一种天然抗刺激修护因子及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种天然抗刺激修护因子及其制备方法。所述天然抗刺激修护因子为植物根提取物。本发明专利技术利用叶盘法通过发根农杆菌转化植物，体外培养获得试管根，然后从试管根中获得修护因子，所述修护因子可应用于化妆品中用于修护皮肤。

A Natural Anti-Stimulation Repair Factor and Its Preparation Method

【技术实现步骤摘要】
一种天然抗刺激修护因子及其制备方法
本专利技术涉及化妆品
，具体涉及一种天然抗刺激修护因子及其制备方法。
技术介绍
紫外线照射会引起皮肤色素沉着、弹性改变、干燥粗糙、皱纹形成等一系列生理改变。色素沉着指的是黑色素沉着。对于健康的皮肤来说，有各种因素会影响其颜色，黑色素就是其中之一。黑色素位于表皮基底细胞层并累积在已经成熟的黑素体中，然后转移到邻近的角质形成细胞中，使表皮呈现典型的棕色。虽然人的皮肤中黑色素细胞的浓度相似，但不同种族群体之间黑色素细胞的活性是不同的。当皮肤暴露于太阳下时，紫外线会破坏表皮，导致角质形成细胞释放出多肽-前阿片黑色素细胞皮质激素原(POMC)，POMC分裂释放黑色素细胞刺激素(MSH)。MSH通过黑色素皮质素受体(MC1R)激活环磷酸腺苷(cAMP)，cAMP诱导转录因子MITF的转录，而MITF负责转录参与黑色素生成和转移过程中所涉及的基因，其中包括酪氨酸酶基因。酪氨酸酶是黑色素生成过程中的关键酶，酪氨酸在酪氨酸酶作用下经过一系列反应生成黑色素。总的来说，紫外线刺激皮肤，会引起黑色素细胞产生黑色素，黑色素沉着，在人体面部、颈部和手部表现为“色斑”。另一方面，弹性改变、干燥粗糙、皱纹形成的主要原因在于胶原蛋白、弹性蛋白、氨基多糖等细胞外基质成分发生了改变。细胞外基质是由细胞外的蛋白和多糖构成的网络结构，包括由糖胺聚糖和蛋白聚糖组成的凝胶样基质，以及胶原蛋白和弹性蛋白组成的纤维网架。细胞外基质用来支撑皮肤使其保持张力和紧致性。细胞外基质中起关键作用的有赖氨酰氧化酶(LOX)和富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白(Sparc)。LOX用来催化胶原蛋白和弹性蛋白之间共价键形成，使细胞外基质交联。Sparc是一种结合胶原蛋白的蛋白质，参与胶原纤维和基底层的形成。基底层位于真皮和表皮之间，由层粘连蛋白组成，为角质细胞和成纤维细胞提供机械支持，确保细胞为皮肤保持健康和光亮提供营养。近年来，化妆品市场对皮肤增白产品的需求不断增加，这些产品不仅能降低皮肤色素沉着水平，还可使皮肤看起来更加光亮和滋润。目前的化妆品是基于使用含有黑色素生成抑制成分的乳霜、凝胶载体来应对紫外刺激，例如曲酸，对苯二酚和熊果苷。曲酸来源于真菌，具有脱色活性，可抑制酪氨酸酶活性，然而，它与空气接触不稳定，光氧化会失去活性，并且会致敏、引起接触性过敏和皮炎。对苯二酚是天然来源的化合物，具有美白功能，但是该物质具有毒性，禁止作化妆品原料。在对苯二酚衍生物中，熊果苷因为它对细胞有毒也不宜使用。因此，化妆品抗紫外刺激领域需要开发新的天然提取物。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有的抗紫外刺激的天然修护因子对皮肤细胞有毒的问题，提供一种来自芸苔属植物的、抗紫外刺激有效的、安全的天然修护因子及其制备方法。为实现上述目的，本专利技术采取以下技术方案：本专利技术提供了一种天然抗刺激修护因子，所述天然抗刺激修护因子为植物根提取物。优选地，所述植物根提取物为芸苔属植物试管根提取物，所述天然抗刺激修护因子由芸苔属植物试管根的乙醇提取物和细胞壁提取物组成。优选地，所述芸苔属植物为白菜(Brassicapekinensis)。本专利技术还提供了天然抗刺激修护因子的制备方法，包括以下步骤：步骤1：利用叶盘法将发根农杆菌转化到芸苔属植物的叶片中，培养获得不定根；步骤2：将不定根在液体培养基中扩大培养；步骤3：乙醇提取物的制备：收集不定根，将不定根与乙醇在1：4w/v的比例下进行混合匀浆，将样品搅拌1～6小时，在4000rpm、4℃下离心15分钟，固体残渣和上清液分离，回收上清液，旋转蒸发除去乙醇，得到乙醇提取物；通常，从1L乙醇提取上清中可回收约10ml浓缩的乙醇提取物，该提取物可以溶于甘油等亲水性溶剂中，用于化妆品的原料。步骤4：细胞壁提取物的制备：将步骤3得到的固体残渣悬浮在酸溶液中，并在100℃下煮沸1小时；向溶液中加入胃蛋白酶；在连续搅拌、37℃条件下，反应进行24小时，离心回收上清液，冷冻干燥，获得干粉即为细胞壁提取物；通常从1升细胞壁提取上清中得到约10g干粉，将干粉溶解于甘油等亲水性溶剂，可用作化妆品的原料。优选地，所述酸溶液为盐酸、硫酸或磷酸。优选地，所述混合匀浆用乙醇为-20℃保存的、体积百分数为90％～100％的乙醇。本专利技术又提供了天然抗刺激修护因子在化妆品中的应用。本专利技术再提供了天然抗刺激修护因子在皮肤修护中的应用，具体是将天然抗刺激修护因子和亲水性溶剂混合形成组合物，用于皮肤修护；所述皮肤修护为减少黑色素含量和/或促进层粘连蛋白亚基的表达。优选地，所述亲水性溶剂为水、盐溶液或有机溶剂，所述有机溶剂为醇、甘油、有机酸、酰胺、胺、醛或酮。优选地，组合物中乙醇提取物的质量浓度和细胞壁提取物的质量浓度之比为1:1。本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术从芸苔属植物(特别是白菜)的试管根中提取修护因子，所得修护因子可以减少皮肤色素沉着、促进细胞外基质中关键蛋白的表达。并且从细胞毒性测定结果来看，所述修护因子对细胞有效、安全。2、本专利技术通过用发根农杆菌转化获得试管根，试管根生长速度快，且该过程不需要激素，并且对于具有高抗氧化能力且具有良好抗菌性的次级代谢物具有高生物合成能力，如植物激素、生物碱、蒽醌、抗黄素、类黄酮、皂苷和萜烯，自然状态下这些次级代谢物在植物细胞中含量很低。3、试管根由于在可控的条件下生长，因此不会有致病因子等潜在环境风险。另外所得修护因子是标准化的并且不依赖于季节和环境条件。这使得所获得的产品始终具有相同的质量特性。此外，还可以通过改变生长条件或通过添加具有刺激作用的天然物质，诱导试管根产生更多的所需物质。附图说明图1为两种不同浓度的乙醇提取物和细胞壁提取物对HDF细胞的细胞毒性测定(MTT)结果。纵坐标表示相对于未经处理的对照样品的活细胞百分比，对照的活细胞百分比设定为100％。图2为用两种不同浓度的细胞壁提取物处理鼠黑色素瘤细胞(B16F1)72h(2A)、处理人原发性黑色素细胞(HEM)(2B)24小时后的黑色素含量的分析结果。图2A中样品的黑色素含量为相对于用IBMX刺激的对照样品的百分比，图2B中样品的黑色素含量为相对于未刺激处理的对照样品的百分比。曲酸处理的样品为阳性对照。图3为细胞壁提取物对小鼠黑素瘤细胞(B16F1)处理72h(3A)和对人原发性黑色素细胞(HEM)处理24h(3B)后的酪氨酸酶活性的影响。纵坐标的酶活性值为相对于未处理的对照样品的百分比，对照样品的酶活性值设定为100％。对于B16F1和HEM细胞系，分别使用乙酰水杨酸和抗坏血酸处理作为阳性对照。图4为两种不同浓度的细胞壁提取物对B16F1细胞处理6小时后MITF基因表达量；图中给出的值表示为相对于未经处理的对照样品的百分比，对照样品设定为100％。作为阳性对照，使用乙酰水杨酸处理B16F1细胞。图5为两种不同浓度的细胞壁提取物和forskolin(10μm)对B16F1细胞处理1h后其内cAMP水平。对照样品为仅用forskolin(10μm)处理的B16F1细胞，对照样品中的cAMP水平设定为100％。图6为两种不同浓度的乙醇提取物处理HDF细胞6小时后，赖氨酰氧化酶(6A)和SPARC(6B)表达量。未经处理的对照样品中的赖氨酰氧化酶和SP本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种天然抗刺激修护因子，其特征在于，所述天然抗刺激修护因子为植物根提取物。

【技术特征摘要】
1.一种天然抗刺激修护因子，其特征在于，所述天然抗刺激修护因子为植物根提取物。2.根据权利要求1所述的一种天然抗刺激修护因子，其特征在于，所述植物根提取物为芸苔属植物试管根提取物，所述天然抗刺激修护因子由芸苔属植物试管根的乙醇提取物和细胞壁提取物组成。3.根据权利要求1-3中任一项所述的天然抗刺激修护因子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：利用叶盘法将发根农杆菌转化到芸苔属植物的叶片中，培养获得不定根；步骤2：将不定根在液体培养基中扩大培养；步骤3：乙醇提取物的制备：收集不定根，将不定根与乙醇在1：4w/v的比例下进行混合匀浆，将样品搅拌1～6小时，在4000rpm、4℃下离心15分钟，固体残渣和上清液分离，回收上清液，旋转蒸发除去乙醇，得到乙醇提取物；步骤4：细胞壁提取物的制备：将步骤3得到的固体残渣悬浮在酸溶液中，并在100℃下煮沸1小时；向溶液中加入胃蛋白酶；在连续搅拌、37℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：林敏，
申请(专利权)人：江西登云健康美业互联有限公司，
类型：发明
国别省市：江西,36