PQBP1在卵巢癌诊治中的应用制造技术

本发明专利技术提供PQBP1在卵巢癌诊治中的应用。本发明专利技术经研究发现，PQBP1在卵巢癌患者中高表达，且通过体内和体外功能试验明确PQBP1促进卵巢癌细胞的增殖和侵袭迁移。此外，研究发现PQBP1能够影响内源性Bcl‑x的选择性剪接，具体表现在促进抑凋亡转录本Bcl‑xL的表达，抑制促凋亡转录本Bcl‑xS的表达，从而最终抑制卵巢癌细胞的凋亡。表明PQBP1是一种参与卵巢癌发生发展的剪接因子，可作为卵巢癌的生物标记物和治疗靶点，具有良好的实际应用之价值。

Application of PQBP1 in diagnosis and treatment of ovarian cancer

【技术实现步骤摘要】
PQBP1在卵巢癌诊治中的应用
本专利技术属于生物医药和分子生物学
，具体涉及PQBP1在卵巢癌诊治中的应用。
技术介绍
公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。卵巢癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤，病死率一直位居妇科恶性肿瘤之首。高级别浆液性卵巢癌(High-gradeSerousOvarianCancer，HGSOC)是恶性程度最高的亚型，占卵巢癌的70％～80％，且具有发病隐匿、侵袭能力强、预后差等特点。大多数卵巢癌患者由于缺乏特异性症状和早期筛查方法，发现时多已确诊为晚期，常死于肿瘤复发和耐药，晚期患者的5年生存率仅为20％～30％。因此，阐明卵巢癌发生发展的分子机制，筛选有效的分子靶点，对于卵巢癌的早期诊断和治疗具有重要意义。异常的选择性剪接在恶性肿瘤发生发展中起到重要作用，肿瘤细胞通过异常的选择性剪接产生有利于肿瘤增殖、凋亡、缺氧、血管生成、免疫逃逸和转移等行为的剪接异构体，进而促进肿瘤的发生发展。卵巢癌中异常剪接的分子机制与癌症进展密切相关。课题组通过转录组及蛋白质组学分析发现。与卵巢癌发生发展相关的信号通路中，剪接体通路排在首位，进一步分析134个主控剪接因子，发现有33个在卵巢癌中上调，提示异常的选择性剪接在卵巢癌中发挥关键作用。卵巢癌中存在许多基因转录本的差异剪接，在卵巢癌细胞中CD44s高表达，CD44v低表达，CD44s通过下调剪接因子ESRP1介导TGFβ1诱导的EMT通路，从而诱导卵巢癌细胞侵袭迁移，随后获得干细胞样特征和耐药；骨桥蛋白(OPN)转录本OPNc在卵巢癌中特异性表达，而不是OPNa或OPNb，促进卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭、体内肿瘤形成等恶性行为；Bcl-x是凋亡基因bcl-2家族的一员，Bcl-x基因的pre-mRNA选择性剪接产生Bcl-xS和Bcl-xL，这两种亚型分别与促进和抑制凋亡有关，Bcl-xL的过表达抑制肿瘤细胞凋亡、促进转移和化疗耐药并与不良临床预后有关，而Bcl-xS可诱导细胞凋亡，使细胞对化疗药物敏感。多聚谷氨酰胺结合蛋白1，即PQBP1(polyglutaminebindingprotein1，PQBP1)是课题组发现的在卵巢癌中表达上调的剪接因子之一，是一个进化上高度保守的智力发育相关蛋白，其突变会导致X染色体相关的“Renpenning综合征”。PQBP1与RNA聚合酶II等转录因子相互作用参与转录调控。除此之外，PQBP1与多个剪接因子相互作用，参与人类细胞中许多基因mRNA的选择性剪接。功能缺失的PQBP1降低了SF3B1与底物mRNA的关联，导致选择性剪接模式发生显著变化。PQBP1在卵巢癌中表达水平上调，但是在卵巢癌发生发展中发挥怎样的作用，具体参与了哪些异常剪接事件，还有待进一步研究。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本专利技术提供PQBP1在卵巢癌诊治中的应用。经研究发现，PQBP1在卵巢癌患者中高表达，且通过体内和体外功能试验明确PQBP1促进卵巢癌细胞的增殖和侵袭迁移。此外，研究发现PQBP1能够影响内源性Bcl-x的选择性剪接，具体表现在促进抑凋亡转录本Bcl-xL的表达，抑制促凋亡转录本Bcl-xS的表达，从而最终抑制卵巢癌细胞的凋亡。表明PQBP1是一种参与卵巢癌发生发展的剪接因子，可作为卵巢癌的生物标记物和治疗靶点。本专利技术是通过如下技术方案实现的：本专利技术的第一个方面，提供PQBP1在制备卵巢癌分子标志物中的应用。进一步的，所述分子标志物用于检测、诊断或预测卵巢癌的进展。所述卵巢癌的进展包括卵巢癌细胞的增殖、侵袭迁移和/或卵巢癌细胞的凋亡。本专利技术的第二个方面，提供一种用于检测、诊断或预测卵巢癌的进展的组合物，其包含基于高通量测序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测卵巢癌样品中PQBP1的物质；或基于免疫检测方法检测卵巢癌样品中PQBP1蛋白的物质。更进一步的，本专利技术提供一种试剂盒，所述试剂盒包括用于检测、诊断或预测卵巢癌的进展的组合物；本专利技术的第三个方面，提供能够抑制PQBP1表达和/或活性降低的物质在如下(a)-(c)至少一种中的应用：(a)抑制卵巢癌细胞的增殖，或制备用于抑制卵巢癌细胞增殖的产品；(b)抑制卵巢癌细胞的侵袭迁移，或者制备用于抑制卵巢癌细胞侵袭迁移的产品；(c)促进卵巢癌细胞的凋亡，或者制备用于促进卵巢癌细胞凋亡的产品。进一步的，所述PQBP1通过调控Bcl-x凋亡基因选择性剪接信号通路抑制卵巢癌细胞的凋亡；具体的，所述PQBP1能够促进抑凋亡转录本Bcl-xL的表达，抑制促凋亡转录本Bcl-xS的表达，从而抑制卵巢癌细胞的凋亡。本专利技术的第四个方面，提供一种用于预防或治疗卵巢癌的药物组合物，其包含抑制PQBP1表达和/或活性降低的物质；所述抑制PQBP1表达和/或活性降低的物质，包括采用基于RNA的microRNA功能性获得技术、和/或慢病毒shRNA干扰技术下调PQBP1表达和/或抑制其活性；优选为PQBP1拮抗剂或抑制剂；其中，所述PQBP1拮抗剂包括根据PQBP1人工合成的shRNA；在本专利技术中，“治疗或预防”指的是能够抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭迁移和/或促进卵巢癌细胞凋亡。本专利技术有益效果：1.本专利技术为卵巢癌的诊断、病情评估和预后判断提供有效的分子标记物：本专利技术通过大量临床样本的验证，采用qPCR、westernblot以及免疫组织化学染色等方法证明了PQBP1在卵巢癌患者中高表达，具有卵巢癌分子标记物的潜力。2.本专利技术为卵巢癌的诊断和治疗提供新的靶点：本专利技术通过体内和体外功能试验明确PQBP1促进卵巢癌细胞的增殖和侵袭迁移，并且抑制了细胞的凋亡。以上数据证明，降低内源性的PQBP1可以抑制肿瘤的生长、侵袭等恶性生物学行为。基于此，可以设计特异性的PQBP1抑制剂，从而达到治疗卵巢癌的目的。3.本专利技术首次公布了PQBP1的靶点Bcl-x关键凋亡基因，Bcl-x作为凋亡关键基因在卵巢癌的发生发展中具有重要意义。本专利技术为凋亡信号通路的靶向调控找到了新的有效地方法，即通过PQBP1mimics/inhibitor实现凋亡通路的激活和抑制；相比较于铂类药物抑制凋亡通路，此方法靶向性更强。附图说明构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。图1为实施例1中PQBP1在HGSOC中的表达及临床意义图；其中，图1A为数据库分析PQBP1在卵巢癌中的遗传改变；图1B为高级别浆液性卵巢癌组织与正常输卵管伞组织中PQBP1mRNA含量比较图；图1C为TCGA数据库分析PQBP1与卵巢癌预后关系图。图2为慢病毒表达系统构建PQBP1稳转过表达和敲低三种细胞系相关图，图2A为qPCR、Westernblotting检测敲低效率图；图2B为qPCR、Westernblotting检测过表达效率图。图3为实施例3中PQBP1促进卵巢癌细胞增殖图；其中，图3A为PQBP1促进了卵巢癌细胞增殖图，平板克隆实验证明PQBP1能够促进卵巢癌细胞克隆形成能力，增强癌细胞的恶性程度；图3B为PQBP1促本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.PQBP1在制备卵巢癌分子标志物中的应用；所述标志物用于检测、诊断或预测卵巢癌的进展。

【技术特征摘要】
1.PQBP1在制备卵巢癌分子标志物中的应用；所述标志物用于检测、诊断或预测卵巢癌的进展。2.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述卵巢癌的进展包括卵巢癌细胞的增殖、侵袭迁移和/或卵巢癌细胞的凋亡；优选的，所述卵巢癌为高级别浆液性卵巢癌(HGSOC)。3.一种用于检测、诊断或预测卵巢癌的进展的组合物，其特征在于，包含基于高通量测序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测卵巢癌样品中PQBP1基因的物质；或基于免疫检测方法检测卵巢癌样品中PQBP1蛋白的物质。4.如权利要求3所述组合物，其特征在于，采用液相杂交、Northern杂交、RNA芯片和/或原位杂交检测卵巢癌样品中PQBP1；采用酶联免疫吸附测定、胶体金检测、蛋白质免疫印迹和/或蛋白质芯片检测卵巢癌样品中PQBP1蛋白。5.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求3或4所述用于检测、诊断或预测卵巢癌的进展的组合物；优选的，所述组合物中含有检测PQBP1基因的引物，所述引物包括：PQBP1上游引物：5’-ACCCTAGCTCATACTCAGACG-3’(SEQIDNO.1)；PQBP1下游引物：5’-TCTTGGCCTCATTCCGCTTG-3’(SEQIDNO.2)。6.抑制PQBP1表达和/或活性降低的物质在如下(a)-(c)至少一种中的应用：(a)抑制卵巢癌细胞的增殖，或制备用于抑制卵巢癌细胞增殖的产品；(b)抑制卵巢癌细胞的侵袭迁移，或...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘招舰，张娇娇，张锡宇，王守荣，田晓雪，秦君超，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：山东,37