一种制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的方法技术

本发明专利技术公开了一种制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的方法，将大豆磷脂溶解于水或氯化钙溶液中，加入磷脂酶进行酶解反应；酶解反应产物经过预处理后转移至硅胶柱中，并以多卤代低碳烷烃‑低碳醇‑水为洗脱剂进行多次洗脱，收集目标物的溶液，浓缩干燥后得到高纯度溶血磷脂酰胆碱产品。本发明专利技术以普通大豆磷脂为原料，通过酶解反应，酶解后预处理及柱层析提纯工艺制备高纯度溶血磷脂酰胆碱，具有原材料廉价易得、工艺简单、可操作性强、产品收率高等特点，适合于工业化生产，生产的溶血磷脂酰胆碱纯度高、副产物少，产品质量稳定。

A Method for Preparing High Purity Lysophosphatidylcholine

【技术实现步骤摘要】
一种制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的方法
本专利技术涉及磷脂代谢产物的制备方法，具体的说，是涉及一种制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的方法。
技术介绍
溶血磷脂酰胆碱（lysophosphatidylcholine，简称LPC）是磷脂的代谢产物之一，亦称溶血卵磷脂，是磷脂酰胆碱脱去一条脂肪酸链后形成的产物。溶血磷脂酰胆碱的乳化能力，乳化稳定性等均优于普通磷脂产品；此外溶血磷脂酰胆碱还具有独特的生理活性，抑菌活性和抗氧化性能。因此溶血磷脂酰胆碱在食品工业，医药工业，化妆品工业及饲料工业中可以作为添加剂、医药中间体、药物载体及高效乳化剂使用。例如，在医药领域中，高纯度溶血磷脂酰胆碱是靶向制剂的关键辅料之一，其也可以作为一类优良的抗癫痫药物的原料；因为溶血磷脂酰胆碱主要在肝脏代谢，在肝脏疾病和肝毒性中可发现明显含量变化，具体表现为溶血磷脂酰胆碱含量明显高于正常人，因此溶血磷脂酰胆碱也常被应用于肝脏病理研究用作标志物，另外溶血磷脂酰胆碱与糖尿病、动脉粥样硬化、血脂异常等代谢性疾病及心血管病密切相关，因此高纯度的溶血磷脂酰胆碱直接作为药物中间体，标志物或作为医药辅料使用的应用前景广阔。制备溶血磷脂酰胆碱的方法主要有化学合成、酸碱水解、酶解、物理分离及柱层析等方法。这些方法各有优势，但又各有不足。例如化学合成法使用的原料毒性大，应用范围受到限制；酸碱水解法的水解反应程度难以控制；各种物理分离方法在目标产物的纯化上都遇到了难以克服的困难，且存在收率低、设备投资大、成本高等问题；酶解法容易出现各种副反应，难以直接实现高纯度溶血磷脂酰胆碱的制备；柱层析法严重依赖于初始原料的纯度，且过程中所选择的洗脱剂的种类、比例及用量等与最终分离效果有直接关系，不同的待分离物通常对应的是独特的固定相和洗脱剂及洗脱剂比例。目前，制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的通行做法，是从高纯度的磷脂酰胆碱（PC）原料出发来获得目标产物。而这种做法存在着严重的原材料依赖性，所使用的原材料为高纯度磷脂酰胆碱（PC），该物质需要通过合成或复杂的提取手段获得，成本高昂，不容易得到。在以普通大豆磷脂为起始原材料制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的方向上，日本专利JP63091306A公开了一种以大豆磷脂为原料的制备方法，经过丙酮脱油，磷脂酶A2水解，硅胶柱层析，乙醇-水洗脱，最终得到溶血磷脂酰胆碱含量为87%，溶血磷脂酰乙醇胺含量为6%的产品；该专利技术所述的技术仍然存在所得产物纯度有限、难以彻底除掉其它结构相似组分（如溶血磷脂酰乙醇胺等）的问题。此外，专利CN104558021A公开了一种从大豆或蛋黄磷脂出发，直接采用多卤代烷烃-低碳醇-水混合洗脱剂直接进行柱层析，最终得到高纯度天然溶血磷脂酰胆碱的制备方法；但是，受限于起始原材料中溶血磷脂酰胆碱的极低含量（例如大豆磷脂中天然溶血磷脂酰胆碱的总含量通常约1%左右），该技术所描述的方法或存在着产品收率不高，提取效率有限，综合制备成本高的问题。以上缺陷，值得解决。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术提供一种制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的方法。本专利技术技术方案如下所述：一种制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，在磷脂酶存在下，对大豆磷脂进行酶解反应，酶解反应产物经过预处理后转移至硅胶柱中，并以多卤代低碳烷烃-低碳醇-水为洗脱剂进行多次洗脱，收集目标物的溶液，浓缩干燥后得到高纯度溶血磷脂酰胆碱产品。根据上述方案的本专利技术，其特征在于，所述大豆磷脂溶解于水溶液，并选用磷脂酶A1进行酶解反应。根据上述方案的本专利技术，其特征在于，所述大豆磷脂溶解于氯化钙溶液，并选用磷脂酶A2进行酶解反应。根据上述方案的本专利技术，其特征在于，酶解反应产物进行预处理的过程具体包括以下步骤：先向酶解反应产物中加入丙酮，搅拌溶解后过滤分离得到固体沉淀物；该固体沉淀物溶解于多卤代低碳烷烃中得到溶液；该溶液倒入低碳一元醇中析出固体物质，过滤除掉析出固体物质并收集滤液；收集的滤液进行浓缩。根据上述方案的本专利技术，其特征在于，所述多卤代低碳烷烃包括二氯甲烷、三氯甲烷、二氯乙烷。根据上述方案的本专利技术，其特征在于，所述低碳醇为低碳一元醇。进一步的，所述低碳一元醇包括甲醇、乙醇、异丙醇。根据上述方案的本专利技术，其特征在于，依次用多卤代低碳烷烃、多卤代低碳烷烃/低碳醇、多卤代低碳烷烃/低碳醇/水、多卤代低碳烷烃/低碳醇/水、多卤代低碳烷烃/低碳醇/水逐步进行多次洗脱。进一步的，在多次洗脱过程中，洗脱剂的极性逐渐增大。更进一步的，在第二次洗脱过程中，多卤代低碳烷烃/低碳醇的体积比为5：1；在第三次洗脱过程中，多卤代烷烃/低碳醇/水的体积比为5：1：0.1；在第四次洗脱过程中，多卤代烷烃/低碳醇/水的体积比为3：1：0.1；在第五次洗脱过程中，多卤代烷烃/低碳醇/水的体积比为1：1：0.1。根据上述方案的本专利技术，其有益效果在于：本专利技术直接以普通大豆磷脂为原料，经过酶解反应、酶解后预处理过程及柱层析，制备出高纯度溶血磷脂酰胆碱产物，其制备过程操作简单，原材料廉价易得，反应条件温和可控，生产周期短，容易实现工业化，可降低高纯度磷脂酰胆碱产品的生产成本；本专利技术的洗脱过程可以实现溶血磷脂酰胆碱的高效分离，生产的溶血磷脂酰胆碱纯度高，生产效率高，目标产物的产率高，整个制备过程的综合成本低廉。附图说明图1为本专利技术的制备流程图。图2为本专利技术中制备得到的高纯度溶血磷脂酰胆碱的核磁磷谱图。具体实施方式下面结合实施方式对本专利技术进行进一步的描述：如图1所示，一种制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的方法，在磷脂酶存在下，以大豆磷脂为原料进行酶解反应，酶解反应产物经过酶解后预处理过程并进行柱层析，得到高纯度溶血磷脂酰胆碱的溶液，以多卤代低碳烷烃-低碳醇-水为洗脱剂进行多次洗脱，脱去溶剂并真空干燥后得到高纯度溶血磷脂酰胆碱产物。在本专利技术中，大豆磷脂为市售的液体大豆磷脂或粉末大豆磷脂，该原料易得且成本低，大大降低了高成本原料的依赖程度。本专利技术的具体技术方案如下：1、酶解过程在酶解反应过程中，将大豆磷脂进行溶解，并选用磷脂酶A1或磷脂酶A2进行酶解。具体的：当选用磷脂酶A1时，大豆磷脂充分溶解于水溶液中；当选用磷脂酶A2时，大豆磷脂充分溶解于氯化钙溶液中，保证提高磷脂酶A2的稳定性。优选的，酶解反应时控制反应温度为40～80°C之间，使得磷脂酶的活性更高，通过控制反应时间来提高转化率并减少反应物残留，因为反应物的残留会加大提纯的难度。磷脂酶的用量为：每100g大豆磷脂中加入0.1～2.0毫升磷脂酶酶液，既能保证大豆磷脂进行充分的酶解反应，进而保证反应产物溶血磷脂酰胆碱的收率，同时降低了原料的消耗。2、酶解后预处理过程酶解后的一系列预处理过程对于得到高纯度的溶血磷脂酰胆碱至关重要，其包括了多次的溶解、过滤及浓缩的过程。具体的：（1）先向酶解反应产物中加入丙酮，过滤分离得到固体沉淀物；（2）该固体沉淀物溶解于多卤代低碳烷烃（例如二氯甲烷）中得到溶液；（3）该溶液倒入低碳一元醇（例如乙醇）中析出固体物质，过滤除掉所析出的固体物质并收集滤液；（4）收集的滤液进行浓缩。优选的，步骤（1）中丙酮的体积为酶解反应产物体积的3～5倍，以保证酶解反应物溶解的速度及效率；步骤（2）中多卤代低碳烷烃的用量为：每10克固体反应物溶解于10～30毫升多卤代本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，在磷脂酶存在下，对大豆磷脂进行酶解反应，酶解反应产物经过预处理后转移至硅胶柱中，并以多卤代低碳烷烃‑低碳醇‑水为洗脱剂进行多次洗脱，收集目标物的溶液，浓缩干燥后得到高纯度溶血磷脂酰胆碱产品。

【技术特征摘要】
1.一种制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，在磷脂酶存在下，对大豆磷脂进行酶解反应，酶解反应产物经过预处理后转移至硅胶柱中，并以多卤代低碳烷烃-低碳醇-水为洗脱剂进行多次洗脱，收集目标物的溶液，浓缩干燥后得到高纯度溶血磷脂酰胆碱产品。2.根据权利要求1所述的制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，所述大豆磷脂溶解于水溶液，并选用磷脂酶A1进行酶解反应。3.根据权利要求1所述的制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，所述大豆磷脂溶解于氯化钙溶液，并选用磷脂酶A2进行酶解反应。4.根据权利要求1所述的制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，酶解反应产物进行预处理的过程具体包括以下步骤：先向酶解反应产物中加入丙酮，搅拌溶解后过滤分离得到固体沉淀物；该固体沉淀物溶解于多卤代低碳烷烃中得到溶液；该溶液倒入低碳一元醇中析出固体物质，过滤除掉析出固体物质并收集滤液；收集的滤液进行浓缩。5.根据权利要求1或4所述的制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，所述多卤代低碳烷烃...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨利平，陈鑫，
申请(专利权)人：杨利平，
类型：发明
国别省市：广东,44