸序列；和(b)与SEQIDNO:2的氨基酸序列具有至少95%、优选至少97%、或更优选至少99%的序列一致性的氨基酸序列。如本文中使用的，术语“Ripr基因”是指任何编码Ripr的多核苷酸，其可以是DNA或RNA。Ripr基因的具体实例包括具有SEQIDNO:1的核苷酸序列的多核苷酸，该SEQIDNO:1对应于PlasmoDBgenecode：PF3D7_0323400(http://plasmodb.org/)、或NCBIReferenceSequence：XM_001351269(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)。如本文中使用的，术语“序列一致性”是指2个蛋白质间的氨基酸序列一致性。“序列一致性”通过比较最佳对齐(aligned)的2个氨基酸序列而确定。同与其最佳对齐的另一氨基酸序列相比，可以在氨基酸序列中找到氨基酸添加或氨基酸缺失(或缺口)。可以通过例如使用VectorNTI而根据ClustalW算法(NucleicAcidRes.,22(22):4673-4680(1994))进行氨基酸序列的对齐，从而对所述序本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.多肽，其由选自下述中的氨基酸序列组成：(a)SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 8的氨基酸序列；(b)通过1~10个氨基酸残基、优选1~5个氨基酸残基、更优选1、2或3个氨基酸残基的置换、缺失、添加或插入而不同于SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 8的氨基酸序列的氨基酸序列；和(c)与SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 8的氨基酸序列具有至少95%、优选97%、更优选99%的序列一致性的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.11.11 JP 2016-220512;2017.08.24 JP 2017-161441.多肽，其由选自下述中的氨基酸序列组成：(a)SEQIDNO:4或SEQIDNO:8的氨基酸序列；(b)通过1~10个氨基酸残基、优选1~5个氨基酸残基、更优选1、2或3个氨基酸残基的置换、缺失、添加或插入而不同于SEQIDNO:4或SEQIDNO:8的氨基酸序列的氨基酸序列；和(c)与SEQIDNO:4或SEQIDNO:8的氨基酸序列具有至少95%、优选97%、更优选99%的序列一致性的氨基酸序列。2.多肽，其包含根据权利要求1所述的多肽和连接于其的携带体。3.根据权利要求2所述的多肽，其中，所述携带体是病毒颗粒、脂质颗粒、或携带体蛋白质。4.根据权利要求1~3中任一项所述的多肽，其中，所述多肽被用作疟疾疫苗抗原。5.疟疾疫苗，其包含根据权利要求1~4中任一项所述的多肽。6.根据权利要求5所述的疟疾疫苗，其中，所述疟疾疫苗进一步包含选自CSP、TRAP、MSP1、AMA-1、SERA5、GAMA、EBA175、RH5、Pfs25或Pfs230中的至少一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：福岛晃久，坪井敬文，高岛英造，长冈光，
申请(专利权)人：大日本住友制药株式会社，国立大学法人爱媛大学，
类型：发明
国别省市：日本,JP