本发明专利技术提供了结合剂和使用这些结合剂或编码其的核酸的用于治疗癌症的方法,所述结合剂包含对CD3特异以允许与T细胞结合的结合结构域和对肿瘤相关紧密连接蛋白分子特异的结合结构域。
Preparations for the treatment of cancer diseases expressing tight junction proteins
【技术实现步骤摘要】
用于治疗表达紧密连接蛋白的癌症疾病的制剂紧密连接蛋白为位于上皮细胞和内皮细胞的紧密连接的膜内在蛋白。预测紧密连接蛋白具有四个跨膜节段,带有两个细胞外环,并且N-和C-末端位于胞浆内。跨膜蛋白的紧密连接蛋白(CLDN)家族在维持上皮细胞和内皮细胞紧密连接方面起关键的作用并且可能也在维持细胞骨架和细胞信号转导方面起作用。紧密连接蛋白18(CLDN18)分子为具有四个跨膜疏水区和两个细胞外环(环1被疏水区1和疏水区2所包围;环2被疏水区3和4所包围)的膜内在蛋白(四跨膜蛋白)。CLDN18以两种不同的剪接变体存在,在小鼠和人类中对其进行了描述(Niimi,Mol.Cell.Biol.21:7380-90,2001)。剪接变体(基因库登录号:剪接变体1(CLDN18.1):NP_057453,NM_016369,剪接变体2(CLDN18.2):NM_001002026,NP_001002026)具有大约27.9/27.72kD的分子量。剪接变体CLDN18.1和CLDN18.2在包含第一跨膜(TM)区和环1的N末端部分不同,而C末端的一级蛋白序列是相同的。在正常组织中,除了胃之外没有可检测的CLDN18.2表达,其中CLDN18.2仅仅表达在短期分化型胃上皮细胞上。恶性转化期间CLDN18.2保持,因此其频繁显示在人胃癌细胞的表面。而且,在食道,胰腺和肺腺癌中以显著的水平异位地活化这种全肿瘤抗原。CLDN18.2蛋白也定位于胃癌腺癌的淋巴结转移并且尤其是到卵巢的远处转移(所谓的克鲁根勃氏瘤)。CLDN6表达在一系列不同的人类癌细胞中而在正常组织中的表达限于胎盘。紧密连接蛋白诸如CLDN18.2和CLDN6在癌症和正常细胞之间的差异表达,它们的膜定位和绝大多数的毒性相关的正常组织没有它们使得这些分子成为引人注目的癌症免疫疗法靶标并且在癌症治疗中用于靶向紧密连接蛋白的基于抗体疗法的使用保证了高水平的治疗特异性。使用T细胞的潜能用于癌症治疗的方法包括肿瘤衍生蛋白、RNA或肽抗原的接种,肿瘤衍生的离体扩增的T细胞的输注(称为过继转移),T细胞受体基因转移或双或三特异性抗体与T细胞的直接接合。同样地,临床地组合测试许多T细胞应答的刺激剂或作为单一疗法,诸如Toll样受体的配体,阻断T细胞上CTLA-4的抗体,免疫刺激细胞因子,或参与癌细胞的免疫逃逸的抗体中和分子诸如TGFβ或B7-H1。如果患者的肿瘤被T细胞浸润,患者看起来明显活得更长的观察结果促进了基于T细胞的治疗的强烈研发。而且,许多小鼠模型已显示通过各种方法的T细胞接合可以根除甚至大的肿瘤,并且许多T细胞治疗最近在治疗癌症适应症方面取得了显著的进展。提供用于癌症疾病治疗的新的制剂和方法是本专利技术的一个目标。本专利技术问题的解决方案基于产生结合剂的概念,其包含对肿瘤相关的紧密连接蛋白分子,即癌细胞,特异性的结合结构域。其他结合结构域为对CD3特异的以允许与T细胞结合,并且允许将T细胞拉到复合体中,因此使得T细胞的细胞毒性效应靶向于癌细胞成为可能。这种复合体的形成可以诱导细胞毒性T细胞中信号转导,无论是靠其自身还是与佐细胞组合,这导致细胞毒性介质的释放。我们首次报导了靶向于紧密连接蛋白和CD3的结合剂可以诱导强有力的T细胞介导的溶解并且在治疗肿瘤疾病中有效。专利技术概述在一方面,本专利技术涉及包含至少两个结合结构域的结合剂,其中第一结合结构域能与紧密连接蛋白结合并且第二结合结构域能与CD3结合。本专利技术的结合剂与细胞毒性细胞(通过接合CD3受体)和待作为靶标被破坏的表达CLDN的癌细胞结合。在一实施方案中,结合剂为双特异性分子诸如双特异性抗体,尤其是双特异性单链抗体。在一实施方案中,所述紧密连接蛋白表达在癌细胞中。在一实施方案中,所述紧密连接蛋白表达在癌细胞的表面上。在一实施方案中,所述紧密连接蛋白选自紧密连接蛋白18.2和紧密连接蛋白6。在一实施方案中,所述第一结合结构域能与所述紧密连接蛋白的细胞外结构域结合。在一实施方案中,所述第一结合结构域能与活细胞的表面上存在的CLDN的天然表位结合。在一实施方案中,所述第一结合结构域能与CLDN的第一细胞外环结合。在一实施方案中,所述第二结合结构域能与CD3的ε链结合。在一实施方案中,所述CD3表达在T细胞的表面。在一实施方案中,所述结合剂与T细胞上的CD3结合导致所述T细胞的增殖和/或活化,其中所述活化的T细胞优选地释放细胞毒性因子,例如穿孔素和粒酶,并且引起癌细胞的细胞溶解和凋亡。在一实施方案中,所述与紧密连接蛋白的结合和/或所述与CD3的结合为特异性结合。在一实施方案中,结合剂为全长抗体或抗体片段的形式。在一实施方案中,结合剂包含四个抗体可变结构域,具有至少两个结合结构域,其中至少一个结合结构域与紧密连接蛋白结合并且至少一个结合结构域与CD3结合。在一实施方案中,结合剂包含对紧密连接蛋白抗原具有特异性的免疫球蛋白的重链可变结构域(VH)(VH(CLDN)),对紧密连接蛋白抗原具有特异性的免疫球蛋白的轻链可变结构域(VL)(VL(CLDN)),对CD3具有特异性的免疫球蛋白的重链可变结构域(VH)(VH(CD3)),和对CD3具有特异性的免疫球蛋白的轻链可变结构域(VL)(VL(CD3))。在一实施方案中,结合剂为包含在同一多肽链上与轻链可变结构域连接的重链可变结构域的双链抗体(diabody)的形式,从而使得这两个结构域不配对。在一实施方案中,双链抗体包含两条多肽链,其中一条多肽包含VH(CLDN)与VL(CD3),并且另一条多肽链包含VH(CD3)与VL(CLDN)。在一实施方案中,结合剂为由两个经由接头肽连接的scFv分子组成的双特异性单链抗体的形式,其中重链可变区(VH)和相应的轻链可变区(VL)优选地从N末端到C末端按以下顺序排列:VH(CLDN)-VL(CLDN)-VH(CD3)-VL(CD3)、VH(CD3)-VL(CD3)-VH(CLDN)-VL(CLDN)或VH(CD3)-VL(CD3)-VL(CLDN)-VH(CLDN)。在一实施方案中,所述重链可变区(VH)和相应的轻链可变区(VL)经由长的肽接头连接,优选地,包含氨基酸序列(GGGGS)3或VE(GGGGS)2GGVD的肽接头。在一实施方案中,所述两个VH-VL或VL-VHscFv单元经由短的肽接头连接,优选的包含氨基酸序列SGGGGS或GGGGS的肽接头。在一实施方案中,所述CLDN为CLDN18.2并且所述VH(CLDN)包含SEQIDNO:8所代表的氨基酸序列或其片段或所述氨基酸序列或片段的变体和VL(CLDN)包含SEQIDNO:15所代表的氨基酸序列或其片段或所述氨基酸序列或片段的变体。在一实施方案中CLDN为CLDN18.2并且所述VH(CLDN)包含SEQIDNO:6所代表的氨基酸序列或其片段或所述氨基酸序列或片段的变体和VL(CLDN)包含SEQIDNO:11所代表的氨基酸序列或其片段或所述氨基酸序列或片段的变体。在一实施方案中所述CLDN为CLDN6并且所述VH(CLDN)包含SEQIDNO:22所代表的氨基酸序列或其片段或所述氨基酸序列或片段的变体和VL(CLDN)包含SEQIDNO:23所代表的氨基酸序列或其片段或所述氨基酸本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.包含至少两个结合结构域的结合剂,其中第一结合结构域能与紧密连接蛋白(CLDN)结合,并且第二结合结构域能与CD3结合。
【技术特征摘要】
2012.11.13 EP PCT/EP2012/004712;2013.07.30 EP PCT/1.包含至少两个结合结构域的结合剂,其中第一结合结构域能与紧密连接蛋白(CLDN)结合,并且第二结合结构域能与CD3结合。2.如权利要求1所述的结合剂,其中所述结合剂为双特异性分子。3.如权利要求2所述的结合剂,其中所述双特异性分子为双特异性抗体。4.如权利要求3所述的结合剂,其中所述双特异性抗体为双特异性单链抗体。5.如...
【专利技术属性】
技术研发人员:尤格·萨因,欧兹兰·图勒茨,克里斯蒂娜·施塔德勒,茱莉亚·霍兰,哈亚特·巴尔马哈茂德,提姆·拜塞特,劳拉·普拉姆,菲卜瑞斯·勒加尔,阿恩·杰德瑞兹克,马库斯·菲德勒,
申请(专利权)人:拜恩科技股份公司,安斯泰来制药株式会社,TRON美因茨约翰尼斯·古腾堡大学附属转化肿瘤医学院公益有限公司,
类型:发明
国别省市:德国,DE
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