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一种贝类高F值寡肽的制备方法技术

技术编号:21908388 阅读:75 留言:0更新日期:2019-08-21 10:46
本发明专利技术公开了一种贝类高F值寡肽的制备方法,包括以下步骤:将贝肉洗净后匀浆,然后进行酶解,获取上层酶解液。以树枝状聚合物制备分子印迹材料,吸附酶解液中的芳香族氨基酸,得到高F值寡肽溶液,采用冷冻干燥制备高F值寡肽粉末。本发明专利技术产品原料易得且廉价,制备方法简单,便于工业化生产,产品得率75%以上,F值50以上,可作为肝病病人的膳食来源成分。

A Method for Preparing Oligopeptides with High F Value in Shellfish

【技术实现步骤摘要】
一种贝类高F值寡肽的制备方法
本专利技术涉及生物肽制备领域,具体涉及一种贝类高F值寡肽的制备方法。
技术介绍
高F值寡肽是蛋白酶作用于食物蛋白质后形成的一种低分子量生理活性肽,由支链氨基酸含量高和芳香族氨基酸含量低的特殊氨基酸组成。F值(Fischerratio),是支链氨基酸与芳香族氨基酸含量的摩尔数比值。一般认为,用于临床治疗肝性脑病的高F值寡肽的F值应大于20。正常人的血液中F值为3.0-3.5,而患有肝脏疾病病人的F值只有1.0或者更低。对于肝病患者来说,其血浆F值可以反映出患者肝病的严重程度。高F值寡肽可用于防止肝性脑病的发生或减缓其症状,同时又改善病人的营养状况。高F值寡肽还具有提供能量、抗疲劳、改善手术后和卧床病人的蛋白营养状况、治疗苯丙酮尿症的作用,在医药与临床营养方面受到广泛关注。酶解法制备的高F值寡肽混合液含有大量游离芳香族氨基酸,对寡肽液进行脱芳处理,才能提高寡肽的F值。目前常用的高F值化方法主要有吸附法和过滤分离法。国内高F值化处理主要采用活性炭吸附法,该方法成本低,非常适合工业化应用,但是活性炭对芳香族氨基酸的吸附不具有特异性,不仅可以脱除芳香族氨基酸,也会吸附包含支链氨基酸在内的其它氨基酸,难以达到理想的吸附效果,对F值的提升效果不理想且不稳定,对原料及酶解工艺要求较高。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足,对吸附法脱芳处理进行了改进,制备了分子印迹聚合物作为芳香族氨基酸吸附剂,具体
技术实现思路
如下:一种贝类高F值寡肽的制备方法,其步骤包括蛋白酶解、芳香族氨基酸专一吸附剂制备、芳香族氨基酸脱除,所述芳香族氨基酸专一吸附剂为分子印迹聚合物。优选的,所述芳香族氨基酸脱除包括如下步骤:向所述蛋白酶解后的产物中添加其1-5wt%分子印迹聚合物,10-20℃搅拌30-100min,4000-10000r/min离心5-30min,收集上清液,获得高F值寡肽溶液。优选的,所述分子印迹聚合物由树枝化聚酰胺-胺制备而成。进一步,所述分子印迹聚合物,其制备方法包括如下步骤:(1)0.5代树枝状聚酰胺-胺制备:以乙二胺为核,进行Michael加成反应,制备0.5代树枝状聚酰胺-胺;(2)1代树枝状聚酰胺-胺制备:以0.5代树枝状聚酰胺-胺和乙二胺进行酰胺化缩合反应制备1代树枝状聚酰胺-胺;(3)2代树枝状聚酰胺-胺制备:对步骤(2)获得的1代树枝状聚酰胺-胺重复进行步骤(2)中的Michael加成和步骤(2)中的酰胺化缩合反应,制备2代树枝状聚酰胺-胺;(4)端双键树枝状聚合物的制备:由2代树枝状聚酰胺-胺和丙烯酰氯进行胺解反应即得到端双键树枝状聚酰胺-胺;(5)分子印迹聚合物合成:以芳香族氨基酸作为模板,与步骤(4)中获得的端双键树枝状聚酰胺-胺合成,即得分子印迹聚合物。再进一步,所述制备方法中步骤(1)的Michael加成反应,其工作条件为:将9份乙二胺和32份甲醇加入到带有磁力搅拌子、回流冷凝管和温度计的三口烧瓶中,15-30℃通氮气5-20min除氧,搅拌条件下,滴加103.2份丙烯酸甲酯,反应10-30h,在20-35℃,100-200Pa的压力下减压蒸馏,除去溶剂甲醇和过量的丙烯酸甲酯,得0.5代树枝状聚酰胺-胺;所述制备方法中步骤(1)的酰胺化缩合反应,其工作条件为:将20.2份步骤(1)中获得的0.5代树枝状聚酰胺-胺和64份甲醇混合,15-30℃搅拌条件下,滴加72份乙二胺,反应10-30h,在45-75℃,100-300Pa的压力下减压蒸馏,除去溶剂甲醇和乙二胺,得到1.0代树枝状聚酰胺-胺;所述制备方法中步骤(4)的工作条件为:称取1份2代树枝状聚酰胺-胺和8-16份丙烯酰氯,用二氯甲烷溶解,通氮气保护,避光2-4℃反应1-3h,得到具有沉淀物的溶液,低温过滤,得到端双键树枝状聚酰胺-胺产物;所述制备方法中步骤(5)的工作条件为:称取1份芳香族氨基酸作为模板分子,加入5-10份乙醇,滴加50-200µL37wt%的盐酸使模板分子全部溶解;加入3-8mmo1步骤(4)中获得的端双键树枝状聚酰胺-胺,溶解,于冰水浴中作用5-10h后加入功能单体与引发剂,超声混合均匀,充氮气3-15min,然后置于冰水浴中进行紫外光引发聚合;聚合完成后将所得产物粉碎、研磨,用甲醇和乙酸除去模板分子,真空干燥后备用;所述功能单体为甲基丙烯酸,所述引发剂为偶氮二异丁腈。再进一步,所述芳香族氨基酸为酪氨酸、色氨酸或苯丙氨酸。优选的,所述蛋白酶解包括如下步骤:(1)取新鲜贝肉洗净,按照贝肉与水的质量比1:5-1:10加水匀浆,得到浆料;(2)向步骤(1)得到的浆料中加入内切蛋白酶,酶解条件为:酶添加量为占浆料总质量1000-3000U/g,pH5-8,酶解温度30-50℃,酶解时间5-10h,然后煮沸5-15min灭酶,得到酶解液;(3)向步骤(2)获得的酶解液中,加入外切蛋白酶,酶解条件为:酶添加量为占浆料总质量1000-2000U/g,pH5-8、酶解温度30-55℃,酶解时间8-12h,然后煮沸5-15min灭酶。3000-8000r/min离心5-30min,收集上清液,得到贝类寡肽溶液。优选的,所述贝类为栉孔扇贝、虾夷扇贝或海湾扇贝。优选的,所述高F值寡肽的F值为50以上。以上所述份均为质量份数。本专利技术的有益效果如下:本专利技术以芳香族氨基酸为模板制备分子印迹聚合物,可实现对芳香族氨基酸的特异性精准吸附,有助于提高寡肽的F值,有效克服现有吸附剂吸附效果差、无特异性、损失大等缺点,实现了F值的快速提升,增加了高F值寡肽的产率,是对高F值寡肽制备工艺的有益改进;获得的高F值寡肽的F值为50以上,可广泛应用于医药、食品领域。具体实施方式以下结合实例对本专利技术的原理和特征进行描述,所举实例只用于解释本专利技术,并非用于限定本专利技术的范围。本专利技术实施例中使用的内切蛋白酶为复合蛋白酶Protemax,购买于诺维信(中国)生物技术有限公司,外切蛋白酶为风味蛋白酶,购买于南宁庞博生物工程有限公司。实施例中所述份均为质量份数。高F值寡肽F值计算公式为:F=QUOTE高F值寡肽得率计算公式为:产品得率=QUOTE实施例1一种贝类高F值寡肽的制备方法,其步骤如下:1.蛋白酶解(1)取新鲜海湾扇贝的贝肉洗净,按照贝肉与水的质量比1:5加水匀浆,得到浆料;(2)向步骤(1)得到的浆料中加入复合蛋白酶Protemax,酶添加量为占浆料总质量1000U/g,pH5,酶解温度30℃,酶解时间10h,然后煮沸5min灭酶,得到酶解液;(3)向步骤(2)获得的酶解液中,加入风味蛋白酶,酶解条件为:酶添加量为占浆料总质量1000U/g,pH5、酶解温度55℃,酶解时间8h,然后煮沸5min灭酶。3000r/min离心30min,收集上清液,得到贝类寡肽溶液。2.芳香族氨基酸吸附剂制备(1)0.5代树枝状聚酰胺-胺制备:以乙二胺为核,进行Michael加成反应,制备0.5代树枝状聚酰胺-胺;Michael加成反应的工作条件为:将9份乙二胺和32份甲醇加入到带有磁力搅拌子、回流冷凝管和温度计的三口烧瓶中,15℃通氮气20min除氧,搅拌条件下,滴加103.2份丙烯酸甲酯,反应10h,在20℃,200Pa的压力下减压蒸馏,除去溶剂甲醇和过量本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种贝类高F值寡肽的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括蛋白酶解、芳香族氨基酸专一吸附剂制备、芳香族氨基酸脱除,所述芳香族氨基酸专一吸附剂为分子印迹聚合物。

【技术特征摘要】
1.一种贝类高F值寡肽的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括蛋白酶解、芳香族氨基酸专一吸附剂制备、芳香族氨基酸脱除,所述芳香族氨基酸专一吸附剂为分子印迹聚合物。2.根据权利要求1所述的贝类高F值寡肽的制备方法,其特征在于,所述芳香族氨基酸脱除包括如下步骤:向所述蛋白酶解后的产物中添加其1-5wt%分子印迹聚合物,10-20℃搅拌30-100min,4000-10000r/min离心5-30min,收集上清液,获得高F值寡肽溶液。3.根据权利要求1或2所述的贝类高F值寡肽的制备方法,其特征在于,所述分子印迹聚合物由树枝状聚合物制备而成。4.根据权利要求3所述的贝类高F值寡肽的制备方法,其特征在于,所述分子印迹聚合物的制备方法包括如下步骤:(1)0.5代树枝状聚酰胺-胺制备:以乙二胺为核,进行Michael加成反应,制备0.5代树枝状聚酰胺-胺;(2)1代树枝状聚酰胺-胺制备:以0.5代树枝状聚酰胺-胺和乙二胺进行酰胺化缩合反应制备1代树枝状聚酰胺-胺;(3)2代树枝状聚酰胺-胺制备:对步骤(2)获得的1代树枝状聚酰胺-胺重复进行步骤(1)中的Michael加成和步骤(2)中的酰胺化缩合反应,制备2代树枝状聚酰胺-胺;(4)端双键树枝状聚合物的制备:由2代树枝状聚酰胺-胺和丙烯酰氯进行胺解反应即得到端双键树枝状聚酰胺-胺;(5)分子印迹聚合物合成:以芳香族氨基酸作为模板,与步骤(4)中获得的端双键树枝状聚酰胺-胺合成,即得分子印迹聚合物。5.根据权利要求4所述的贝类高F值寡肽的制备方法,其特征在于,所述制备方法中步骤(1)的Michael加成反应,其工作条件为:将9份乙二胺和32份甲醇加入到带有磁力搅拌子、回流冷凝管和温度计的三口烧瓶中,15-30℃通氮气5-20min除氧,搅拌条件下,滴加103.2份丙烯酸甲酯,反应10-30h,在20-35℃,100-200Pa的压力下减压蒸馏,除去溶剂甲醇和过量的丙烯酸甲酯,得0.5代树枝状聚酰胺-胺;所述制备方法中步骤(2)的酰胺化缩合反应,其工作条件为:将20.2份步骤(1)中获得的0.5代树枝状聚酰胺-胺和64...

【专利技术属性】
技术研发人员:赵芹刘海梅张满温丑玉徐瑞彬张彩丽李海燕牛丽红张莉莉于慧
申请(专利权)人:鲁东大学
类型:发明
国别省市:山东,37

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