用于诊断男性骨质疏松症的非编码RNA-LOC105376991制造技术

本发明专利技术公开了一种男性骨质疏松症的诊断产品，该诊断产品是通过检测血液中LOC105376991来实现诊断目的。本发明专利技术研究证明与正常男性相比，男性骨质疏松症患者血液中LOC105376991水平显著下降。根据LOC105376991与男性骨质疏松症之间存在的相关性，可以制备诊断男性骨质疏松症的试剂盒，该试剂盒可在临床上广泛应用。

Non-coding RNA-LOC105376991 for diagnosis of male osteoporosis

【技术实现步骤摘要】
用于诊断男性骨质疏松症的非编码RNA-LOC105376991
本专利技术属于生物医学领域，涉及用于诊断男性骨质疏松症的非编码RNA，该非编码RNA是LOC105376991。
技术介绍
男性骨质疏松症(osteoporosisinmen)的发病率大大低于绝经后的女性，故以往对男性骨质疏松症远不及对女性的重视。近几年的研究成果表明，青年时期的男性比女性虽能达到更高的峰值骨量，骨量丢失的起始时间也明显晚于女性，但男女两性都有一个与年龄增长相位的骨丢失过程，即老年性骨质疏松症(Ⅱ型)。男性骨质疏松症与女性骨质疏松症有很多相似之处，但在病因学、病理学和澈地病学等方面仍有明显的性别差别。65岁以上的男性普遍存在程度不等的骨质疏松，其严重并发症是骨折。在美国，大于65岁的男性髋骨骨折的发生率为4‰-5‰，相应年龄的女性发生率为8‰-10‰。在北欧的髋骨骨折发生率为男∶女＝1∶2，在南欧及其他地区，髋骨骨折的发生率在两性中均相对较低。在世界范围内所有髋骨骨折的病人中，约30％为男性，1990年为51万，预计到2025年男性髋骨骨折的人数将增加到116万人，而这一上升趋势在亚洲将更加突出。Cooper报告50岁以上男性在一生中的髋部、椎体和前臂骨折危险度为13.1％，而女性为39.7％。Neill报道，经欧洲19个国家36个中心15570例50-79岁人群椎体骨折的男性患病率为20％。我国有关男性骨质疏松症的患病率，据上海地区徐尚忠报道，60岁以上男性为13.9％；北京地区吴青报道为13.4％(腰椎)；沈惠良报道为23.8％(腰椎)。骨质疏松性骨折给患者造成生活能力的丧失及生命危险，Poor报道骨折的死亡率和发病率男性高于女性。与女性骨质疏松相同，普通x线仍是诊断男性骨质疏松和相关骨折的必要手段。首要表现为脊柱和骨盆的骨质密度减低。椎体骨皮质变薄，横行骨小梁减少或消失，纵行骨小梁相对明显，严重时椎体内结构消失；椎体变扁，其上下缘内凹、椎间隙增宽，椎体呈双凹状，常因轻微外伤而压缩呈楔形。在长骨上可见骨小梁变细、数量减少、骨皮质变薄和出现分层现象。严重时可在弥漫性骨质密度减低的基础上出现散在分布的数毫米大小的点状透亮区，其边界清楚或模糊，易误诊为骨质破坏。但X线平片对诊断骨质疏松的敏感性和准确性低，对骨质疏松的早期诊断帮助不大。因此亟待开发一种在骨质疏松症早期即可诊断骨质疏松症的方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的一个技术问题是针对现有技术的现状提供一种与男性骨质疏松症诊断相关的长链非编码RNA标志物。本专利技术所要解决的另一个技术问题是提供一种上述lncRNA标志物的检测方法，该检测方法不直接用于疾病的诊断与治疗。本专利技术所要解决的又一个技术问题是提供一种上述lncRNA标志物在制备诊断男性骨质疏松症的产品中的应用。本专利技术为解决上述技术问题，采用了如下技术方案：本专利技术一方面，提供了一种与男性骨质疏松症诊断相关的分离的长链非编码RNA，所述长链非编码RNA是LOC105376991。在另一优选例中，所述LncRNA分离自人或非人哺乳动物的血液和/或组织。在另一优选例中，所述的血液为血浆和/或血清。在另一优选例中，所述的血液不包括血细胞。在另一优选例中，所述的非人哺乳动物为小鼠、大鼠、兔、猪、牛、羊等。在另一优选例中，所述LncRNA分离自人血液。本专利技术第二方面，提供了一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸能被人细胞转录成本专利技术第一方面的长链非编码RNA。本专利技术第三方面，提供了一种载体，所述载体含有本专利技术第二方面的多核苷酸，或表达本专利技术第一方面的长链非编码RNA。本专利技术第四方面，提供了一种试剂，所述试剂是能够检测本专利技术第一方面的长链非编码RNA表达量的试剂。进一步，所述试剂包括利用SYBRGreen、TaqMan探针、分子信标、双杂交探针、或复合探针检测所述长链非编码RNA表达量时使用的PCR扩增引物。在本专利技术的具体实施例中，所述引物序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。本专利技术第五方面，提供了一种诊断骨质疏松症的芯片，所述芯片包括固相载体以及以及有序固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针特异性地对应于本专利技术第一方面的长链非编码RNA。本专利技术第六方面，提供了本专利技术第五方面的芯片的用途，用于制备诊断男性骨质疏松症的试剂盒。本专利技术第七方面，提供了一种试剂盒，所述试剂盒含有本专利技术第一方面的长链非编码RNA或本专利技术第四方面的试剂，或本专利技术第五方面的芯片。进一步，本专利技术的试剂盒还可以包含RT-PCR反应所需的下列成分：PCRbuffer、10mMdNTPs、HotstartTaq酶、ddH2O。进一步，本专利技术的试剂盒还可以包含长链非编码RNA反转录得到的cDNA，作为检测上述引物可行性的阳性模板。本专利技术第八方面，提供了本专利技术第一方面的长链非编码RNA、或本专利技术第四方面的试剂的用途，用于制备诊断男性骨质疏松症的芯片或试剂盒。本专利技术的试剂盒的使用方法具有以下记载：(1)从来自检测对象的样本中提取本专利技术第一方面的LncRNA；(2)对LncRNA含量进行检测，并将结果与正常人群中的LncRNA含量进行比较，若样本中的LncRNA的含量L1显著低于正常人群的LncRNA含量L0，则说明该检测对象患有骨质疏松或者患有骨质疏松的概率高。在另一优选例中，所述显著低于是指L0/L1≥1.5，优选地，≥2.0，更优选地，≥5。在另一优选例中，所述检测对象包括未患有骨质疏松的正常男性、疑似患有骨质疏松的男性患者或确诊骨质疏松的男性患者。在本专利技术的上下文中，“诊断骨质疏松症”包括判断受试者是否已经患有骨质疏松症、判断受试者是否存在患有骨质疏松症的风险。如本文所用，术语“LncRNA”、“长链非编码RNA”、“Longnon-codingRNA”含义相同，互换使用，都是指一种由RNA聚合酶II转录、不编码蛋白的、一般长度大于200bp的RNA片段。如本文所用，术语“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。当然，还可以根据数据库中相对于的LncRNA序列或其互补序列，根据常规技术化学合成LncRNA或其检测试剂(如可以与LncRNA相结合的寡核苷酸作为探针，并进一步制备成芯片)，或采用其cDNA序列制备成表达载体，并转录为LncRNA。多核苷酸构建物根据本专利技术所提供的人LncRNA序列，可设计出在被导入后可被加工成可影响相应的mRNA表达的LncRNA的多核苷酸构建物，也即所述多核苷酸构建物能够在体内上调相应的LncRNA的量。因此，本专利技术提供了一种分离的多核苷酸(构建物)，所述的多核苷酸(构建物)可被人细胞转录成LncRNA。通常，所述的多核苷酸构建物位于表达载体上。因此，本专利技术还包括一种载体，它含有所述的LncRNA，或所述的多核苷酸构建物。所述的表达载体通常还含有启动子、复制起点和/或标记基因等。本领域的技术人员熟知的方法能用于构建本专利技术所需的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等。所述的表达载体优选地包含一个或多个选择本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的长链非编码RNA，其特征在于，所述长链非编码RNA是LOC105376991。

【技术特征摘要】
1.一种分离的长链非编码RNA，其特征在于，所述长链非编码RNA是LOC105376991。2.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸能被人细胞转录成权利要求1所述的长链非编码RNA。3.一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求2所述的多核苷酸，或表达权利要求1所述的长链非编码RNA。4.一种试剂，其特征在于，所述试剂是能够检测权利要求1所述的长链非编码RNA表达量的试剂。5.一种诊断骨质疏松症的芯片，其特征在于，所述芯片包括固相载体以及以及有序固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针特异性地对应于权利要求1所述的长链非编码RNA。6.权利要求5所述的芯片...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨承刚，向常娟，
申请(专利权)人：固安博健生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13