一种副猪嗜血杆菌、猪链球菌与胸膜肺炎放线杆菌三联灭活疫苗及其应用制造技术

本发明专利技术涉及兽用生物制品技术领域，具体涉及一种副猪嗜血杆菌、猪链球菌与胸膜肺炎放线杆菌三联灭活疫苗，包括灭活的副猪嗜血杆菌菌株HNHPS1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HN1570血清型抗原、灭活的猪链球菌菌株HNSS1血清型抗原、灭活的胸膜肺炎放线杆菌菌株HNAPP1抗原；四株菌株均有良好的免疫原性，以这四株菌株灭活抗原制备的疫苗，可以很好的预防临床副猪嗜血杆菌、猪链球菌和胸膜肺炎放线杆菌型的感染，同时该疫苗制备工艺简单，且安全性好，免疫效果好、免疫期长，同时可以达到一针防多病，降低成本，减少应激的目的。

【技术实现步骤摘要】
一种副猪嗜血杆菌、猪链球菌与胸膜肺炎放线杆菌三联灭活疫苗及其应用
：本专利技术属于兽用生物制品
，具体涉及一种副猪嗜血杆菌血清4型、5型、猪链球菌2型与胸膜肺炎放线杆菌1型三联灭活疫苗制备及应用。
技术介绍
：副猪嗜血杆菌（Haemophilusparasuis,HPS）是巴氏杆菌科的一种革兰氏阴性多形态小杆菌，为猪副猪嗜血杆菌病的病原菌，主要引起猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎。本病在全世界范围内广泛存在，德国学者Glsser于1910年首先报道，又称为革拉氏病（Glsser'sdisease）。副猪嗜血杆菌可以感染各种年龄段的猪，主要发生在断奶后和保育阶段，主要感染2周龄到4月龄的猪，发病率一般在10%～15%，严重时死亡率可达50%，该病已成为近年来断奶、保育仔猪死亡的主要原因之一，是临床混合感染的主要病原之一，给养猪业造成较大的经济损失，严重影响养猪业的健康发展。副猪嗜血杆菌临床血清型较多，标准分型有15个血清型，临床上还有20%以上的不可分型菌株，该病原呈世界性分布，各地流行菌株血清型不一，各血清型之间缺乏免疫交叉保护能力。疫苗免疫接种是防控副猪嗜血杆菌病的最佳途径，应根据流行的血清型选择对应的单价或多价疫苗。国内副猪嗜血杆菌血清4型、5型是报道最流行的血清型。猪链球菌（StreptococcusSuis,SS）是国家规定的一种二类动物疫病，它是一类人畜共患的急性、热性的传染性疾病，是引起猪链球菌病的主要病原，主要引起猪脑膜炎以及败血症等疫病。根据猪链球菌的荚膜多糖抗原可将之分为35个血清型，即1～34型和1/2型。对猪致病性较强的是1型、2型、1/2型、7型和9型。其中猪链球菌2型是流行最广、致病性最强的血清型，其次是9型、7型、1型。近几年来，猪2型链球菌引起的猪链球菌病呈上升趋势。该病以急性败血症为主，发病急，死亡快，给养猪业造成巨大的经济损失，并且猪2型链球菌可以引起了人的感染和死亡。另外，该病经常与猪圆环病毒、猪繁殖与呼吸综合征、猪的附红细胞体病以及非典型猪瘟混合感染，所以一旦发生此病将很难控制，从而给养殖户造成重大经济财产损失，给我国养猪业的发展带来巨大的困难。因此该病的研究对畜牧业及公共卫生业上均有重要意义。传染性胸膜肺炎放线杆菌（ActinobacillusPleuropneumoniae,APP）是引起猪传染性胸膜肺炎（PorcineinfectionPleuropneumonia）的病原，是一种猪的高度接触性传染性呼吸道疾病，主要表现为爆发性流行，以纤维素性、出血性、坏死性肺炎为特征，发病率在8.5%~100%之间，死亡率在0.4%~100%之间，是当前育肥猪和种猪死亡的主要原因之一。因此传染性胸膜肺炎放线杆菌的防治对于养猪业的健康发展具有重大的意义。胸膜肺炎放线杆菌血清型多达15种，且目前还有很多不能定型的临床分离菌株，各血清型之间缺乏有效的交叉免疫保护，不同国家、地区和猪场流行的优势血清型又不尽相同，因此，APP的分离鉴定和分型在该病的防治中尤为重要。国内流行的血清型主要是1，2，3，5，7型，APP外毒素在致病与免疫中起着重要作用，APP一共有4种外毒素，即毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ和ApxⅣ，而且毒素ApxⅠ和ApxⅡ在APP毒力方面起着关键作用。不同血清型分泌的外毒素不一样。血清1型能同时分泌毒素ApxⅠ、ApxⅡ和ApxⅣ，是所有血清型毒株中毒力最强、免疫原性最好的毒株，同时也是我国流行的一种优势血清型毒株。在临床上副猪嗜血杆菌与猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌经常混合感染或继发感染，几者症状相似，且药物治疗效果均不佳，因此，亟需一种新的具有安全、免疫原性好的多价菌株制备的疫苗对副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌病进行防治。
技术实现思路
：针对目前副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌混合感染，各血清型之间缺少免疫交叉保护的问题，本专利技术提供一种副猪嗜血杆菌血清、猪链球菌与胸膜肺炎放线杆菌的三联灭活疫苗。本专利技术解决其技术问题所采用的方案是：一种副猪嗜血杆菌、猪链球菌与胸膜肺炎放线杆菌三联灭活疫苗，包括灭活的副猪嗜血杆菌菌株HNHPS1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HN1570血清型抗原、灭活的猪链球菌菌株HNSS1血清型抗原、灭活的胸膜肺炎放线杆菌菌株HNAPP1抗原。上述的一种副猪嗜血杆菌、猪链球菌与胸膜肺炎放线杆菌三联灭活疫苗，所述菌株HNHPS1为血清4型副猪嗜血杆菌（Haemophilusparasuis），于2016年11月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNO：13335；所述菌株HN1570为血清5型副猪嗜血杆菌（Haemophilusparasuis），于2018年11月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNO：16802；所述菌株HNSS1为2型猪链球菌（Streptococcussuis），于2016年11月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNO：13334；所述菌株HNAPP1为1型胸膜肺炎放线杆菌（Actinobaciluspleuropneumoniae）,于2016年11月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNO：13333。上述的一种副猪嗜血杆菌、猪链球菌与胸膜肺炎放线杆菌三联灭活疫苗，所述菌株HNHPS1血清型抗原、菌株HN1570血清型抗原、菌株HNSS1血清型抗原、菌株HNAPP1抗原的比例为1∶1∶1∶1。本专利技术还提供一种副猪嗜血杆菌、猪链球菌与胸膜肺炎放线杆菌三联灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：a.增殖：将副猪嗜血杆菌4型HNHPS1株、5型HN1570株、猪链球菌2型HNSS1株和胸膜肺炎放线杆菌1型HNAPP1株分别繁殖培养，获得副猪嗜血杆菌HNHPS1株、HN1570株、猪链球菌HNSS1株和胸膜肺炎放线杆菌HNAPP1株菌液，并分别进行活菌计数；b.灭活：分别向步骤a中获得的副猪嗜血杆菌HNHPS1株、HN1570株、猪链球菌HNSS1株和胸膜肺炎放线杆菌HNAPP1株菌液中按照菌液体积的0.2%加入甲醛溶液，于37℃灭活24h；c.浓缩：使用超滤装置分别浓缩灭活后检验合格的副猪嗜血杆菌HNHPS1株、HN1570株、猪链球菌HNSS1株和胸膜肺炎放线杆菌HNAPP1株菌液，根据灭活前的活菌计数，用无菌生理盐水调整浓缩终浓度为1.0×1010CFU/mL；d.制备疫苗：（1）油相的制备：按体积比取注射用白油92份加入油相罐内，向罐内加入硬脂酸铝1份，边加边搅拌直至完全透明，再加入司本-806份，116℃高压灭菌40min，冷却至室温后再加入维生素A和维生素E各0.5份，混合均匀得到油相备用；（2）水相的制备：将浓缩后获得的副猪嗜血杆菌HNHPS1株、HN1570株、猪链球菌HNSS1株和胸膜肺炎放线杆菌HNAPP1株抗原液，按照1∶1∶1∶1的比例混匀配制成抗原液，按体积份比取本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种副猪嗜血杆菌、猪链球菌与胸膜肺炎放线杆菌三联灭活疫苗，其特征在于：包括灭活的副猪嗜血杆菌菌株HNHPS1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HN1570血清型抗原、灭活的猪链球菌菌株HNSS1血清型抗原、灭活的胸膜肺炎放线杆菌菌株HNAPP1抗原。

【技术特征摘要】
1.一种副猪嗜血杆菌、猪链球菌与胸膜肺炎放线杆菌三联灭活疫苗，其特征在于：包括灭活的副猪嗜血杆菌菌株HNHPS1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HN1570血清型抗原、灭活的猪链球菌菌株HNSS1血清型抗原、灭活的胸膜肺炎放线杆菌菌株HNAPP1抗原。2.根据权利要求1所述的一种副猪嗜血杆菌、猪链球菌与胸膜肺炎放线杆菌三联灭活疫苗，其特征在于：所述菌株HNHPS1为血清4型副猪嗜血杆菌（Haemophilusparasuis），于2016年11月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO：13335；所述菌株HN1570为血清5型副猪嗜血杆菌（Haemophilusparasuis），于2018年11月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO：16802；所述菌株HNSS1为2型猪链球菌（Streptococcussuis），于2016年11月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO：13334；所述菌株HNAPP1为1型胸膜肺炎放线杆菌（Actinobaciluspleuropneumoniae）,于2016年11月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO：13333。3.根据权利要求1所述的一种副猪嗜血杆菌、猪链球菌与胸膜肺炎放线杆菌三联灭活疫苗，其特征在于：所述菌株HNHPS1血清型抗原、菌株HN1570血清型抗原、菌株HNSS1血清型抗原、菌株HNAPP1抗原的比例为1∶1∶1∶1。4.一种副猪嗜血杆菌、猪链球菌与胸膜肺炎放线杆菌三联灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a.增殖：将副猪嗜血杆菌4型HNHPS1株、5型HN1570株、猪链球菌2型HNSS1株和胸膜肺炎放线杆菌1型HNAPP1株分别繁殖培养，获得副猪嗜血杆菌HNHPS1株、HN1570株、猪链球菌HNSS1株和胸膜肺炎放线杆菌HNAPP1株菌液，并分别进行活菌计数；b.灭活：分别向步骤a中获得的副猪嗜血杆菌HNHPS1株、HN1570株、猪链球菌HNSS1株和胸膜肺炎放线杆菌HNAPP1株菌液中按照菌液体积的0.2%加入甲醛溶液，于37℃灭活24h；c.浓缩：使用超滤装置分别浓缩灭活后检验合格的副猪嗜血杆菌HNHPS1株、HN1570株、猪链球菌HNSS1株和胸膜肺炎放线杆菌HNAPP1株菌液，根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：王治方，徐引弟，张青娴，朱文豪，许峰，焦文强，李海利，郎利敏，张立宪，游一，王克领，
申请(专利权)人：河南省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：河南,41