本发明专利技术涉及抗体药物技术领域，尤其涉及针对T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白3(TIM3)的纳米抗体及其应用。本发明专利技术公开了一组特异性针对Tim3的纳米抗体，公开了其VHH链的框架区FR和互补决定区CDR的氨基酸序列，同时还公布了编码该单域重链纳米抗体的基因序列。本发明专利技术提供的抗Tim3纳米抗体能有效与Tim3抗原结合，具有较高特异性及亲和力。通过本发明专利技术所公布的单域重链纳米抗体基因序列，为基于Tim3靶点的研究包括基因检测及抗体药物开发提供了新思路。
Single Domain Antibody Against T Lymphocyte Immunoglobulin Mucin 3
【技术实现步骤摘要】
针对T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白3的单域抗体
本专利技术涉及生物医学或生物制药
，公开了针对T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim3)的单域抗体及其编码序列和应用。
技术介绍
肿瘤细胞的识别、肿瘤抗原被呈递给T细胞、T细胞激活及特异性杀伤肿瘤细胞。在这个过程中，T细胞的激活需要协同刺激信号，而这些信号需要“免疫检查点”的调控。T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tcellimmunoglobulinandmucin3，TIM3)作为人体重要的免疫检查点，在肿瘤微环境中的免疫调节中起着至关重要的作用。TIM3是TIM家族成员，编码含有281个氨基酸的Ⅰ型膜蛋白。TIM分子的共同结构包括:免疫球蛋白N末端V区、黏蛋白结构域、跨膜区和胞内区。其胞外部分包括一个富含半胱氨酸的免疫球蛋白样区域和一个富含苏氨酸、丝氨酸和脯氨酸的黏蛋白区，胞浆区具有6个酪氨酸，其中1个属于酪氨酸磷酸化基序部分。在免疫球蛋白可变区由4个半胱氨酸组成的高度保守的不同于其他免疫球蛋白超家族成员的独特裂隙:它可以与磷脂酰丝氨酸(PS)结合。TIM3选择性地表达在分泌IFN-γ的T辅助细胞(Th1和Th17)、T调控细胞(Treg)、树突状细胞(DCs)、单核细胞、肥大细胞、NK细胞、肿瘤浸润性淋巴细胞(TILs)上，在肿瘤细胞上亦有表达，如黑色素瘤、胃癌、B细胞淋巴瘤。TIM3分子在免疫细胞上广泛表达，可与细胞表面的半乳糖凝集素-9(galectin-9，Gal-9)、磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine，PtdSer)、高迁移率族蛋白B-1(highmobilitygroupbox-1，HMGB-1)等多个配体结合，参与调节多种T细胞包括调节性T细胞(regulatoryTcell，Treg)的分化，在免疫自稳与凋亡细胞的清除过程中发挥着重要作用。TIM3在免疫耐受的形成和维持中有重要作用，TIM3可诱导CD8+T细胞“耗竭”，还可通过诱导凋亡的方式抑制Th1和Th17细胞生长，下调Th1和Th17型免疫反应，促进Treg分化，增强Treg抑制作用。除此之外，Tim3通过调节巨噬细胞的活化及功能，抑制组织破坏性免疫应答，在自身免疫性疾病中发挥重要的调节作用。作为肿瘤免疫应答的负调控因子，TIM3具有很明显的肿瘤药物开发潜力，已发展为免疫治疗与药物开发领域热门的靶点分子。但是，仍然需要开发具有良好结合性能的抗体药物。
技术实现思路
本专利技术提供了29株特异性针对TIM3的纳米抗体，同时提供纳米抗体的编码序列、制备方法。在本专利技术的第一方面，本专利技术提供了T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白3(TIM3)特异性纳米抗体的CDR区。在一些实施方案中，所述TIM3纳米抗体包含一个特异性结合TIM3的免疫球蛋白单一可变结构域。在一些实施方案中，所述TIM3纳米抗体包含两个或更多个特异性结合TIM3的免疫球蛋白单一可变结构域。在一些实施方案中，所述至少一个免疫球蛋白单一可变结构域包含选自以下的CDRl、CDR2和CDR3:(1)SEQIDNO:1所示的CDR1，SEQIDNO:2所示的CDR2，SEQIDNO:3所示的CDR3(对应于抗体株1的CDR)；(2)SEQIDNO:4所示的CDR1，SEQIDNO:5所示的CDR2，SEQIDNO:6所示的CDR3(对应于抗体株2的CDR)；(3)SEQIDNO:7所示的CDR1，SEQIDNO:8所示的CDR2，SEQIDNO:9所示的CDR3(对应于抗体株3的CDR)；(4)SEQIDNO:10所示的CDR1，SEQIDNO:11所示的CDR2，SEQIDNO:12所示的CDR3(对应于抗体株4的CDR)；(5)SEQIDNO:13所示的CDR1，SEQIDNO:14所示的CDR2，SEQIDNO:15所示的CDR3(对应于抗体株5的CDR)；(6)SEQIDNO:16所示的CDR1，SEQIDNO:17所示的CDR2，SEQIDNO:18所示的CDR3(对应于抗体株6的CDR)；(7)SEQIDNO:19所示的CDR1，SEQIDNO:20所示的CDR2，SEQIDNO:21所示的CDR3(对应于抗体株7的CDR)；(8)SEQIDNO:22所示的CDR1，SEQIDNO:23所示的CDR2，SEQIDNO:24所示的CDR3(对应于抗体株8的CDR)；(9)SEQIDNO:25所示的CDR1，SEQIDNO:26所示的CDR2，SEQIDNO:27所示的CDR3(对应于抗体株9的CDR)；(10)SEQIDNO:28所示的CDR1，SEQIDNO:29所示的CDR2，SEQIDNO:30所示的CDR3(对应于抗体株10的CDR)；(11)SEQIDNO:31所示的CDR1，SEQIDNO:32所示的CDR2，SEQIDNO:33所示的CDR3(对应于抗体株11的CDR)；(12)SEQIDNO:34所示的CDR1，SEQIDNO:35所示的CDR2，SEQIDNO:36所示的CDR3(对应于抗体株12的CDR)；(13)SEQIDNO:37所示的CDR1，SEQIDNO:38所示的CDR2，SEQIDNO:39所示的CDR3(对应于抗体株13的CDR)；(14)SEQIDNO:40所示的CDR1，SEQIDNO:41所示的CDR2，SEQIDNO:42所示的CDR3(对应于抗体株14的CDR)；(15)SEQIDNO:43所示的CDR1，SEQIDNO:44所示的CDR2，SEQIDNO:45所示的CDR3(对应于抗体株15的CDR)；(16)SEQIDNO:46所示的CDR1，SEQIDNO:47所示的CDR2，SEQIDNO:48所示的CDR3(对应于抗体株16的CDR)；(17)SEQIDNO:49所示的CDR1，SEQIDNO:50所示的CDR2，SEQIDNO:51所示的CDR3(对应于抗体株17的CDR)；(18)SEQIDNO:52所示的CDR1，SEQIDNO:53所示的CDR2，SEQIDNO:54所示的CDR3(对应于抗体株18的CDR)；(19)SEQIDNO:55所示的CDR1，SEQIDNO:56所示的CDR2，SEQIDNO:57所示的CDR3(对应于抗体株19的CDR)；(20)SEQIDNO:58所示的CDR1，SEQIDNO:59所示的CDR2，SEQIDNO:60所示的CDR3(对应于抗体株20的CDR)；(21)SEQIDNO:61所示的CDR1，SEQIDNO:62所示的CDR2，SEQIDNO:63所示的CDR3(对应于抗体株21的CDR)；(22)SEQIDNO:64所示的CDR1，SEQIDNO:65所示的CDR2，SEQIDNO:66所示的CDR3(对应于抗体株2的CDR)；(23)SEQIDNO:67所示的CDR20，SEQIDNO:68所示的CDR2，SEQIDNO:69所示的CDR3(对应于抗体株23的CDR)；(24)SEQIDNO:70所示的CDR1，SEQIDNO:71所示的CDR2，SEQIDNO:72所示的CDR3(对应于抗体株24的CDR)；(25)SEQIDNO:73所示的CDR1，SEQIDNO:74所示的CDR2，SEQIDN本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白3(TIM3)特异性纳米抗体的CDR区，其特征在于，其能够特异性结合Tim3，且所述CDR区选自下组的一种或多种：(1)SEQ ID NO:1所示的CDR1，SEQ ID NO:2所示的CDR2，SEQ ID NO:3所示的CDR3；(2)SEQ ID NO:4所示的CDR1，SEQ ID NO:5所示的CDR2，SEQ ID NO:6所示的CDR3；(3)SEQ ID NO:7所示的CDR1，SEQ ID NO:8所示的CDR2，SEQ ID NO:9所示的CDR3；(4)SEQ ID NO:10所示的CDR1，SEQ ID NO:11所示的CDR2，SEQ ID NO:12所示的CDR3；(5)SEQ ID NO:13所示的CDR1，SEQ ID NO:14所示的CDR2，SEQ ID NO:15所示的CDR3；(6)SEQ ID NO:16所示的CDR1，SEQ ID NO:17所示的CDR2，SEQ ID NO:18所示的CDR3；(7)SEQ ID NO:19所示的CDR1，SEQ ID NO:20所示的CDR2，SEQ ID NO:21所示的CDR3；(8)SEQ ID NO:22所示的CDR1，SEQ ID NO:23所示的CDR2，SEQ ID NO:24所示的CDR3；(9)SEQ ID NO:25所示的CDR1，SEQ ID NO:26所示的CDR2，SEQ ID NO:27所示的CDR3；(10)SEQ ID NO:28所示的CDR1，SEQ ID NO:29所示的CDR2，SEQ ID NO:30所示的CDR3；(11)SEQ ID NO:31所示的CDR1，SEQ ID NO:32所示的CDR2，SEQ ID NO:33所示的CDR3；(12)SEQ ID NO:34所示的CDR1，SEQ ID NO:35所示的CDR2，SEQ ID NO:36所示的CDR3；(13)SEQ ID NO:37所示的CDR1，SEQ ID NO:38所示的CDR2，SEQ ID NO:39所示的CDR3；(14)SEQ ID NO:40所示的CDR1，SEQ ID NO:41所示的CDR2，SEQ ID NO:42所示的CDR3；(15)SEQ ID NO:43所示的CDR1，SEQ ID NO:44所示的CDR2，SEQ ID NO:45所示的CDR3；(16)SEQ ID NO:46所示的CDR1，SEQ ID NO:47所示的CDR2，SEQ ID NO:48所示的CDR3；(17)SEQ ID NO:49所示的CDR1，SEQ ID NO:50所示的CDR2，SEQ ID NO:51所示的CDR3；(18)SEQ ID NO:52所示的CDR1，SEQ ID NO:53所示的CDR2，SEQ ID NO:54所示的CDR3；(19)SEQ ID NO:55所示的CDR1，SEQ ID NO:56所示的CDR2，SEQ ID NO:57所示的CDR3；(20)SEQ ID NO:58所示的CDR1，SEQ ID NO:59所示的CDR2，SEQ ID NO:60所示的CDR3；(21)SEQ ID NO:61所示的CDR1，SEQ ID NO:62所示的CDR2，SEQ ID NO:63所示的CDR3；(22)SEQ ID NO:64所示的CDR1，SEQ ID NO:65所示的CDR2，SEQ ID NO:66所示的CDR3；(23)SEQ ID NO:67所示的CDR1，SEQ ID NO:68所示的CDR2，SEQ ID NO:69所示的CDR3；(24)SEQ ID NO:70所示的CDR1，SEQ ID NO:71所示的CDR2，SEQ ID NO:72所示的CDR3；(25)SEQ ID NO:73所示的CDR1，SEQ ID NO:74所示的CDR2，SEQ ID NO:75所示的CDR3；(26)SEQ ID NO:76所示的CDR1，SEQ ID NO:77所示的CDR2，SEQ ID NO:78所示的CDR3；(27)SEQ ID NO:79所示的CDR1，SEQ ID NO:80所示的CDR2，SEQ ID NO:81所示的CDR3；(28)SEQ ID NO:82所示的CDR1，SEQ ID NO:83所示的CDR2，SEQ ID NO:84所示的CDR3；(29)SEQ ID NO:85所示的CDR1，SEQ ID NO:86所示的CDR2，SEQ ID NO:87所示的CDR3。...
【技术特征摘要】
1.T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白3(TIM3)特异性纳米抗体的CDR区，其特征在于，其能够特异性结合Tim3，且所述CDR区选自下组的一种或多种：(1)SEQIDNO:1所示的CDR1，SEQIDNO:2所示的CDR2，SEQIDNO:3所示的CDR3；(2)SEQIDNO:4所示的CDR1，SEQIDNO:5所示的CDR2，SEQIDNO:6所示的CDR3；(3)SEQIDNO:7所示的CDR1，SEQIDNO:8所示的CDR2，SEQIDNO:9所示的CDR3；(4)SEQIDNO:10所示的CDR1，SEQIDNO:11所示的CDR2，SEQIDNO:12所示的CDR3；(5)SEQIDNO:13所示的CDR1，SEQIDNO:14所示的CDR2，SEQIDNO:15所示的CDR3；(6)SEQIDNO:16所示的CDR1，SEQIDNO:17所示的CDR2，SEQIDNO:18所示的CDR3；(7)SEQIDNO:19所示的CDR1，SEQIDNO:20所示的CDR2，SEQIDNO:21所示的CDR3；(8)SEQIDNO:22所示的CDR1，SEQIDNO:23所示的CDR2，SEQIDNO:24所示的CDR3；(9)SEQIDNO:25所示的CDR1，SEQIDNO:26所示的CDR2，SEQIDNO:27所示的CDR3；(10)SEQIDNO:28所示的CDR1，SEQIDNO:29所示的CDR2，SEQIDNO:30所示的CDR3；(11)SEQIDNO:31所示的CDR1，SEQIDNO:32所示的CDR2，SEQIDNO:33所示的CDR3；(12)SEQIDNO:34所示的CDR1，SEQIDNO:35所示的CDR2，SEQIDNO:36所示的CDR3；(13)SEQIDNO:37所示的CDR1，SEQIDNO:38所示的CDR2，SEQIDNO:39所示的CDR3；(14)SEQIDNO:40所示的CDR1，SEQIDNO:41所示的CDR2，SEQIDNO:42所示的CDR3；(15)SEQIDNO:43所示的CDR1，SEQIDNO:44所示的CDR2，SEQIDNO:45所示的CDR3；(16)SEQIDNO:46所示的CDR1，SEQIDNO:47所示的CDR2，SEQIDNO:48所示的CDR3；(17)SEQIDNO:49所示的CDR1，SEQIDNO:50所示的CDR2，SEQIDNO:51所示的CDR3；(18)SEQIDNO:52所示的CDR1，SEQIDNO:53所示的CDR2，SEQIDNO:54所示的CDR3；(19)SEQIDNO:55所示的CDR1，SEQIDNO:56所示的CDR2，SEQIDNO:57所示的CDR3；(20)SEQIDNO:58所示的CDR1，SEQIDNO:59所示的CDR2，SEQIDNO:60所示的CDR3；(21)SEQIDNO:61所示的CDR1，SEQIDNO:62所示的CDR2，SEQIDNO:63所示的CDR3；(22)SEQIDNO:64所示的CDR1，SEQIDNO:65所示的CDR2，SEQIDNO:66所示的CDR3；(23)SEQIDNO:67所示的CDR1，SEQIDNO:68所示的CDR2，SEQIDNO:69所示的CDR3；(24)SEQIDNO:70所示的CDR1，SEQIDNO:71所示的CDR2，SEQIDNO:72所示的CDR3；(25)SEQIDNO:73所示的CDR1，SEQIDNO:74所示的CDR2，SEQIDNO:75所示的CDR3；(26)SEQIDNO:76所示的CDR1，SEQIDNO:77所示的CDR2，SEQIDNO:78所示的CDR3；(27)SEQIDNO:79所示的CDR1，SEQIDNO:80所示的CDR2，SEQIDNO:81所示的CDR3；(28)SEQIDNO:82所示的CDR1，SEQIDNO:83所示的CDR2，SEQIDNO:84所示的CDR3；(29)SEQIDNO:85所示的CDR1，SEQIDNO:86所示的CDR2，SEQIDNO:87所示的CDR3。2.一种TIM3特异性纳米抗体的VHH链，其特征在于，VHH链包括框架区FR和权利要求1所述的CDR区中的一种或多种。3.一种特异性结合TIM3纳米抗体VHH链组合，其特征在于，所述VHH链组合中至少含有具有以下CDR区的VHH链：SEQIDNO:79所示的CDR1，SEQIDNO:80所示的CDR2，SEQID...
【专利技术属性】
技术研发人员：万亚坤，朱敏，沈晓宁，
申请(专利权)人：上海洛启生物医药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31
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