一种核酸及其用途制造技术

技术编号:21908346 阅读:86 留言:0更新日期:2019-08-21 10:45
本发明专利技术属于生物医药领域,涉及一种核酸及其用途。具体地,本发明专利技术涉及一种核酸,其由选自式Ⅰ至式Ⅲ所示的核苷酸残基及其盐中的至少一种修饰5’‑d(GGT TGG TGT GGT TGG)‑3’(SEQ ID NO:1)所形成。在此基础上,本发明专利技术还涉及该核酸的用途。本发明专利技术核酸可作为凝血酶适配体,其与凝血酶的亲和性强,具有抗凝血的效果。

A Nucleic Acid and Its Use

【技术实现步骤摘要】
一种核酸及其用途
本专利技术属于生物医药领域,具体涉及一种核酸,还涉及该核酸的用途。
技术介绍
适配体是指在一定条件下筛选出来的对特定靶标有亲和能力的核酸,特定靶标包括与环境污染相关的金属离子(例如Hg2+,Pb2+)、与疾病发生相关的信号分子、异常表达的细胞(肿瘤细胞等)、病变组织以及外来的病毒和细菌等。因此,高特异性、高亲和性的适配体可以作为检测金属离子或疾病信号分子的探针,也可以作为抑制致病性蛋白分子、病毒、细菌、细胞和组织的治疗性药物。亲和力和特异性更高的适配体是目前的一大研究热点。目前的发现策略主要有两种:第一种是针对已筛选出来的具有应用价值的适配体,通过修饰碱基进行结构修饰,以进行功能优化,提高适配体对靶标的亲和力和特异性;第二种是将修饰碱基或修饰核苷酸引入核酸序列库中,利用体外筛选进化富集技术(invitroselection)等方法从头筛选出对靶标具有更高亲和力和特异性的适配体。碱基的修饰主要是为了引入功能基,以改变核酸的高级结构和生物活性,进而筛选出性能更优的功能核酸。碱基修饰的方法主要有两种:一种是借助卤素原子,经钯催化的偶联反应,以烯基或炔基作连接臂引入羧基、氨基、羟基、巯基或酯基,再通过成酰胺键或成醚键等方式引入功能基;另一种是通过从头合成修饰碱基,在嘧啶上引入羧基,再经羧基引入功能基。体外筛选进化富集技术(invitroselection)是根据目标核酸的用途,在含有大约1014-1016个核酸序列的库中设定筛选条件和标准,在一定的筛选条件下,核酸序列形成多种多样的高级结构,不论是以裂解或连接核酸为筛选标准,还是以高亲和性和高特异性结合各种分子为筛选标准,将筛选出来的具有活性的核酸序列经过多轮的扩增和再筛选,得到活性最高的目标核酸。凝血是重要的生理过程,凝血机制异常会引发多种严重疾病,例如,凝血造成的血栓是急性心肌梗死、脑卒中、肺栓塞、深静脉血栓、弥漫性血管内凝血等疾病的直接病因之一。针对凝血机制异常所进行的药物研究的重点方向之一是针对凝血级联中多个蛋白分子,筛选出具有抑制凝血作用的适配体。目前,针对于凝血酶已筛选出两个适配体,其中之一是由15个核苷酸单元组成的DNA核酸序列5’-d(GGTTGGTGTGGTTGG)-3’(SEQIDNO:1),I期临床试验已表明该适配体具有抗凝血作用,并且该适配体对于与血栓形成相关的疾病也具有潜在的预防和治疗价值。但该适配体也存在效价低、作用时间短(半衰期短)的缺点。目前尚需一种新的凝血酶适配体,以提高适配体的效价性和作用时间。
技术实现思路
本专利技术提供了一种核酸,其可作为凝血酶适配体,其与凝血酶的亲和性强,具有抗凝血的作用。本专利技术第一方面涉及一种核酸,其由选自式Ⅰ至式Ⅲ所示的核苷酸残基及其盐中的至少一种修饰5’-d(GGTTGGTGTGGTTGG)-3’(SEQIDNO:1)所形成;SEQIDNO:1代表5’-d(GGTTGGTGTGGTTGG)-3’;其中,i各自独立地为0、1、2或3;R各自独立地选自-O(CH2)mR’、-S(CH2)mR’和-NH(CH2)mR’;其中,R’各自独立地选自羟基、巯基、氨基和酰胺基,m各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10;n各自独立地为1、2、3、4、5、6、7或8。本专利技术第一方面的某些实施方式中,所述修饰是指SEQIDNO:1核酸序列中至少一个碱基被选自式Ⅰ至式Ⅲ所示的核苷酸残基及其盐中的至少一个所替换。本专利技术第一方面的某些实施方式中,式Ⅰ至式Ⅲ所示的核苷酸残基中,R为-NH(CH2)mR’。本专利技术第一方面的某些实施方式中,式Ⅰ至式Ⅲ所示的核苷酸残基中的R’各自独立地选自羟基和氨基。本专利技术第一方面的某些实施方式中,式Ⅰ至式Ⅲ所示的核苷酸残基中,R’为氨基。本专利技术第一方面的某些实施方式中,式Ⅰ至式Ⅲ所示的核苷酸残基中的m各自独立地为1、2、3或4。本专利技术第一方面的某些实施方式中,式Ⅰ至式Ⅲ所示的核苷酸残基中的m各自独立地为2或3。本专利技术第一方面的某些实施方式中,式Ⅰ至式Ⅲ所示的核苷酸残基中的n各自独立地为1、2、3、4、5或6。本专利技术第一方面的某些实施方式中,式Ⅰ至式Ⅲ所示的核苷酸残基中的n各自独立地为1或2。本专利技术第一方面的某些实施方式中,所述的核苷酸残基选自如下的化合物:其中,i各自独立地为0、1、2或3;优选地,i为1。本专利技术第一方面的某些实施方式中,式Ⅰ至式Ⅲ所示的核苷酸残基的盐各自独立地选自碱金属盐(例如钠盐、钾盐)、碱土金属盐(例如铯盐、镁盐)、铵盐和胺盐(例如叔胺盐、季铵盐)。本专利技术第一方面的某些实施方式中,式Ⅰ至式Ⅲ所示的核苷酸残基的盐是通过式Ⅰ至式Ⅲ所示的核苷酸残基中与P原子连接的羟基中的氢各自独立地被选自金属离子(例如Na+,K+,Cs+,Mg2+)、铵离子和胺离子(例如叔胺离子、季铵离子、(CH3)3NH+,(C2H5)3NH+,(C3H7)3NH+,(C4H9)3NH+,(C4H9)4N+)中至少一种所替换形成的。本专利技术第一方面的某些实施方式中,所述核酸选自如下的核酸:5’-d(GG1TGGTGTGGTTGG)-3’(SEQIDNO:2)5’-d(GGTTGG1GTGGTTGG)-3’(SEQIDNO:3)5’-d(GGTTGGT1TGGTTGG)-3’(SEQIDNO:4)5’-d(GGTTGGTGTGG1TGG)-3’(SEQIDNO:5)5’-d(GGTTGG1G1GGTTGG)-3’(SEQIDNO:6)5’-d(GG2TGGTGTGGTTGG)-3’(SEQIDNO:7)5’-d(GGTTGGTGTGG2TGG)-3’(SEQIDNO:8)5’-d(GG2TGGTGTGG2TGG)-3’(SEQIDNO:9)5’-d(GGTTGG2GTGGTTGG)-3’(SEQIDNO:10)5’-d(GGTTGGT2TGGTTGG)-3’(SEQIDNO:11)5’-d(GG3TGGTGTGGTTGG)-3’(SEQIDNO:12)5’-d(GGTTGG3GTGGTTGG)-3’(SEQIDNO:13)5’-d(GGTTGGT3TGGTTGG)-3’(SEQIDNO:14)5’-d(GGTTGGTGTGG3TGG)-3’(SEQIDNO:15),和5’-d(GG3TGGTGTGG3TGG)-3’(SEQIDNO:16)。本专利技术第一方面的某些实施方式中,1代表如下的核苷酸残基或其盐:本专利技术第一方面的某些实施方式中,2代表如下的核苷酸残基或其盐:本专利技术第一方面的某些实施方式中,3代表如下的核苷酸残基或其盐:本专利技术第一方面的某些实施方式中,1至3代表的任一核苷酸残基的盐各自独立地选自碱金属盐(例如钠盐、钾盐)、碱土金属盐(例如铯盐、镁盐)、铵盐和胺盐(例如叔胺盐、季铵盐)中的至少一种。本专利技术第一方面的某些实施方式中,1至3代表的任一核苷酸残基的盐是通过1至3代表的核苷酸残基中与P原子连接的羟基中的氢各自独立地被选自金属离子(例如Na+,K+,Cs+,Mg2+)、铵离子和胺离子(例如叔胺离子、季铵离子、(CH3)3NH+,(C2H5)3NH+,(C3H7)3NH+,(C4H9)3NH+,(C4H9)4N+)中的任一种替换所形成。本专利技术第一方面的某些实施方式中,所述核本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种核酸,其由选自式Ⅰ至式Ⅲ所示的核苷酸残基及其盐中的至少一种修饰5’‑d(GGT TGG TGT GGT TGG)‑3’(SEQ ID NO:1)所形成;

【技术特征摘要】
1.一种核酸,其由选自式Ⅰ至式Ⅲ所示的核苷酸残基及其盐中的至少一种修饰5’-d(GGTTGGTGTGGTTGG)-3’(SEQIDNO:1)所形成;其中,i各自独立地为0、1、2或3;R各自独立地选自-O(CH2)mR’、-S(CH2)mR’和-NH(CH2)mR’;其中,R’各自独立地选自羟基、巯基、氨基和酰胺基,m各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10;n各自独立地为1、2、3、4、5、6、7或8。2.根据权利要求1所述的核酸,其中,式Ⅰ至式Ⅲ所示的核苷酸残基中,R为-NH(CH2)mR’。3.根据权利要求1或2所述的核酸,其中,式Ⅰ至式Ⅲ所示的核苷酸残基中的R’各自独立地选自羟基和氨基,优选为氨基。4.根据权利要求1至3中任一项所述的核酸,其中,式Ⅰ至式Ⅲ所示的核苷酸残基中的m各自独立地为1、2、3或4,优选为2或3。5.根据权利要求1至4中任一项所述的核酸,其中,式Ⅰ至式Ⅲ所示的核苷酸残基中的n各自独立地为1、2、3、4、5或6,优选为1或2。6.根据权利要求1至5中任一项所述的核酸,其中,所述的核苷酸残基选自如下的化合物:其中,i各自独立地为0、1、2或3;优选地,i为1。7.根据权利要求1至6中任一项所述的核酸,其选自如下的核酸:5’-d(GG1TGGTGTGGTTGG)-3’(SEQIDNO:2)5’-d(GGTTGG1GTGGTTGG)-3’(SEQIDNO:3)5’-d(GGTTGGT1TGGTTGG)-3’(SEQIDNO:4)5’-d(GGTTGGTGTGG1...

【专利技术属性】
技术研发人员:何军林史卫国杜闪闪李阳郭磊李朋羽
申请(专利权)人:中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
类型:发明
国别省市:北京,11

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