本发明专利技术属于生物医学领域，涉及一种肿瘤检测试剂盒，具体是针对乳腺癌复发风险评估的一种检测试剂盒。本发明专利技术所涉及的乳腺癌21基因多重检测试剂盒，该乳腺癌21基因多重检测试剂盒，提供一种多重检测乳腺癌21基因的方法，具有使用样本量小，快速，成本低等优势，用以服务广大乳腺癌患者，通过早诊断、早治疗，提高乳腺癌患者的生存周期，减少无谓的医疗支出作出应有的贡献。
Multiple Detection Kit for Breast Cancer 21 Gene
【技术实现步骤摘要】
乳腺癌21基因多重检测试剂盒
本专利技术属于生物医学领域，涉及一种肿瘤检测试剂盒，具体是针对乳腺癌复发风险评估的一种检测试剂盒。
技术介绍
乳腺癌是全球第二常见的恶性肿瘤。最新肿瘤流行病学研究显示，在2012年,全球约有170万新发的乳腺癌病例，约521,900名患者死于乳腺癌，且近年发病率呈上升趋势。最新数据显示，在欠发达国家，乳腺癌是女性恶性肿瘤的首位死亡原因，而在发达国家，乳腺癌是仅次于肺癌的女性恶性肿瘤第二位死亡原因。据统计，我国每年女性乳腺癌发病16.9万，是女性第二位最常见恶性肿瘤；我国女性乳腺癌死亡约4.5万，是女性最常见的恶性肿瘤死亡原因之一。近些年来，中国乳腺癌的发病率显著上升，尤其是在北京、上海、浙江等经济发达地区。临床上传统的乳腺癌预后预测方法是基于患者年龄、肿瘤大小、淋巴结浸润及组织学分级等临床病理特征来进行个体复发风险的评估。肿瘤科医师给早期乳腺癌患者治疗时面临的首要挑战在于决定哪些患者需要接受辅助性化疗。一直以来,治疗方案的选择是以肿瘤的临床病理特征为依，比如淋巴结的转移以及组织学分级。但淋巴结中的微小转移，以及一些重要的肿瘤特征如雌激素受体的表达和Her-2的过表达等因素的不确定性，不但影响着疾病的预后，更影响着机体对治疗方案的反应，导致病患被过度治疗或治疗不足。NSABPB-14和B-20研究已经证实，淋巴结阴性、雌激素受体阳性乳腺癌患者能从内分泌治疗和化疗中获益。但是，由于单用他莫昔芬治疗后的10年复发风险仅约15%，若对所有患者行辅助化疗，则至少有85%的患者是被过度治疗的，所以病人选择什么样的治疗，特别是早期乳腺癌时是否需要辅助化疗的疑问迫切地需要得到解决。乳腺癌21基因检测是通过应用RT-PCR技术进行基因筛选，并参考已发表文献、基因数据库和新鲜冰冻组织DNA检测出的250个候选基因，共选出了与他莫昔芬治疗后的淋巴结阴性、ER阳性乳腺癌患者远处复发相关的21个基因。这21个基因为增殖相关基因（Ki-67、STK15、BIRC5、CCNB1、MYBL2）；侵袭相关基因（MMP11、CTSL2）；Her-2相关基因（GRB7、ERBB2）；激素相关基因（ESR1、PGR、Bcl-2、SCUBE2）；GSTM1；BAG1；CD68。而5个参考基因则为ACTB、GAPDH、RPLPO、GUS、TFRC。复发评分（RS）高中低三组具体来说，RS<18为低复发风险组，RS为18~30为中复发风险组，而RS≥31为高复发风险组。目前，乳腺癌21基因检测都是通过单重检测，对样本的使用量较大，且检测时工作量也大，基于此，我们专利技术了乳腺癌21基因多重检测试剂盒。
技术实现思路
为了克服
技术介绍
中存在的缺陷，本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：乳腺癌21基因多重检测试剂盒，该检测试剂盒包括21对引物，36条特异性Taqman探针，组成9组4重引物探针混合物，5×RTBuffer，反转录酶，RNaseInhibitor，dNTP，10×PCRBuffer,MgCl2和DNA聚合酶，所述21对引物如下：ACTB-FCAGCAGATGTGGATCAGCAAGACTB-RGCATTTGCGGTGGACGATGAPDH-FATTCCACCCATGGCAAATTCGAPDH-RGATGGGATTTCCATTGATGACARPLP0-FCCATTCTATCATCAACGGGTACAARPLP0-RTCAGCAAGTGGGAAGGTGTAATCTFRC-FGCCAACTGCTTTCATTTGTGTFRC-RACTCAGGCCCATTTCCTTTAGUSB-FCCCACTCAGTAGCCAAGTCAGUSB-RCACGCAGGTGGTATCAGTCTSTK15-FCATCTTCCAGGAGGACCACTSTK15-RTCCGACCTTCAATCATTTCACTSL2-FTGTCTCACTGAGCGAGCAGAACTSL2-RACCATTGCAGCCCTGATTGESR1-FCGTGGTGCCCCTCTATGACESR1-RGGCTAGTGGGCGCATGTAGGRB7-FCCATCTGCATCCATCTTGTTGRB7-RGGCCACCAGGGTATTATCTGGSTM1-RGGCCCAGCTTGAATTTTTCAGSTM1-FAAGCTATGAGGAAAAGAAGTACACGATBIRC5-FTGTTTTGATTCCCGGGCTTABIRC5-RCAAAGCTGTCAGCTCTAGCAAAAGKi-67-FCGGACTTTGGGTGCGACTTKi-67-RTTACAACTCTTCCACTGGGACGATBAG1-FCGTTGTCAGCACTTGGAATACAABAG1-RGTTCAACCTCTTCCTGTGGACTGTBcl-2-FCAGATGGACCTAGTACCCACTGAGABcl-2-RCCTATGATTTAAGGGCATTTTTCCCCNB1-FTTCAGGTTGTTGCAGGAGACCCNB1-RCATCTTCTTGGGCACACAATCD68-FTGGTTCCCAGCCCTGTGTCD68-RCTCCTCCACCCTGGGTTGTSCUBE2-FTGACAATCAGCACACCTGCATSCUBE2-RTGTGACTACAGCCGTGATCCTTAERBB2-FCGGTGTGAGAAGTGCAGCAAERBB2-RCCTCTCGCAAGTGCTCCATMYBL2-FGCCGAGATCGCCAAGATGMYBL2-RCTTTTGATGGTAGAGTTCCAGTGATTCPGR-FCATCAGGCTGTCATTATGGPGR-RAGTAGTTGTGCTGCCCTTCCMMP11-FCCTGGAGGCTGCAACATACCMMP11-RTACAATGGCTTTGGAGGATAGCA；所述36条探针如下：ACTB-Pr-FFAM-AGGAGTATGACGAGTCCGGCCCC-BHQ1ACTB-Pr-VVIC-AGGAGTATGACGAGTCCGGCCCC-BHQ1ACTB-Pr-RROX-AGGAGTATGACGAGTCCGGCCCC-BHQ2ACTB-Pr-CCy5-AGGAGTATGACGAGTCCGGCCCC-BHQ3GAPDH-Pr-FFAM-CCGTTCTCAGCCTTGACGGTGC-BHQ1GAPDH-Pr-VVIC-CCGTTCTCAGCCTTGACGGTGC-BHQ1GAPDH-Pr-RROX-CCGTTCTCAGCCTTGACGGTGC-BHQ2GAPDH-Pr-CCy5-CCGTTCTCAGCCTTGACGGTGC-BHQ3RPLP0-Pr-FFAM-TCTCCACAGACAAGGCCAGGACTCG-BHQ1RPLP0-Pr-VVIC-TCTCCACAGACAAGGCCAGGACTCG-BHQ1RPLP0-Pr-RROX-TCTCCACAGACAAGGCCAGGACTCG-BHQ2RPLP0-Pr-CCy5-TCTCCACAGACAAGGCCAGGACTCG-BHQ3TFRC-Pr-FFAM-AGGGATCTGAACCAATACAGAGCAGACA-本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.乳腺癌21基因多重检测试剂盒，该检测试剂盒包括21对引物，36条特异性Taqman探针，组成9组4重引物探针混合物，5×RT Buffer，反转录酶，RNase Inhibitor，dNTP，10×PCR Buffer,MgCl2和DNA聚合酶，所述21对引物如下：ACTB‑F CAGCAGATGTGGATCAGCAAGACTB‑R GCATTTGCGGTGGACGATGAPDH‑F ATTCCACCCATGGCAAATTCGAPDH‑R GATGGGATTTCCATTGATGACARPLP0‑F CCATTCTATCATCAACGGGTACAARPLP0‑R TCAGCAAGTGGGAAGGTGTAATCTFRC‑F GCCAACTGCTTTCATTTGTGTFRC‑R ACTCAGGCCCATTTCCTTTAGUSB‑F CCCACTCAGTAGCCAAGTCAGUSB‑R CACGCAGGTGGTATCAGTCTSTK15‑F CATCTTCCAGGAGGACCACTSTK15‑R TCCGACCTTCAATCATTTCACTSL2‑F TGTCTCACTGAGCGAGCAGAACTSL2‑R ACCATTGCAGCCCTGATTGESR1‑F CGTGGTGCCCCTCTATGACESR1‑R GGCTAGTGGGCGCATGTAGGRB7‑F CCATCTGCATCCATCTTGTTGRB7‑R GGCCACCAGGGTATTATCTGGSTM1‑R GGCCCAGCTTGAATTTTTCAGSTM1‑F AAGCTATGAGGAAAAGAAGTACACGATBIRC5‑F TGTTTTGATTCCCGGGCTTABIRC5‑R CAAAGCTGTCAGCTCTAGCAAAAGKi‑67‑F CGGACTTTGGGTGCGACTTKi‑67‑R TTACAACTCTTCCACTGGGACGATBAG1‑F CGTTGTCAGCACTTGGAATACAABAG1‑R GTTCAACCTCTTCCTGTGGACTGTBcl‑2‑F CAGATGGACCTAGTACCCACTGAGABcl‑2‑R CCTATGATTTAAGGGCATTTTTCCCCNB1‑F TTCAGGTTGTTGCAGGAGACCCNB1‑R CATCTTCTTGGGCACACAATCD68‑F TGGTTCCCAGCCCTGTGTCD68‑R CTCCTCCACCCTGGGTTGTSCUBE2‑F TGACAATCAGCACACCTGCATSCUBE2‑R TGTGACTACAGCCGTGATCCTTAERBB2‑F CGGTGTGAGAAGTGCAGCAAERBB2‑R CCTCTCGCAAGTGCTCCATMYBL2‑F GCCGAGATCGCCAAGATGMYBL2‑R CTTTTGATGGTAGAGTTCCAGTGATTCPGR‑F CATCAGGCTGTCATTATGGPGR‑R AGTAGTTGTGCTGCCCTTCCMMP11‑F CCTGGAGGCTGCAACATACCMMP11‑R TACAATGGCTTTGGAGGATAGCA；所述36条探针如下：ACTB‑Pr‑F FAM‑AGGAGTATGACGAGTCCGGCCCC‑BHQ1ACTB‑Pr‑V VIC‑AGGAGTATGACGAGTCCGGCCCC‑BHQ1ACTB‑Pr‑R ROX‑AGGAGTATGACGAGTCCGGCCCC‑BHQ2ACTB‑Pr‑C Cy5‑AGGAGTATGACGAGTCCGGCCCC‑BHQ3GAPDH‑Pr‑F FAM‑CCGTTCTCAGCCTTGACGGTGC‑BHQ1GAPDH‑Pr‑V VIC‑CCGTTCTCAGCCTTGACGGTGC‑BHQ1GAPDH‑Pr‑R ROX‑CCGTTCTCAGCCTTGACGGTGC‑BHQ2GAPDH‑Pr‑C Cy5‑CCGTTCTCAGCCTTGACGGTGC‑BHQ3RPLP0‑Pr‑F FAM‑TCTCCACAGACAAGGCCAGGACTCG‑BHQ1RPLP0‑Pr‑V VIC‑TCTCCACAGACAAGGCCAGGACTCG‑BHQ1RPLP0‑Pr‑R ROX‑TCTCCACAGACAAGGCCAGGACTCG‑BHQ2RPLP0‑Pr‑C Cy5‑TCTCCACAGACAAGGCCAGGACTCG‑BHQ3TFRC‑Pr‑F FAM‑AGG...
【技术特征摘要】
1.乳腺癌21基因多重检测试剂盒，该检测试剂盒包括21对引物，36条特异性Taqman探针，组成9组4重引物探针混合物，5×RTBuffer，反转录酶，RNaseInhibitor，dNTP，10×PCRBuffer,MgCl2和DNA聚合酶，所述21对引物如下：ACTB-FCAGCAGATGTGGATCAGCAAGACTB-RGCATTTGCGGTGGACGATGAPDH-FATTCCACCCATGGCAAATTCGAPDH-RGATGGGATTTCCATTGATGACARPLP0-FCCATTCTATCATCAACGGGTACAARPLP0-RTCAGCAAGTGGGAAGGTGTAATCTFRC-FGCCAACTGCTTTCATTTGTGTFRC-RACTCAGGCCCATTTCCTTTAGUSB-FCCCACTCAGTAGCCAAGTCAGUSB-RCACGCAGGTGGTATCAGTCTSTK15-FCATCTTCCAGGAGGACCACTSTK15-RTCCGACCTTCAATCATTTCACTSL2-FTGTCTCACTGAGCGAGCAGAACTSL2-RACCATTGCAGCCCTGATTGESR1-FCGTGGTGCCCCTCTATGACESR1-RGGCTAGTGGGCGCATGTAGGRB7-FCCATCTGCATCCATCTTGTTGRB7-RGGCCACCAGGGTATTATCTGGSTM1-RGGCCCAGCTTGAATTTTTCAGSTM1-FAAGCTATGAGGAAAAGAAGTACACGATBIRC5-FTGTTTTGATTCCCGGGCTTABIRC5-RCAAAGCTGTCAGCTCTAGCAAAAGKi-67-FCGGACTTTGGGTGCGACTTKi-67-RTTACAACTCTTCCACTGGGACGATBAG1-FCGTTGTCAGCACTTGGAATACAABAG1-RGTTCAACCTCTTCCTGTGGACTGTBcl-2-FCAGATGGACCTAGTACCCACTGAGABcl-2-RCCTATGATTTAAGGGCATTTTTCCCCNB1-FTTCAGGTTGTTGCAGGAGACCCNB1-RCATCTTCTTGGGCACACAATCD68-FTGGTTCCCAGCCCTGTGTCD68-RCTCCTCCACCCTGGGTTGTSCUBE2-FTGACAATCAGCACACCTGCATSCUBE2-RTGTGACTACAGCCGTGATCCTTAERBB2-FCGGTGTGAGAAGTGCAGCAAERBB2-RCCTCTCGCAAGTGCTCCATMYBL2-FGCCGAGATCGCCAAGATGMYBL2-RCTTTTGATGGTAGAGTTCCAGTGATTCPGR-FCATCAGGCTGTCATTATGGPGR-RAGTAGTTGTGCTGCCCTTCCMMP11-FCCTGGAGGCTGCAACATACCMMP11-RTACAATGGCTTTGGAGGATAGCA；所述36条探针如下：ACTB-Pr-FFAM-AGGAGTATGACGAGTCCGGCCCC-BHQ1ACTB-Pr-VVIC-AGGAGTATGACGAGTCCGGCCCC-BHQ1ACTB-Pr-RROX-AGGAGTATGACGAGTCCGGCCCC-BHQ2ACTB-Pr-CCy5-AGGAGTATGACGAGTCCGGCCCC-BHQ3GAPDH-Pr-FFAM-CCGTTCTCAGCCTTGACGGTGC-BHQ1GAPDH-Pr-VVIC-CCGTTCTCAGCCTTGACGGTGC-BHQ1GAPDH-Pr-RROX-CCGTTCTCAGCCTTGACGGTGC-BHQ2GAPDH-Pr-C...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨雁峰，
申请(专利权)人：深圳塔歌生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44
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