一种绿针假单胞菌及其培养方法与应用技术

技术编号:21908240 阅读:18 留言:0更新日期:2019-08-21 10:44
本发明专利技术提供一种绿针假单胞菌,该绿针假单胞菌为绿针假单胞菌Pseudomonas chlororaphis Pc‑HG28‑5,保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”,保藏号为CGMCC No.14208。该绿针假单胞菌是从小麦根部分离、筛选出的植物根际促生细菌,可以采用蛋白胨培养基进行培养。该绿针假单胞菌可以降低种衣剂的副作用,防止疫病,降低植物根际土壤中有害真菌数量。

A Pseudomonas aeruginosa and its culture method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种绿针假单胞菌及其培养方法与应用
本专利技术属于微生物领域,具体地,涉及一种绿针假单胞菌及其培养方法与应用。
技术介绍
植物根际促生细菌(PlantGrowthPromotingRhizobacteria,简称PGPR)是指存在于植物根际环境中,通过产生植物激素、溶解无机磷等直接作用和竞争生态位、诱导植物系统抗性等间接作用促进植物生长的一类有益细菌。近年来大量研究表明,PGPR菌株能在植物根系及根际土壤有效定殖,具有显著的促生、防病和增产效果、同时调节植物根际土壤微生态环境、缓解生态污染等特性,成为有机生态农业可持续发展的有效途径之一,应用前景十分广阔。种衣剂是根据种子或种苗的特性加工而成的一种种子处理剂,具有保护种子、提供营养、增强抗逆性、缓慢释放药肥等作用。但是种衣剂也具有一定的副作用,例如:影响种子出苗,降低出苗整齐度,甚至造成畸形苗;产生药害,影响植物生长发育,降低作物产量和品质,污染植物根际土壤环境,降低土壤肥力等等。利用有益PGPR菌株提高植物免疫能力,防治植物病害,提高产量和品质,同时减少种衣剂副作用,是农业可持续发展的新途径。
技术实现思路
有鉴于此,本专利技术提供一种绿针假单胞菌及其培养方法与应用,以解决上述问题。具体地,本专利技术采取如下技术方案:本专利技术提供一种绿针假单胞菌,它为绿针假单胞菌PseudomonaschlororaphisPc-HG28-5,已于2017年06月01日,保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏号为CGMCCNo.14208。菌株的分类命名为PseudomonaschlororaphisPc-HG28-5。本专利技术所得到的菌株具有以下生物学特性:该菌株的菌体为微弯的杆状,直径0.6~0.8μm,长1.5~2.8μm,革兰氏阴性,多个极生鞭毛。生长温度范围为4~40℃,最适生长温度为30℃,最高耐盐浓度为5%。在营养琼脂(NA)平板上菌落呈米白色,圆形,表面光滑湿润,不透明,边缘整齐。能利用蔗糖、葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、丙酸盐和丁酸盐,不能利用L-阿拉伯糖和山梨醇,硝酸盐还原、过氧化氢酶反应和明胶液化呈阳性,淀粉水解呈阴性,不产生H2S。另外,该菌株的16SrDNA序列如序列1所示,该序列全长为1474bp,Pseudomonaschlororaphis(绿针假单胞菌)的16SrDNA序列同源性达到99%。综上所述,综合该菌株的菌落形态、培养条件及分子生物学鉴定的结果表明:该菌株属于假单胞菌属Pseudomonas的绿针假单胞菌,其分类命名记为PseudomonaschlororaphisPc-HG28-5。本专利技术提供一种所述的绿针假单胞菌的培养方法,它包括采用蛋白胨培养基对所述绿针假单胞菌进行培养的步骤,其中,所述绿针假单胞菌是从小麦根部分离、筛选得到的。本专利技术提供一种绿针假单胞菌菌液,它包括所述绿针假单胞菌和硫酸镁。基于上述,所述绿针假单胞菌菌液中绿针假单胞菌的浓度为(1~2)×108CFU/ml。基于上述绿针假单胞菌菌液,它是通过浓度为0.05~0.1mol/l的无菌硫酸镁溶液和所述绿针假单胞菌混合得到的。基于上述绿针假单胞菌菌液,它是通过含硫酸镁的缓冲溶液和所述绿针假单胞菌混合得到的,以100质量份计,所述缓冲溶液包括以下质量份的组分:柠檬酸钠0.02~0.1份、硫酸铵0.1~0.2份、磷酸氢二钾0.5~0.9份、磷酸二氢钾0.1~0.3份、硫酸镁0.01~0.05份、甘油0.5~1.5份、余量为无菌水。本专利技术提供一种所述绿针假单胞菌菌液的应用方法,该方法包括播种前利用所述绿针假单胞菌菌液对种子进行浸泡,得到浸泡后的种子的步骤。基于上述绿针假单胞菌菌液的应用方法,该方法还包括采用种衣剂对所述浸泡后的种子进行拌种的步骤。本专利技术提供一种所述绿针假单胞菌菌液的应用方法,该方法包括移栽前利用所述绿针假单胞菌菌液对待移栽植株的根部进行浸泡和/或在移栽后20d之内对植株根部的土壤进行灌注处理的步骤。本专利技术提供的绿针假单胞菌能强烈抑制辣椒、黄瓜、西红柿等植物生长过程中疫霉菌的菌丝生长,抑制游动孢子囊和游动孢子的形成,抑制游动孢子囊和休止孢子的发芽,抑制根际土壤疫霉菌、腐霉菌等病菌的浓度并防止病原菌侵入,因此,利用所述绿针假单胞菌配制的菌液对植物种子进行浸泡、对待移栽植株的根部进行浸泡和/或对移栽后植株的土壤进行浇灌,可以防治疫病的发生,促进植株生长,并显著提高根系活力,提高产量;进一步,在采用所述绿针假单胞菌液对种子进行浸泡之后,再与种衣剂进行拌种,还可以有效降低种衣剂的副作用。序列表中:序列1为本专利技术提供的绿针假单胞菌的DNA序列。附图说明图1实施例1中所述菌落的形态图。图2根据16SrDNA测序结果构建的系统发育树,图2中括号内为该菌株在GenBanK中的收录号,分支上的数字代表置信度。图3处理一和处理二中辣椒根系活力的对比图。图4处理一和处理二中辣椒根际土壤中脲酶活性的对比图。图5处理一和处理二中辣椒根际土壤中磷酸酶活性的对比图。图6处理一和处理二中辣椒根际土壤中蔗糖酶活性的对比图。图7处理一和处理二中辣椒根际土壤中过氧化氢酶活性的对比图。图8处理一和处理二中辣椒根际土壤速效氮含量的对比图。图9Pc-HG28-5菌液处理对辣椒根部疫病的防治效果图。图10Pc-HG28-5菌液处理对辣椒叶部疫病的诱导抗性效果图。图11Pc-HG28-5菌液处理对辣椒叶部疫病的诱导抗性效果叶片放大图。图12处理三和处理四中辣椒根系活力的对比图。图13处理三和处理四中辣椒根际土壤中脲酶活性的对比图。图14处理三和处理四中辣椒根际土壤中磷酸酶活性的对比图。图15处理三和处理四中辣椒根际土壤中蔗糖酶活性的对比图。图16处理三和处理四中辣椒根际土壤中过氧化氢酶活性的对比图。图17处理三和处理四中辣椒根际土壤速效氮含量的对比图。图18是缓冲溶液和无菌硫酸镁溶液的抗病效果对比图。具体实施方式下面通过具体实施方式,对本专利技术的技术方案做进一步的详细描述。实施例1本实施例提供一种从小麦根部及其根际土壤中的植物根际促生细菌菌群筛选出的绿针假单胞菌,绿针假单胞菌的获取和培养方法包括以下步骤:菌株的获取采集健康生长优越的小麦带土根部剪取1g,用研钵研碎,并用无菌水稀释至10000倍,将稀释好得到的混合液均匀地涂在1/10TSA培养基平板上,倒置放于28℃恒温培养箱中培养48h,待菌株长出后,用无菌牙签挑取大小、颜色和形态不同的细菌菌落,在TSA培养基平板上划线分离纯化,纯化后的菌株放-70℃超低温冰箱里保存;将分离纯化得到的菌株通过室内试验和田间试验反复筛选得到具有防病、促生和缓解种衣剂副作用的菌株。菌株的鉴定采用TSA培养基在25~30℃对所述菌株进行培养3~5天形成菌落,所述菌落的形态参见图1,由图1可知,所述菌落呈米白色,圆形,表面光滑湿润,不透明,边缘整齐。16SrDNA鉴定利用16SrDNA鉴定对所述菌株的种属进行鉴定,测序结果见序列1,根据16SrDNA测序结果构建的系统发育树参见图2;所述菌株的16SrDNA序列全长为1474bp,和Pseudomonaschlororaphis(绿针假单胞菌)的16SrDNA序列同源性达到99%,本文档来自技高网...

【技术保护点】
1. 一种绿针假单胞菌,其特征在于,它为绿针假单胞菌

【技术特征摘要】
1.一种绿针假单胞菌,其特征在于,它为绿针假单胞菌PseudomonaschlororaphisPc-HG28-5,保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”,保藏号为CGMCCNo.14208。2.一种权利要求1所述的绿针假单胞菌的培养方法,其特征在于,它包括采用蛋白胨培养基对所述绿针假单胞菌进行培养的步骤,其中,所述绿针假单胞菌是从小麦根部分离、筛选得到的。3.一种绿针假单胞菌菌液,其特征在于,它包括权利要求1所述的绿针假单胞菌和硫酸镁。4.根据权利要求3所述的绿针假单胞菌菌液,其特征在于,它中的绿针假单胞菌的浓度为(1~2)×108CFU/ml。5.根据权利要求3或4所述的绿针假单胞菌菌液,其特征在于,它是通过浓度为0.05~0.1mol/l的无菌硫酸镁溶液和所述绿针假单胞菌混合得到的。6.根据权利要求3或4所述的绿针假单...

【专利技术属性】
技术研发人员:申顺善朴凤植王娟文才艺闫凤鸣
申请(专利权)人:河南农业大学
类型:发明
国别省市:河南,41

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