甲型流感病毒哺乳动物细胞适应株及其制备和应用制造技术

技术编号:21907663 阅读:59 留言:0更新日期:2019-08-21 10:34
本发明专利技术提供了一种甲型流感病毒哺乳动物细胞适应株及其制备和应用。具体地,本发明专利技术提供了一种甲型流感病毒H1N1型病毒的HA共有序列CH1(包括氨基酸序列和核苷酸序列),以及相应的载体、表达细胞柱,以及基于该共有序列构建的重组病毒株。本发明专利技术还提供了包含所述共有序列和重组病毒株的疫苗组合物、制法和应用。

Mammalian cell-adapted strain of influenza A virus and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
甲型流感病毒哺乳动物细胞适应株及其制备和应用
本专利技术属于生物技术和免疫学领域;更具体地涉及一种甲型流感病毒哺乳动物细胞适应株及其制备和应用。
技术介绍
流行性感冒(flu)是一种由流感病毒引起的呼吸道传染病。流感病毒每年都能在全球范围内造成严重感染和死亡病例。流感病毒分3个型——甲型、乙型和丙型,其中丙型流感病毒的病例数远远少于甲型和乙型,这也是只有甲型和乙型流感病毒被纳入每年的疫苗计划的原因。乙型流感病毒一般只感染人,在人群中小范围流行,致病力较弱,不会导致大流行。甲型流感病毒不仅能感染人,而且还能感染水禽、鸡、貂和猪等多种动物。另外,甲型流感病毒也是历史上导致大流行的病原体。甲型流感病毒根据其表面膜蛋白HA和NA的抗原特性又可以分为不同的亚型,其中HA有18个亚型,NA有11个亚型。在诸多亚型的流感病毒中,目前流行于人群的是H1N1和H3N2亚型的流感病毒。预防流感最行之有效的方法是接种疫苗。现有的疫苗抵抗流感病毒的主要原理是其诱导产生的中和性抗体识别病毒HA蛋白头部结构域的受体结合区附近的区域。目前使用的疫苗有两种类型——灭活苗和减毒活疫苗。我国批准上市的是流感灭活苗。然而由于流感病毒突变较快,因此流感疫苗需要逐年根据当年的流行株更新,每年接种。这大大降低了流感疫苗的普及度,也造成了疫苗的生产滞后于疫情以及没有预见性等问题。为此,研发具有广谱保护效果的通用疫苗是流感疫苗的未来市场和方向。目前的通用疫苗以亚单位疫苗为主,如HA的茎秆区和M2e蛋白疫苗,以及DNA疫苗和载体疫苗等,这些亚单位疫苗由于只包含有限的病毒抗原,不能覆盖所有的全病毒抗原表位,其激活的免疫反应往往有一定的局限性,通常需要较强的佐剂辅助,在大动物水平上的免疫保护效果也难以保证。同时,这些新型疫苗都需要对流感疫苗现有的生产工艺和流水线进行更改,而且对于基因突变非常频繁的流感病毒来说亚单位疫苗的广谱保护效果还有待更多的验证。有一类通用疫苗是基于共有序列consensussequence来设计疫苗抗原,但多是针对分离株有限而且基因序列变异不大的某个特定亚型的流感病毒比如H5N1,H7N9等设计抗原,在亚型内部达到通用效果。这些亚型的病毒由于在历史上感染人的病例不多,在亚型内HA,NA等基因序列的差异度也不是很大,因此较容易设计出能够与亚型内所有病毒株产生交叉保护的抗原。但目前主要流行于人群中的甲型流感病毒株是H1N1和H3N2亚型,也是现有流感疫苗的主要组分。由于H1N1和H3N2亚型的流感病毒在人群中流行时间长,地理范围广,亚型内的差异度非常大,目前尚没有报道一种广谱疫苗能对H1或者H3亚型内所有病毒株都产生交叉保护。因此,本领域迫切需要开发针对这种长期流行于人群中、分离株众多的H1N1病毒的通用疫苗。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供新的甲型流感病毒哺乳动物细胞适应株及其制备和应用。具体地,本专利技术的目的在于提供甲型流感病毒H1N1型通用型疫苗株的通用序列和获得方法。在本专利技术的第一方面,提供了一种分离的流感病毒CH1多肽,该多肽选自下组:(a)具有SEQIDNO:2氨基酸序列的多肽;(b)将SEQIDNO:2氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的,且具有CH1免疫原性的由(a)衍生的衍生多肽。在另一优选例中,所述的衍生多肽还具有血凝素功能。在另一优选例中,所述的一个或多个指1-50个,较佳地1-20个,更佳地1-5,最佳地1、2、或3个。在另一优选例中,所述多肽是具有SEQIDNO:2氨基酸序列的多肽。在另一优选例中,所述多肽与SEQIDNo.:2的同一性≥95%,较佳地≥97%,更佳地≥98%,最佳地≥99%或99.5%。在另一优选例中,所述的衍生多肽中一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加的各个突变位置各自独立地位于表位区,或非表位区。在另一优选例中,所述的衍生多肽中一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加的突变位置均位于非表位区。在另一优选例中,所述的衍生多肽具有一个或多个氨基酸残基的取代。在另一优选例中,所述的一个或多个指1-20个,更佳地1-5,最佳地1、2、或3个。在另一优选例中,所述的衍生多肽(或突变型蛋白)具有在第1-173,第175-207位、第209-389位、和/或第391-566位具有一个或多个氨基酸残基的取代。在另一优选例中,所述的衍生多肽保留了SEQIDNo.:2所示的序列中的90%-100%的表位,或至少10个(如10、11、12或13个)表位(表位在图6中用下划线表示)。在另一优选例中,所述的衍生多肽具有SEQIDNo.:2中第167位-176位所示的表位。在另一优选例中,所述的衍生多肽具有SEQIDNo.:2中第167位-176位所示的表位,并且具有L174S突变。在本专利技术的第二方面,提供了一种分离的多核苷酸,它包含一核苷酸序列,该核苷酸序列选自下组:(a)编码如本专利技术第一方面所述多肽的多核苷酸;(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。在另一优选例中,该多核苷酸编码具有SEQIDNO:2所示氨基酸序列的多肽。在另一优选例中,该多核苷酸的序列具有SEQIDNO:1中序列。在另一优选例中,所述的多核苷酸序列选自下组:(a)序列如SEQIDNO.:1所示的多核苷酸;(b)核苷酸序列与SEQIDNO.:1所示序列的同源性≥95%(较佳地≥98%)的多核苷酸;(c)如SEQIDNO.:1所示多核苷酸的5’端和/或3’端截短或添加1-60个(较佳地1-30,更佳地1-10个)核苷酸的多核苷酸;(d)与(a)-(c)任一所述的多核苷酸互补的多核苷酸。在本专利技术的第三方面,提供了一种载体,它含有本专利技术第二方面所述的多核苷酸。在另一优选例中,所述的载体包括质粒、病毒载体。在另一优选例中,所述的载体为病毒载体。在另一优选例中,所述的载体包括pCAGGS载体、和pHW2000载体。在本专利技术的第四方面,提供了一种遗传工程化的宿主细胞(或基因工程细胞),它含有本专利技术第三方面所述的载体,或其基因组中整合有本专利技术第一方面所述的多核苷酸。在另一优选例中,所述的宿主细胞包括原核细胞和真核细胞。在另一优选例中,所述的宿主细胞包括哺乳动物的体细胞。在另一优选例中,所述的哺乳动物包括人和非人哺乳动物。在本专利技术的第五方面,提供了一种多肽的制备方法,该方法包含:(a)在适合表达的条件下,培养本专利技术第四方面所述的宿主细胞;(b)从培养物中分离出流感病毒CH1蛋白多肽。在本专利技术的第六方面,提供了一种重组的流感病毒,所述的流感病毒的基因组中含有外源导入的编码本专利技术第一方面所述的流感病毒CH1多肽的核苷酸序列和/或所述的流感病毒的包膜表面含有本专利技术第一方面所述的流感病毒CH1多肽。在另一优选例中,所述的流感病毒为减毒病毒。在另一优选例中,所述的流感病毒为灭活的。在另一优选例中,所述的流感病毒由本专利技术第四方面所述的细胞表达和生产。在另一优选例中,所述的流感病毒可以用做流感病毒疫苗。在另一优选例中,所述的疫苗包括减毒疫苗和灭活疫苗。在另一优选例中,所述的流感病毒可以进一步进行减毒修饰和温度敏感性修饰。在另一优选例中,所述的流感病毒是基于PR8的重组流感病毒。在另一优选例中,所述的流感病毒为H1N1型。在本专利技术的第七方面,提供了本文档来自技高网
...

【技术保护点】
1.一种分离的流感病毒CH1多肽,其特征在于,该多肽选自下组:(a)具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽;(b)将SEQ ID NO:2氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的,且具有CH1免疫原性的由(a)衍生的衍生多肽。

【技术特征摘要】
1.一种分离的流感病毒CH1多肽,其特征在于,该多肽选自下组:(a)具有SEQIDNO:2氨基酸序列的多肽;(b)将SEQIDNO:2氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的,且具有CH1免疫原性的由(a)衍生的衍生多肽。2.如权利要求1所述的CH1多肽,其特征在于,该多肽是具有SEQIDNO:2氨基酸序列的多肽。3.一种分离的多核苷酸,其特征在于,它包含一核苷酸序列,该核苷酸序列选自下组:(a)编码如权利要求1所述多肽的多核苷酸;(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。4.如权利要求3所述的多核苷酸,其特征在于,该多核苷酸的序列具有SEQIDNO:1中序列。5.一种载体,其特征在于,它含有权利要求3所述的多核苷酸。6.一种遗传工程化的宿主细胞(或基因工程细胞),其特征在于,它含有权利要求5所述的载体,或其基因组...

【专利技术属性】
技术研发人员:徐可平宪强胡伟斌
申请(专利权)人:中国科学院上海巴斯德研究所
类型:发明
国别省市:上海,31

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1