ACE插入突变型探针、ACE缺失突变型探针、试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术属于分子生物学和基因工程技术领域，涉及一种ACE插入突变型探针。该ACE插入突变型探针特异性地识别第16内含子发生插入突变的ACE基因；所述ACE插入突变型探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述SEQ ID NO:3为5'‑CCAAACTTCACAGTCTCT‑3'。本发明专利技术提供的ACE插入突变型探针，能够特异性地识别第16内含子发生插入突变的ACE基因，可用于检测或筛查ACE基因是否发生第16内含子发生插入突变。

ACE insertion mutant probe, ACE deletion mutant probe, kit and its application

【技术实现步骤摘要】
ACE插入突变型探针、ACE缺失突变型探针、试剂盒及其应用
本专利技术属于分子生物学和基因工程
，更具体地，涉及一种ACE插入突变型探针、ACE缺失突变型探针、包括ACE插入突变型探针和ACE缺失突变型探针的试剂盒、以及他们的应用。
技术介绍
血管紧张素转化酶(ACE)又称激肽酶Ⅱ或肽基-羧基肽酶，属血管内皮细胞膜结合酶，由肽的C端将氨基酸切为两段变换而来，可使肽链C端二肽残基水解。主要功能有催化血管紧张素Ⅰ转化为血管紧张素Ⅱ；使缓激肽失活。ACE因这两种功能而成为治疗高血压、心力衰竭、2型糖尿病和糖尿病肾病等疾病的理想靶点。普利类药物实际上就是血管紧张素转换酶抑制剂，通过抑制ACE活性来治疗疾病，具有逆转高血压左心室肥厚、延缓左心室肥厚的发展等作用。ACE基因位于染色体17q23，基因长21kb，含26个外显子和25个内含子。ACE基因具有多态性，可使无活性的十肽AngI转换为具高度血管活性、能刺激醛固酮分泌的八肽AngⅡ，并促进缓激肽降解。1990年Rig等发现ACE基因的第16内含子中有一段Alu重复序列的插入(insertion，简写为I)/缺失(deletion，简写为D)。据此ACE基因包括三种基因型，分别为：ACE基因插入突变型(简称ACEI/I)、ACE基因插入/缺失突变型(简称ACEI/D)、以及ACE基因缺失突变型(简称ACED/D)。白种人、黑种人和亚洲人中D等位基因出现的频率分别为56.2％、60.3％和39.0％。ACE基因的多态性可影响血浆中血管紧张素转化酶(ACE)的水平，ACED/D型个体血浆ACE的活性升高，依那普利治疗后ACE活性下降更明显；在初治的高血压患者中，福辛普利对ACED/D型患者的降压疗效增强；在高血压合并左心室肥大和舒张期充盈障碍的患者中，ACED/D型患者服用依那普利和赖诺普利后心功能改善程度优于ACEI/D和ACEI/I型患者；ACEI/I型患者应用赖诺普利或卡托普利时肾功能下降更明显。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种ACE插入突变型探针、ACE缺失突变型探针、试剂盒及其应用，为患者选择合适的普利类药物提供指导。为了实现上述目的，本专利技术提供一种ACE插入突变型探针，所述ACE插入突变型探针特异性地识别第16内含子发生插入突变的ACE基因；所述ACE插入突变型探针的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示，所述SEQIDNO:3为5'-CCAAACTTCACAGTCTCT-3'。具体地，所述ACE插入突变型探针的5'端和/或3'端具有荧光标记。例如ACE插入突变型探针的5'端具有FAM或VIC标记，ACE插入突变型探针的3'端具有MGB标记。本专利技术还提供一种ACE缺失突变型探针，所述ACE缺失突变型探针特异性地识别第16内含子发生缺失突变的ACE基因；所述ACE缺失突变型探针的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示，所述SEQIDNO:4为5'-AACATTCTCATCCACGC-3'。具体地，所述ACE缺失突变型探针的5'端和/或3'端具有荧光标记。例如ACE缺失突变型探针的5'端具有FAM或VIC标记，ACE缺失突变型探针的3'端具有MGB标记。本专利技术还提供一种试剂盒，所述试剂盒包括：引物；上述的ACE插入突变型探针；以及上述的ACE缺失突变型探针；其中，所述引物特异性地扩增ACE基因，所述引物包括正向引物和反向引物；所述正向引物的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，SEQIDNO:1为5'-AGATGTAGGGTATGCAGTTTCTGC-3'；所述反向引物的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示，SEQIDNO:2为5'-CCAGAGATTGATTGATGAGAGCG-3'。具体地，所述试剂盒还包括阳性对照品，所述阳性对照品包括与上述的ACE插入突变型探针特异性结合的ACE基因片段、以及与上述的ACE缺失突变型探针特异性结合的ACE基因片段。具体地，所述试剂盒还包括阳性对照品，所述阳性对照品包括ACE基因位点插入突变型质粒、以及ACE基因位点缺失突变型质粒；所述ACE基因位点插入突变型质粒具有与上述的ACE插入突变型探针特异性结合的ACE基因片段；所述ACE基因位点缺失突变型质粒具有与上述的ACE缺失突变型探针特异性结合的ACE基因片段。更具体地，与上述的ACE插入突变型探针特异性结合的ACE基因片段是由上述的ACE插入突变型探针进行扩增所得的产物；更具体地，与上述的ACE缺失突变型探针特异性结合的ACE基因片段是由上述的ACE缺失突变型探针进行扩增所得的产物。更具体地，阳性对照品包括阳性对照品一、阳性对照品二、以及阳性对照品三；其中，阳性对照品一为上述的ACE基因位点插入突变型质粒；阳性对照品二为上述的ACE基因位点插入突变型质粒与上述的ACE基因位点缺失突变型质粒的混合物；阳性对照品三为上述的ACE基因位点缺失突变型质粒。更具体地，在阳性对照品二中，上述的ACE基因位点插入突变型质粒与上述的ACE基因位点缺失突变型质粒的质量比为1:1。本专利技术还提供一种ACE基因位点插入突变型质粒，所述ACE基因位点插入突变型质粒具有ACE基因片段，所述ACE基因片段是由上述的ACE插入突变型探针进行扩增所得的产物。本专利技术还提供一种ACE基因位点缺失突变型质粒，所述ACE基因位点缺失突变型质粒具有ACE基因片段，所述ACE基因片段是由上述的ACE缺失突变型探针进行扩增所得的产物。更具体地，所述试剂盒还包括以下组分中的至少一种：阴性对照品；缓冲液；dNTP；DNA聚合酶；以及灭菌水。更具体地，所述阴性对照可以为灭菌水。更具体地，所述DNA聚合酶为HSTaq酶。本专利技术还提供上述的ACE插入突变型探针、上述的ACE缺失突变型探针、以及上述的试剂盒中的至少一种在制备检测和/或筛查ACE基因型的制剂中的应用。本专利技术提供的ACE插入突变型探针，能够特异性地识别第16内含子发生插入突变的ACE基因，可用于检测或筛查ACE基因是否发生第16内含子发生插入突变。本专利技术提供的ACE缺失突变型探针，能够特异性地识别第16内含子发生缺失突变的ACE基因，可用于检测或筛查ACE基因是否发生第16内含子发生缺失突变。本专利技术提供的试剂盒，便于对检测或筛查ACE基因是否发生第16内含子发生插入和/或缺失突变，具有操作简单、检测快速、准确性高、特异性好、以及灵敏性好的特点。本专利技术为患者选择合适的普利类药物提供指导。本专利技术的其它特征和优点将在随后具体实施方式部分予以详细说明。附图说明通过结合附图对本专利技术示例性实施方式进行更详细的描述，本专利技术的上述以及其它目的、特征和优势将变得更加明显。图1示出了样本一的荧光定量PCR的扩增曲线，其中上方曲线表示VIC标记，下方曲线表示FAM标记。图2示出了样本二的荧光定量PCR的扩增曲线，其中上方的两条曲线表示VIC标记，下方的两条曲线表示FAM标记。图3示出了样本三的荧光定量PCR的扩增曲线，其中上方曲线表示VIC标记，下方曲线表示FAM标记。具体实施方式下面将更详细地描述本专利技术的优选实施方式。虽然以下描述了本专利技术的优选实施方式，然而应该理解，可以以各种形式实现本专利技术而不应被这里阐述的实施方式所限制。实施例中未注明具体条件者，皆按照常规条件或制造商建议本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种ACE插入突变型探针，其特征在于，所述ACE插入突变型探针特异性地识别第16内含子发生插入突变的ACE基因；所述ACE插入突变型探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述SEQ ID NO:3为5'‑CCAAACTTCACAGTCTCT‑3'。

【技术特征摘要】
1.一种ACE插入突变型探针，其特征在于，所述ACE插入突变型探针特异性地识别第16内含子发生插入突变的ACE基因；所述ACE插入突变型探针的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示，所述SEQIDNO:3为5'-CCAAACTTCACAGTCTCT-3'。2.根据权利要求1所述的ACE插入突变型探针，其特征在于，所述ACE插入突变型探针的5'端和/或3'端具有荧光标记。3.一种ACE缺失突变型探针，其特征在于，所述ACE缺失突变型探针特异性地识别第16内含子发生缺失突变的ACE基因；所述ACE缺失突变型探针的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示，所述SEQIDNO:4为5'-AACATTCTCATCCACGC-3'。4.根据权利要求3所述的ACE缺失突变型探针，其特征在于，所述ACE缺失突变型探针的5'端和/或3'端具有荧光标记。5.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：引物；权利要求1或2所述的ACE插入突变型探针；以及权利要求3或4所述的ACE缺失突变型探针；其中，所述引物特异性地扩增ACE基因，所述引物包括正向引物和反向引物；所述正向引物的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，SEQIDNO:1为5'-AGATGTAGGGTATGCAGTTTCTGC-3'；所...

【专利技术属性】
技术研发人员：张小蒙，周敏，
申请(专利权)人：江苏医药职业学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32