一种鱼鳔肽及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种鱼鳔肽及其制备方法和应用，所述制备方法包括：先将鱼鳔加热进行蛋白变性，粉碎，再用胰糜蛋白酶进行酶解，然后酶灭活，最后分离得到所述鱼鳔肽。该制备方法不仅操作十分简单，在不需膜分离的前提下就能对鱼鳔肽的分子量做到精确控制，在收率大于85％的情况下能保证所得产品中活性较高且更易吸收的分子量小于1000Da的多肽含量超过85％，适合大规模工业生产；该制备方法普适性好；且制备过程全程无任何化学试剂的添加，安全性好，无毒副作用；制备得到的鱼鳔肽产品更易吸收、口感好，保留了低聚肽的生理活性，具有显著的抑制ACE活性和降血压效果。

A fish bladder peptide and its preparation method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种鱼鳔肽及其制备方法和应用
本专利技术属于多肽制备
，具体涉及一种鱼类活性肽及其制备方法和应用，尤其涉及一种鱼鳔肽及其制备方法和应用。
技术介绍
我国自古就有食用鱼鳔的习惯，与燕窝、鱼翅齐名，是“八珍”之一，素有“海洋人参”之誉。现代中医认为鱼鳔胶性味甘、平、入肾经，有补益精血、滋养筋脉、养肝益肾、养血止血之功，适用于肾虚滑精、吐血、崩漏、腰膝酸软等，为高蛋白滋补佳品，可治疗消化性溃疡、肺结核、风湿性心脏病、再生障碍性贫血、脉管炎、神经衰弱及女子闭经、赤白带下、崩漏等。鱼鳔中蛋白质含量大于80％，脂肪含量特别低，同时富含多种维生素及钙、铁、锌、硒等微量元素。是理想的高蛋白低脂肪的健康饮食。经常食用对人体具有多种保健效果。氨基酸分析结果显示，鱼鳔中富含甘氨酸、脯氨酸、丙氨酸、谷氨酸、精氨酸、羟脯氨酸等16种氨基酸。高血压病是一种以血压升高为主要临床表现而病因尚未明确的常见多发病，早期可能无症状或症状不明显，随着病程延长或血压明显的持续升高，逐渐会出现各种症状。高血压是引起心肌梗塞、动脉硬化、充血性心力衰竭和肾功能衰竭的主要原因，也是目前十分严重的社会公共卫生问题。血管紧张素转化酶(ACE)是一种催化血管紧张素I转化为血管紧张素II的酶，血管紧张素II的增多可使血压升高。ACE抑制剂可以有效抑制ACE的活性并增加缓激肽的活性，因此ACE也成为治疗高血压、心力衰竭、糖尿病合并高血压等疾病的理想靶点。自1977年Cushman等根据ACE底物的化学结构推测出ACE活性部位的模型并在此基础上开发和设计了第一个化学合成血管紧张素转换酶I肽以来，其作用得到医学界的普遍认可，其治疗高血压的益处已被大家所接受，但其对肾脏的毒副作用以及其他一些副作用如低血压、干咳等使研究者开始寻找安全性高的ACE抑制剂。来源于食物蛋白质的降血压肽其降血压效果虽然不及化学合成的药物，但没有毒副作用，除了具有降血压功能以外往往还具有免疫调节、减肥、易消化和吸收等功能。目前的研究结果普遍认为抗高血压肽对ACE的抑制活性与其分子量密切相关，分子量小则有利于其在体内的吸收利用，一般具有活性的抗高血压肽其分子量为1000Da以下。传统的控制多肽分子量的方法是首先将蛋白质进行酶解，再采用膜分离技术对不同分子量的多肽进行分离；一方面酶解过程可将蛋白质降解成为不同分子量的多肽，另一方面膜分离过程可根据选择不同类型的膜制备出低于截留分子量的多肽。CN105821108A公开了一种混合酶解-膜过滤制备中华鳖降压肽的方法，该方法包括原料预处理、混合酶水解、灭酶、离心过滤、膜过滤、冻干等关键步骤。CN105248836A公开了基于二步酶解和酶膜反应制备低致敏性乳清蛋白粉的方法，该方法以乳清为底物，利用二步蛋白酶解技术水解乳清蛋白中的致敏位点，利用膜的选择性透过作用，分离获得分子量低于1kDa的无致敏位点的蛋白水解物。CN103045707A公开了一种连续酶解与二级膜过滤提纯制备大米蛋白活性多肽的方法，该方法以碱性蛋白酶和大米蛋白为主要原料进行酶解反应，通过超滤膜、纳滤膜和喷雾干燥等步骤制备大米蛋白活性多肽。类似的专利还包括：不补料酶解-膜分离耦合制备鱼鳞胶原蛋白抗氧化肽的方法(201010188410.5)；一种酶解与膜滤集成连续制取酪蛋白生物活性多肽的工艺(200310107554.3)；利用酶解与膜滤耦合技术连续制备窄分子量分布燕窝提取物的方法(200810061920.9)；一种酶解和膜分离制备免疫活性大豆肽的方法(201010523747.7)；利用酶膜反应器连续制备蚕蛹蛋白抗氧化肽的方法(201310137894.4)；一种利用酶膜反应器制备燕麦抗氧化肽的方法(201110112515.7)等。固定化酶耦合膜分离技术主要采用柱式固定化酶反应器串联膜分离技术实现，或将酶直接固定在中空纤维膜上实现。相关的研究或综述报道包括：酶膜反应器及其工业应用研究(化工时刊，2004，18(1):13-17)；酶膜反应器及其应用(食品安全导刊，2014，11:76-78)；酶膜耦合法制备均一分子量胶原蛋白多肽(化学与生物工程，2017，34(2):25-32)；牛乳蛋白在膜反应器中的酶解(食品工业科技，2000，21(1):30-31)；酶膜反应器连续酶解花生蛋白的工艺研究(食品工业科技，2010，31(8):208-212)；动态膜分离式固定化酶反应器操作性能的研究(2000，16(4):337-342)等。CN103980347A和CN103992385A公开的关于制备大黄鱼鱼鳔肽的方法也包括酶解、超滤和层析这几个步骤。以上这些现有技术基于酶解并进一步膜分离的多肽制备过程中，都是通过膜分离来控制所得多肽的分子量范围，膜分离过程不可避免的要耗费大量的水，而且只能对膜截留范围内的产品实现分子量可控，目标产品的收率一般比较低。
技术实现思路
针对现有技术的不足，即针对现有技术中基于酶解和膜分离的分子量可控多肽制备方法中存在操作复杂，收率低下，废水量大的问题，以及鱼鳔酶解利用过程中存在的各种问题，本专利技术的目的在于提供一种鱼鳔肽及其制备方法和应用，该制备方法简单方便，且制备得到的鱼鳔肽分子量可控且收率高，同时还具有显著的降血压作用。为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：一方面，本专利技术提供一种鱼鳔肽的制备方法，所述制备方法包括：先将鱼鳔加热进行蛋白变性，粉碎，再用胰糜蛋白酶进行酶解，然后酶灭活，最后分离得到所述鱼鳔肽。本专利技术所涉及的制备鱼鳔肽的方法突破了常规的先酶解再膜分离方法，而是先将鱼鳔进行加热使蛋白质变性，粉碎后用胰糜蛋白酶进行酶解，灭酶，分离即可得到鱼鳔肽，其中加热使鱼鳔中胶原蛋白的三螺旋稳定结构被破坏，同时能够去除鱼鳔特有的腥味，其中胰糜蛋白酶相较于其他蛋白酶类型对鱼鳔的酶解效果更强，能在短时间内及较少添加量的情况下将变性后的鱼鳔蛋白质水解成生物活性更强的分子量小于1000Da的低聚肽。该方法不仅操作十分简单，在不需膜分离的前提下就能对鱼鳔肽的分子量做到精确控制，在收率大于85％的情况下能保证所得产品中活性较高且更易吸收的分子量小于1000Da的多肽含量超过85％，适合大规模工业生产；该制备方法普适性好，适用于所有新鲜鱼鳔和干鱼鳔的多肽制备；且制备过程全程无任何化学试剂的添加，安全性好，无毒副作用；制备得到的鱼鳔肽产品更易吸收、口感好，保留了低聚肽的生理活性，具有显著的抑制ACE活性和降血压效果，非常适合咀嚼和消化能力较弱的人群进行营养补充。优选地，所述将鱼鳔加热进行蛋白变性的方法为：将鱼鳔用水煮沸0.5-10h使蛋白变性，例如0.5h、1h、2h、4h、5h、6h、7h、8h或10h等。所述对鱼鳔进行煮沸加热的时间应控制在0.5-10h，若超过10h会因为美拉德反应的发生导致颜色变深，小于0.5h会因为加热时间不够而变性不完全，无法使最终获得的产品具有上述有益效果。优选地，所述胰糜蛋白酶的使用量为每g底物使用2-100U，例如2U、10U、20U、40U、50U、60U、65U、70U、80U、90U或100U等。使用本专利技术所述方法制备鱼鳔肽，胰糜蛋白酶的使用量很少，在每g底物使用2-100U的情况下，就能获得上述有益效果。特定选择2-100U，是本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鱼鳔肽的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：先将鱼鳔加热进行蛋白变性，粉碎，再用胰糜蛋白酶进行酶解，然后酶灭活，最后分离得到所述鱼鳔肽。

【技术特征摘要】
1.一种鱼鳔肽的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：先将鱼鳔加热进行蛋白变性，粉碎，再用胰糜蛋白酶进行酶解，然后酶灭活，最后分离得到所述鱼鳔肽。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述将鱼鳔加热进行蛋白变性的方法为：将鱼鳔用水煮沸0.5-10h使蛋白变性。3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述胰糜蛋白酶的使用量为每g底物使用2-100U。4.如权利要求1-3中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述酶解的温度为40-60℃，优选50-55℃；优选地，所述酶解的时间为1-10h，优选3-5h；优选地，所述酶解的pH值为6-8。5.如权利要求1-4中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述酶灭活的温度为80-100℃；优选地，所述酶灭活的时间为10-60min。6.如权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述分离的方式为离心分离；优选地，所述离心的速率为4000-6000r/min；优选地，所述离心的温度为10-50℃；优选地，所述离心的时间为5-30min。7.如权利要求1-6中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述将鱼鳔加热进...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆文超，张贵锋，孔英俊，康跻耀，苏志国，
申请(专利权)人：中国科学院过程工程研究所，河北中科同创科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11