一种脐带间充质干细胞因子的制备方法和用于制备干细胞精华液的用途技术

本发明专利技术公开了一种脐带间充质干细胞因子的制备方法和用于制备干细胞精华液的用途。脐带间充质干细胞作为干细胞抗衰老产品的种子细胞具有很大的优势，它不涉及伦理问题，易于分离培养，具有巨大的体外扩增潜能，具有作为优良种子细胞所必备的必要条件。首先，本发明专利技术提供的制备方法制备得到的脐带间充质干细胞因子具有显著的皮肤抗衰功效，在减少瘢痕形成、修复痘印等方面具有更好的美容应用前景，可以用于制备成干细胞精华液等美容产品；其次，该制备方法中，脐带间充质干细胞体外扩增效率高，可以为制备脐带间充质干细胞因子提供足够量的细胞原料。

Preparation method of umbilical cord mesenchymal stem cell factor and application for preparing stem cell essence

【技术实现步骤摘要】
一种脐带间充质干细胞因子的制备方法和用于制备干细胞精华液的用途
本专利技术涉及干细胞美容领域，具体涉及一种脐带间充质干细胞因子的制备方法和用于制备干细胞精华液的用途。
技术介绍
干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，被誉为“不老的源泉”，在再生医学领域有巨大的应用前景。干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞。由于伦理学等问题，目前在临床上具有广泛应用前景的是成体干细胞，尤其是脐带来源的间充质干细胞。干细胞生长时，细胞内会分泌大量的细胞因子，其中包含多种生长因子，例如胰岛素生长因子、血管内皮生长因子、转化生长因子、皮肤生长因子、纤维细胞生长因子及一些相关的胶原蛋白物质，而这些因子都会参与不同组织及反应的机制中。间充质干细胞作为干细胞抗衰老产品的种子细胞具有很大的优势，它来源广泛，易于分离培养，具有巨大的体外扩增潜能，具有作为“抗衰老护肤品”优良种子细胞所必备的必要条件。其中，以脐带间充质干细胞的研究和应用最为广泛。专利CN106244652A公开了一种诱导人间充质干细胞生产干细胞因子的方法，该方法所制备的冻干粉最大程度上保存了人间充质干细胞培养上清中的各种具有生物活性的细胞因子混合物，为人间充质干细胞培养上清液的在美容等方面的应用奠定了基础。专利CN106580851A公开了一种间充质干细胞提取物、其提取方法和应用，该提取物中包含许多强效抗衰老因子，能够应用于美容产品中，起到对皮肤抗衰老修复和美容作用。专利CN106318904A公开了间充质干细胞条件培养基用于美容品领域的用途，优选用于皮肤的修复再生、美白、抗皱以及抗氧化的用途，该间充质干细胞条件培养基通过以下方法制备：(1)获得间充质干细胞；(2)在完全培养基中培养步骤(1)中所得的间充质干细胞；(3)在基础培养基中培养步骤(2)中所得的间充质干细胞；(4)离心去除间充质干细胞，取上清液过滤，滤液即为间充质干细胞条件培养基。专利CN108753713A公开了一种用于美容保养的脐带间充质干细胞液的制备方法，包括以下步骤：步骤一，获取脐带干细胞；步骤二，传代培养；步骤三，脐带干细胞液的制备。该技术方案中脐带干细胞能够分泌多种细胞生长因子，为皮肤表皮细胞提供良好的微环境，例如纤维母细胞生长因子、成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子、胰岛素生长因子、血管生长素等，能激活人角质细胞在体外的增殖和迁移，进入促进皮肤再生和皮肤创面愈合，并且可以促进皮肤表皮细胞成熟，增加皮肤弹性，滋润肌肤，消除皱纹和预防色斑，具有很好的美容功效。专利CN107488626A公开了一种脐带间充质干细胞提取物及其在美容方面的应用，该脐带间充质干细胞提取物由下述步骤提取得到：(1)从脐血中分离得到脐带间充质干细胞；(2)使用无血清培养基培养步骤(1)得到脐带间充质干细胞，并分离脐带间充质干细胞和培养液；(3)将脐带间充质干细胞裂解，并加入培养液得到蛋白悬液；(4)将步骤(3)得到的蛋白悬液浓缩，得到浓缩液，即为脐带间充质干细胞提取物。脐带间充质干细胞能具有较强的免疫调节作用、促进造血恢复功能、修复损伤或病变的组织器官；因此本专利技术的脐带间充质干细胞提取物用于美容产品中，使用后效果优异，效果维持时间长。可见，脐带间充质干细胞等间充质干细胞在美容方面的应用已经越来越热门。
技术实现思路
本专利技术第一目的在于提供一种脐带间充质干细胞因子的制备方法，第二目的在于提供其用于制备干细胞精华液的用途。本专利技术目的通过以下技术方案实现：一种脐带间充质干细胞因子的制备方法，包括如下步骤：步骤S1、从脐带组织中分离脐带间充质干细胞并进行培养；步骤S2、收集脐带间充质干细胞，加入去离子水裂解，然后低温离心去掉细胞碎片，上清液冷冻干燥，即得脐带间充质干细胞因子。进一步地，步骤S1、步骤S2之间还包括体外快速扩增步骤：取生长状态良好的脐带间充质干细胞接种于无菌培养容器中，将培养基更换为含胎牛血清和甜菊双糖苷的α-MEM培养基，置于37℃、5％CO2、饱和湿度培养箱中培养，消化、离心、洗涤，收集细胞。优选地，胎牛血清体积百分浓度为10％。优选地，甜菊双糖苷的浓度为100μg/mL。优选地，置于37℃、5％CO2、饱和湿度培养箱中培养5d。优选地，每5×106个细胞加入2ml去离子水。一种脐带间充质干细胞的体外快速扩增方法，取生长状态良好的脐带间充质干细胞以5×103/cm2的密度接种于直径100mm的无菌培养皿中，将培养基更换为15mL含10％胎牛血清和100μg/mL甜菊双糖苷的α-MEM培养基，置于37℃、5％CO2、饱和湿度培养箱中培养5d，消化、离心、洗涤，收集细胞。甜菊双糖苷在脐带间充质干细胞体外扩增培养方面的应用。皮肤的老化是一个复杂的生物学过程，主要涉及真皮层，如基质金属蛋白酶水平增加导致细胞间基质胶原蛋白和弹性纤维降解增加，TGF-1β信号传导障碍导致胶原蛋白合成减少等，此外皮下组织血管减少以及结构变化也是皮肤老化的重要因素，因此通过补充细胞因子激活真皮层细胞活力在皮肤抗衰老领域有很大的潜力。从多种干细胞主要是间充质干细胞获得的细胞培养产物已被证实具有皮肤抗衰老功效(闵倩等，间充质干细胞和淋巴细胞分泌细胞因子的抗衰老功效研究，《中国医疗美容》第8卷第7期2018年7月)。具体实施例中，以人皮肤成纤维细胞(HFF-1细胞)为细胞模型，通过测定脐带间充质干细胞因子对HFF-1细胞是否具有增殖促进作用评价其促进皮肤更新抗衰老作用，结果10μg/mL脐带间充质干细胞因子可以将HFF-1细胞的增殖活性提高(44.5±5.9)％，20μg/mL脐带间充质干细胞因子可以将HFF-1细胞的增殖活性提高(79.7±6.2)％，如图3。由此可见，脐带间充质干细胞因子可以显著促进人皮肤成纤维细胞的增殖，且呈现剂量依赖性，上述制备方法制备得到的脐带间充质干细胞因子可以用于制备抗皮肤衰老、促进创面愈合的美容产品，如干细胞精华液。有益效果：脐带间充质干细胞作为干细胞抗衰老产品的种子细胞具有很大的优势，它不涉及伦理问题，易于分离培养，具有巨大的体外扩增潜能，具有作为优良种子细胞所必备的必要条件。首先，本专利技术提供的制备方法制备得到的脐带间充质干细胞因子具有显著的皮肤抗衰功效，在抑制炎症、减少瘢痕形成、修复痘印等方面具有更好的美容应用前景，可以用于制备成干细胞精华液等美容产品；其次，该制备方法中，脐带间充质干细胞体外扩增效率高，可以为制备脐带间充质干细胞因子提供足够量的细胞原料。附图说明图1为第4代脐带间充质干细胞的倒置显微镜观察结果；图2为第4代脐带间充质干细胞的流式检测结果；图3为脐带间充质干细胞因子可以将HFF-1细胞的增殖活性增加百分率(％)。具体实施方式下面结合具体的实施例来介绍本专利技术的实质性内容，但不能以此限定本专利技术保护范围。实施例1：脐带间充质干细胞因子的制备一、实验材料和仪器脐带组织取自健康剖宫产孕妇，4℃保存，24h内进行脐带间充质干细胞的分离与培养。产妇本人签署知情同意书，声明所取脐带仅可用于科学研究。直径100mm的无菌培养皿为美国Corning产品。细胞培养箱为ThermoFisherScientific产品。流式细胞仪为美国BDBiosciences产品。胎牛血清为美国Gibco公司产品，α-MEM培养基为H本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脐带间充质干细胞因子的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S1、从脐带组织中分离脐带间充质干细胞并进行培养；步骤S2、收集脐带间充质干细胞，加入去离子水裂解，然后低温离心去掉细胞碎片，上清液冷冻干燥，即得脐带间充质干细胞因子。

【技术特征摘要】
1.一种脐带间充质干细胞因子的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S1、从脐带组织中分离脐带间充质干细胞并进行培养；步骤S2、收集脐带间充质干细胞，加入去离子水裂解，然后低温离心去掉细胞碎片，上清液冷冻干燥，即得脐带间充质干细胞因子。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S1、步骤S2之间还包括体外快速扩增步骤：取生长状态良好的脐带间充质干细胞接种于无菌培养容器中，将培养基更换为含胎牛血清和甜菊双糖苷的α-MEM培养基，置于37℃、5％CO2、饱和湿度培养箱中培养，消化、离心、洗涤，收集细胞。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：胎牛血清体积百分浓度为10％。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：甜菊双糖苷的浓度为100μg/mL。5.根据权利要求2所述的制备方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜东花，姜东盛，约翰·威尔逊，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：南京温博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32