一种与胶质瘤相关的脑脊液外泌体miRNA标志物及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种与胶质瘤相关的脑脊液外泌体miRNA标志物及其应用，属于分子诊断和分子生物学技术领域。本发明专利技术首次发现了脑脊液外泌体中的hsa‑miR‑1246可作为胶质瘤的生物标志物，具有较高诊断价值，为临床提供快速准确的诊断方式，使胶质瘤的诊断更加方便易行。同时，本发明专利技术还提供了用于诊断胶质瘤的试剂盒，包括检测脑脊液外泌体miRNA标志物的逆转录引物、上下游引物等，其逆转录效率高，引物特异性强，灵敏度高，检测全面、快速、准确，应用广泛，检测结果可用于临床诊断和治疗。

MicroRNA marker of cerebrospinal fluid exosome associated with glioma and its application

【技术实现步骤摘要】
一种与胶质瘤相关的脑脊液外泌体miRNA标志物及其应用
本专利技术属于分子诊断和分子生物学
，具体涉及一种与胶质瘤相关的脑脊液外泌体miRNA标志物及其应用。
技术介绍
公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。人脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤，虽然其预后取决于多种因素及诊治措施，但是一般而言，III级者生存期2-3年，IV级者生存期仅为一年左右。恶性胶质瘤的临床表现缺乏特异性，后期以神经系统功能缺失伴颅内压增高症状为主，目前，初步诊断主要依靠CT及MRI检查等影像学检查方法，最终诊断还需要通过肿瘤切除术或活检术获取标本进行病理学诊断加以明确。由于缺乏有效的胶质瘤早期筛查及诊断方法，多数患者发现时已错过最佳手术时机，预后不佳。外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质、直径在30-100nm的盘状囊泡。作为人体内一类重要的外分泌微小囊泡，多种细胞在正常及病理状态下均可选择性地包裹多种调控分子，以外泌体的形式转运至特定的靶细胞中，发挥相应调控作用。因此，外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁等。胶质瘤作为中枢神经系统中侵袭性生长的恶性肿瘤，生长初期即可分泌大量外泌体至脑脊液中。随着液体活检领域的发展，外泌体来源的生物标志物越来越被大家所重视。胶质瘤外泌体在脑脊液循环中具有很强的稳定性及易得性，是一类灵敏、高效的肿瘤标志物的载体。专利技术人发现，miRNA(microRNA)是广泛存在于生物体内的19-25nt的非编码单链小分子RNA，其通过与靶基因mRNA的互补配对降解靶mRNA或抑制其翻译。研究表明miRNA在肿瘤发生过程中起重要作用，miRNA业已成为癌症治疗与诊断的新途径。外泌体中的非编码RNA以miRNA为主，且种类丰富，其可以影响干细胞分化、器官形成、造血作用、肿瘤发生以及新陈代谢等诸多生理活动。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本专利技术提供一种与胶质瘤相关的脑脊液外泌体miRNA标志物及其应用。本专利技术经研究发现，脑脊液外泌体中的miR-1246的相对表达水平与胶质瘤发生呈正相关。从而使得miR-1246可作为胶质瘤的生物标志物，其具有较高诊断价值，为临床提供快速准确的诊断方式，使胶质瘤的诊断更加方便易行。本专利技术是通过如下技术方案实现的：本专利技术的第一个方面，提供用于检测miR-1246的物质在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a1)或(a2)：(a1)鉴定或辅助鉴定胶质瘤细胞；(a2)诊断或辅助诊断胶质瘤。进一步的，所述用于检测miR-1246的物质为由逆转录引物、上游引物和下游引物组成的引物组；所述逆转录引物为如下(b1)或(b2)：(b1)如SEQIDNO.2所示的单链DNA分子；(b2)将SEQIDNO.2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQIDNO.2具有相同功能的DNA分子；所述上游引物为如下(c1)或(c2)：(c1)如SEQIDNO.3所示的单链DNA分子；(c2)将SEQIDNO.3所示经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQIDNO.3所示具有相同功能的DNA分子；所述下游引物为如下(d1)或(d2)：(d1)SEQIDNO.4所示的单链DNA分子；(d2)将SEQIDNO.4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQIDNO.4具有相同功能的DNA分子。本专利技术的第二个方面，提供一种引物组，由逆转录引物、上游引物和下游引物组成；所述逆转录引物为如下(b1)或(b2)：(b1)如SEQIDNO.2所示的单链DNA分子；(b2)将SEQIDNO.2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQIDNO.2具有相同功能的DNA分子；所述上游引物为如下(c1)或(c2)：(c1)如SEQIDNO.3所示的单链DNA分子；(c2)将SEQIDNO.3所示经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQIDNO.3所示具有相同功能的DNA分子；所述下游引物为如下(d1)或(d2)：(d1)SEQIDNO.4所示的单链DNA分子；(d2)将SEQIDNO.4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQIDNO.4具有相同功能的DNA分子。所述引物组的功能为如下(a1)或(a2)：(a1)鉴定或辅助鉴定胶质瘤细胞；(a2)诊断或辅助诊断胶质瘤。本专利技术的第三个方面，提供所述引物组在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a1)或(a2)：(a1)鉴定或辅助鉴定胶质瘤细胞；(a2)诊断或辅助诊断胶质瘤。以上任一所述miR-1246如SEQIDNO.1所示。以上任一所述检测miR-1246的物质为检测外泌体中miR-1246的物质。以上任一所述检测miR-1246的物质为检测脑脊液外泌体中miR-1246的物质。以上任一所述产品具体可为试剂盒。本专利技术的有益技术效果：本专利技术首次发现了脑脊液外泌体中的hsa-miR-1246可作为胶质瘤的生物标志物，具有较高诊断价值，为临床提供快速准确的诊断方式，使胶质瘤的诊断更加方便易行。同时，本专利技术还提供了用于诊断胶质瘤的试剂盒，包括检测脑脊液外泌体miRNA标志物的逆转录引物、上下游引物等，其逆转录效率高，引物特异性强，灵敏度高，检测全面、快速、准确，应用广泛，检测结果可用于临床诊断和治疗。附图说明图1为本专利技术实施例1采用投射电子显微镜观察外泌体的照片(100000x)。图2为本专利技术实施例1采用纳米激光粒度仪检测外泌体的直径结果图。图3为本专利技术实施例1采用westernblot检测外泌体的标志性抗原的结果图。图4为本专利技术实施例1胶质瘤患者术前组和术后组外泌体中hsa-miR-1246的相对表达水平图。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本专利技术提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本专利技术的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。到目前为止，脑脊液外泌体相关miRNA作为分子标志物用于胶质瘤诊断中的应用报道甚少。有鉴于此，本专利技术的一个具体实施方式中，提供用于检测hsa-miR-1246的物质在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a1)或(a2)：(a1)鉴定或辅助鉴定胶质瘤细胞；(a2)诊断或辅助诊断胶质瘤。本专利技术的又一具体实施方式中，所述用于检测hsa-miR-1246的物质为由逆转录引物、上游引物和下游引物组成的引物组；所述逆转录引物为如下(b1)或(b2)：(b1)如SEQIDNO.2所示的单链DNA分子；(b2)将SEQIDNO.2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQIDNO.2具有相同功能的DNA分子；所述上游引物为如下(c1)或(c2)：(c1)如SEQIDNO.3所示本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于检测miR‑1246的物质在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a1)或(a2)：(a1)鉴定或辅助鉴定胶质瘤细胞；(a2)诊断或辅助诊断胶质瘤。

【技术特征摘要】
1.用于检测miR-1246的物质在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a1)或(a2)：(a1)鉴定或辅助鉴定胶质瘤细胞；(a2)诊断或辅助诊断胶质瘤。2.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述用于检测hsa-miR-1246的物质为由逆转录引物、上游引物和下游引物组成的引物组。3.如权利要求2所述应用，其特征在于，所述逆转录引物为如下(b1)或(b2)：(b1)如SEQIDNO.2所示的单链DNA分子；(b2)将SEQIDNO.2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQIDNO.2具有相同功能的DNA分子。4.如权利要求2所述应用，其特征在于，所述上游引物为如下(c1)或(c2)：(c1)如SEQIDNO.3所示的单链DNA分子；(c2)将SEQIDNO.3所示经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQIDNO.3所示具有相同功能的DNA分子。5.如权利要求2所述应用，其特征在于，所述下游引物为如下(d1)或(d2)：(d1)SEQIDNO.4所示的单链DNA分子；(d2)将SEQIDNO.4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQIDNO.4具有相同功能的DNA分子。6.一种引物组，其特征在于，由逆转录引物、上游引物和下游引物组成；所述逆转录引物为如下(b1)或(b2)：(...

【专利技术属性】
技术研发人员：李刚，张宇，薛皓，韩琳，郭钦栋，刘宏，薛付忠，
申请(专利权)人：山东大学齐鲁医院，
类型：发明
国别省市：山东,37