一种发光细菌毒性检测方法技术

本发明专利技术公开了一种发光细菌毒性检测方法，属于生物分析检测技术领域。主要步骤如下：首先培育特定的生物菌，用紫外光敏剂安息香双甲醚作为光引剂，在紫外线的照射下使生物菌发光。其次使用光度测量仪对发光菌的前后发光度分别进行测量，发光度越高，毒性检测率越高，从而实现待测物质的毒性检测。本发明专利技术针对毒性检测率低、工作效率低、易受菌种影响等问题，发明专利技术了生物化学发光毒性检测法，该方法不仅解决了之前的问题，并且具有分析速度快、成本比较低、不受菌种影响等特点。

A Method for Toxicity Detection of Luminescent Bacteria

【技术实现步骤摘要】
一种发光细菌毒性检测方法
本专利技术公开了一种检测发光细菌毒性的方法，属于生物分析检测

技术介绍
生物毒性根据样品对生物的毒性分为急性毒性和慢性毒性,半致死浓度是重要的毒性指标。生物毒性应用于环保、自来水、海关等方面。现今社会，人们对于化学物质用品的使用越来越多，从而导致对水生生态系统的污染也越来越严重，许多突发性环境污染事故是无法避免的，大致可以分为人为和自然两个方面，特别是石油化工原料的生产、储运和运输过程，自然而然的会导致各种事故及污染，这要求我们对各种突发的环境事故做出快速反应。在过去的几十年中，各种分析手段层出不穷，且精准度、灵敏度也越来越高，但是大多数研究都围绕着单一污染物展开，对于所处于多种污染物共同作用环境的生物来说，这并不能够准确的表达出对生物所造成的危害，这也体现出了联合毒性实验的重要性。因此，开发新的、有效的、能快速准确评估各类污染毒性的方法是非常迫切和必要的。目前生物毒性检测所采用的方法有:微生物毒性试验、藻类毒性试验、鱼类毒性试验。首先，微生物毒性试验实际上是细菌代谢的生理过程。该光的波长在500nm左右，在这波强下细菌的发光强度受各种因素影响，从而影响新陈代谢，使得水体毒性得到反映，但是这对环境具有一定的要求，不然容易会因为不同菌种得到不同的试验数据；其次藻类毒性试验是说海藻的存亡与水体的质量有着密不可分的关系，可以利用海藻的生物量来反应水体的毒性，但是试验时间比较长，而且毒性检测率比较低；最终的鱼类毒性试验表明，当水中的有毒物质达到一定浓度时，鱼类会出现一系列的中毒症状。包括繁殖或形态变化，行为缓慢，种群大小和结构变化等，因此是毒性测试的重要指标生物，但是这样的测试方法成本高、速度慢，降低了工作效率，容易受到外界其他因素影响。以上列举的方法中，第一种方法需要在特定的环境下进行，对环境要求比较高，而且容易会因为菌种不同受到影响；第二种方法毒性的检测率比较低，试验的时间比较长，很难快速得到试验结果；第三种方法成本高、速度慢，工作效率低，容易受到外界其他因素影响。
技术实现思路
本专利技术针对毒性检测率低、工作效率低、易受菌种影响等问题，提出了一种发光细菌毒性检测方法。培养一种特定的生物菌进行发光，当待测水中存在有毒物质时，光的强度会变强，用光度测量仪测量初始和试验后发光率，从而得出毒性检测率是否提高。该方法不仅解决了之前的问题，并且具有分析速度快、成本比较低等特点。为了达到上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：（1）培育特定的生物菌，并取出一种进行试验；（2）首先将生物菌与水凝胶混合在一起，并用紫外光敏剂安息香双甲醚作为光引剂，使其发出蓝色的光；（3）其次将混合后的生物菌滴在一张长20cm，宽10cm的试纸材料上面，用紫外灯对其照射10～15s；（4）然后加3％的生理盐水于紫外灯照射后的生物菌内，摇匀复苏10min；（5）之后取复苏后的菌液放入光度测量仪进行检测，得出它的初始发光度；（6）最后往待测液体中加入发光菌，静置2-3分钟后用光度测量仪测其发光度，对比两次发光度鉴别待测物的毒性。所述的特定培养的生物菌的培育步骤为：（1）先用牛皮纸将培养皿包起来灭菌；（2）配制培养基，完全溶于水后调节pH至7.2-7.4；（3）之后加入1-2g琼脂、5-6g葡萄糖、4-7g蛋白质，比例为1.8％。利用紫外线杀菌；（4）将灭菌后的培养基放入平板中并倒置；（5）利用接种环，先在酒精灯上烧红，然后降温，并进行划平板；（6）把划线后的平板倒置，并置于培养箱中培养；（7）培养24小时后得到生物菌。所述的试纸材料为防水、防潮试纸。所述的水凝胶是一种能吸水、保水以及缓释的聚合物，并且是亲水但不溶于水，按质量浓度百分比计，包括胰5％蛋白胨，10％酵母膏，20％甘油，KH2PO415％，Na2HPO425％，NaCl10％，琼脂15％，再添加质量为4～5mg生物菌粉对应120～150mL水凝胶。所述的安息香双甲醚是一种性能优良的新型紫外光引剂，比例为4～5mg生物菌粉对应1～2g的安息香双甲醚。所述的培养基中含有1至2克琼脂、5至6克葡萄糖、4至7克蛋白质。与其它传统方法相比，本专利技术具有显著特征：（1）试剂稳定，试验方便，数据重复性好，避免了因使用不同菌株干扰的问题；（2）测试速度快，相比传统的检测方法快了至少15分钟；（3）可以有效显示毒性的含量，提高毒性检测率。具体实施方式一种印染废水中成组生物毒性监测及鉴别评估方法，其步骤包括：（1）培育特定的生物菌，并取出一种进行试验；（2）首先将生物菌与水凝胶混合在一起，并用紫外光敏剂安息香双甲醚作为光引剂，使其发出蓝色的光；（3）其次将混合后的生物菌滴在一张长20cm，宽10cm的试纸材料上面，用紫外灯对其照射10～15s；（4）然后加3％的生理盐水于紫外灯照射后的生物菌内，摇匀复苏10min；（5）之后取复苏后的菌液放入光度测量仪进行检测，得出它的初始发光度；（6）最后往待测液体中加入发光菌，静置2-3分钟后用光度测量仪测其发光度，对比两次发光度鉴别待测物的毒性。所述的特定培养的生物菌的培育步骤为：（1）先用牛皮纸将培养皿包起来灭菌；（2）配制培养基，完全溶于水后调节pH至7.2-7.4；（3）之后加入1-2g琼脂、5-6g葡萄糖、4-7g蛋白质，比例为1.8％。利用紫外线杀菌；（4）将灭菌后的培养基放入平板中并倒置；（5）利用接种环，先在酒精灯上烧红，然后降温，并进行划平板；（6）把划线后的平板倒置，并置于培养箱中培养；（7）培养24小时后得到生物菌。所述的试纸材料为防水、防潮试纸。所述的水凝胶是一种能吸水、保水以及缓释的聚合物，并且是亲水但不溶于水，按质量浓度百分比计，包括胰5％蛋白胨，10％酵母膏，20％甘油，KH2PO415％，Na2HPO425％，NaCl10％，琼脂15％，再添加质量为4～5mg生物菌粉对应120～150mL水凝胶。所述的安息香双甲醚是一种性能优良的新型紫外光引剂，比例为4～5mg生物菌粉对应1～2g的安息香双甲醚。所述的培养基中含有1至2克琼脂、5至6克葡萄糖、4至7克蛋白质。实施例1：(1)取一培育后的生物菌进行试验；(2)将4mg生物菌粉与120mL水凝胶混合，取1g安息香双甲醚作为光引发剂，颜色为蓝色；(3)将混合后的生物菌滴在一张长20cm，宽10cm的试纸材料上面，用紫光灯对其照射10秒；(4)将在紫光灯照射后的生物菌放入含有3％的生理盐水中复苏，复苏完毕，用光度测量仪器测量发光菌的初始光量，做好记录，随后将发光性生物菌放入待测水体中，放置2分钟，拿出测试试验后的发光菌发光量，做好记录，将前后的测试光度进行对比。本专利技术生物菌发光率不变则待测水中没有毒，发光率改变则待测水中有毒，毒性显示与发光率成正比，发光率越高，毒性检测率越大，此实例初始光量和后光量分别为20％和80％，提高了75％毒性检测率。实施例2：(1)取一培育后的生物菌进行试验；(2)将4.5mg生物菌粉与130mL水凝胶混合，取1.5g安息香双甲醚作为光引发剂，颜色为蓝色；(3)将混合后的生物菌滴在一张长20cm，宽10cm的试纸材料上面，用紫光灯对其照射13秒；(4)将在紫光灯照射后的生物菌放入含有3％的生理盐水中复苏，复苏完毕，用光度测量仪器本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种发光细菌毒性检测方法，其步骤包括：（1）培育特定的生物菌，并取出一种进行试验；（2）首先将生物菌与水凝胶混合在一起，并用紫外光敏剂安息香双甲醚作为光引剂，使其发出蓝色的光；（3）其次将混合后的生物菌滴在一张长20cm，宽10cm的试纸材料上面，用紫外灯对其照射10～15s；（4）然后加3％的生理盐水于紫外灯照射后的生物菌内，摇匀复苏10min；（5）之后取复苏后的菌液放入光度测量仪进行检测，得出它的初始发光度；（6）最后往待测液体中加入发光菌，静置2‑3分钟后用光度测量仪测其发光度，对比两次发光度鉴别待测物的毒性。

【技术特征摘要】
1.一种发光细菌毒性检测方法，其步骤包括：（1）培育特定的生物菌，并取出一种进行试验；（2）首先将生物菌与水凝胶混合在一起，并用紫外光敏剂安息香双甲醚作为光引剂，使其发出蓝色的光；（3）其次将混合后的生物菌滴在一张长20cm，宽10cm的试纸材料上面，用紫外灯对其照射10～15s；（4）然后加3％的生理盐水于紫外灯照射后的生物菌内，摇匀复苏10min；（5）之后取复苏后的菌液放入光度测量仪进行检测，得出它的初始发光度；（6）最后往待测液体中加入发光菌，静置2-3分钟后用光度测量仪测其发光度，对比两次发光度鉴别待测物的毒性。2.根据权利要求1所述的一种发光细菌毒性检测方法，其特征在于：所述的特定培养的生物菌的培育步骤为：（1）先用牛皮纸将培养皿包起来灭菌；（2）配制培养基，完全溶于水后调节pH至7.2-7.4；（3）之后加入1-2g琼脂、5-6g葡萄糖、4-7g蛋白质，比例为1.8％。3.利用紫外线杀菌；（4）将灭菌后的培养基放入平板中并倒...

【专利技术属性】
技术研发人员：王凯迪，肖娴，孙向武，殷鸿洋，刘钰，周俊杰，张芸，郭梦炜，赵远，
申请(专利权)人：常州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32