一种水飞蓟素混悬液助悬剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种水飞蓟素混悬液助悬剂及其应用，该MrpC蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO 01所示。本发明专利技术中的MrpC蛋白作为助悬剂可得到质量稳定的水飞蓟素混悬液，于观察2h内，沉降体积比不低于0.9，具有良好的助悬性能。

A suspension aid for silymarin suspension and its application

The invention discloses a silymarin suspension aid and its application. The amino acid sequence of the MrpC protein is shown as SEQ ID NO 01. The MRpC protein in the invention can be used as a suspension aid to obtain silymarin suspension with stable quality. Within 2 hours of observation, the sedimentation volume ratio is not less than 0.9, which has good suspension aid performance.

【技术实现步骤摘要】
一种水飞蓟素混悬液助悬剂及其应用
本专利技术属于助悬剂
，具体涉及一种水飞蓟素混悬液助悬剂及其应用。
技术介绍
水飞蓟素是天然的黄酮木脂素类化合物，系从菊科植物水飞蓟的干燥果实中提取而得到的天然活性物质，被称为“天然的保肝药”。另外水飞蓟素具有抗辐射、抗衰老、防治动脉硬化、延缓皮肤老化等功效。由于上述功效，水飞蓟素广泛用于医药、保健品、化妆品、食品等产品的生产中。水飞蓟素难溶于水，易溶于丙酮、乙酸乙脂、甲醇乙醇，微溶于氯仿。水飞蓟素目前剂型有口服制剂：水飞蓟素片、益肝灵片、水飞蓟宾卵磷脂复合物硬胶囊。商品名有：利肝隆、利加隆、益肝灵等。注射剂主要是做成水飞蓟宾衍生物，如：葡-N·甲胺盐。目前用于水飞蓟素的助悬剂多用PVP，但其效果仍然不尽理想。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种水飞蓟素混悬液助悬剂。本专利技术的另一目的在于提供MrpC蛋白在助悬水飞蓟素混悬液中的应用。本专利技术的再一目的在于提供一种水飞蓟素混悬液组合物。本专利技术的技术方案如下：一种水飞蓟素混悬液助悬剂，其有效成分包括MrpC蛋白，该MrpC蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO01所示。在本专利技术的一个优选实施方案中，其有效成分为所述MrpC蛋白。进一步优选的，所述MrpC蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO02所示。本专利技术的另一技术方案如下：MrpC蛋白在助悬水飞蓟素混悬液中的应用，该MrpC蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO01所示。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述MrpC蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO02所示。本专利技术的再一技术方案如下：一种水飞蓟素混悬液组合物，包括水飞蓟素、SDS、MrpC蛋白和蒸馏水，其中MrpC蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO01所示。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述MrpC蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO02所示。本专利技术的有益效果是：本专利技术中的MrpC蛋白作为助悬剂可得到质量稳定的水飞蓟素混悬液，于观察2h内，沉降体积比不低于0.9，具有良好的助悬性能。附图说明图1为本专利技术实施例1中更换新鲜培养基前后藻细胞悬浮状态的照片，其中左侧为对照组，右侧为更换新鲜培养基后静置培养6天后的状况。图2为本专利技术实施例1中MrpC蛋白分离纯化和MALDI-TOF-MS鉴定图。图3为本专利技术实施例1中MrpC抑制细胞下沉的临界浓度检测图，其中，1.0μg/mL；2.5μg/mL；3.15μg/mL；4.30μg/mL；5.45μg/mL；6.60μg/mL；7.75μg/mL；8.90μg/mL；9.115μg/mL；10.155μg/mL；11.300μg/mL。图4为本专利技术实施例1中不同生长时期培养基中的MrpC含量检测图。图5为本专利技术实施例1中MrpC远紫外圆二色光谱图。图6为本专利技术实施例1中MrpC冷冻电镜观察图。图7为本专利技术实施例1中MrpC的TEM观察图。图8为本专利技术实施例1中MrpC对不同细胞悬浮的影响，其中1：8000g离心后静置；2：重悬于新BG-11；3：重悬于60μg/mLMrpCBG-11；A.Anabaenasp.PCC7120；B.M.aeruginosaPPC7820；C.Synechocystissp.PCC6803；D.Chloresp.；E.NostocflagelliformeFACHB838；F.GloeobacterviolaceusPCC7421；G.Synechococcussp.PCC7942；H.Ecoli.BL21(DE3)；I.巴斯德毕赤酵母GS115.。图9为本专利技术实施例1中MrpC对不同种类粉末的悬浮作用，其中，A.淀粉；B.琼脂糖；C.鱼粉；D.螺旋藻粉(Spirulinaplatensis)。图10为本专利技术实施例2中提取的分泌蛋白的SDS-PAGE分析和anti-MrpC-IgG特异性检测图，其中，M：marker；1：提取的M.aeruginosaPCC7806分泌的蛋白组分；2：对去藻长时间培养物的westernblotting检测。图11为本专利技术实施例2中M.aeruginosaPCC7806分泌蛋白MALDI-TOF-MS肽指纹图谱。具体实施方式以下通过具体实施方式结合附图对本专利技术的技术方案进行进一步的说明和描述。实施例1MrpC蛋白的助悬功能的发现和鉴定一、悬浮蛋白的发现(长时间的培养基和新鲜培养基的细胞培养状况对照如图1所示)藻细胞悬浮的现象和其培养基中的分泌物有关，接下来鉴定出来悬浮因子来自于该藻分泌的一种蛋白质MrpC。二、MrpC的分离鉴定·藻细胞中分泌蛋白的分离和质谱鉴定，如图2所示·MrpC抑制细胞下沉的临界浓度，结果如图3所示，显示MrpC蛋白浓度大于30ug/mL即可抑制铜绿微囊藻细胞下沉·不同生长时期培养基中的MrpC含量检测，结果如图4所示，显示实验室培养60天左右MrpC便达到了对细胞沉降产生影响的浓度结论：MrpC是藻细胞悬浮的决定因子三、悬浮蛋白MrpC的理化特性1.MrpC的基因和氨基酸序列M.aeruginosaPCC7806的基因组已于2007年由法国巴斯德研究所完成(Frangeul，Quillardeteta1.2008)。通过genbank获取mrpC基因序列，基因全长465bp，起始密码子为ATG(下划线)，终止子是TAG(下划线)。蛋白质的一级结构就是蛋白质多肽链中氨基酸残基的排列顺序，由基因上遗传密码的排列顺序所决定的。利用DNAman分析获得MrpC氨基酸序列全长154aa，与文献预测序列一致。MrpC为胞外分泌蛋白，N末端包含33aa信号肽(下划线)，第34位aa谷氨酰胺被修饰为焦谷氨酸(Zilliges，Kehretal.2008)。mrpC基因序列(SEQIDNO02)：MrpC蛋白的氨基酸序列(SEQIDNO01)：2.MrpC蛋白理化性质MrpC纯品呈白色，易溶于水和PBS，不溶于乙醇、甲醇、丙酮等有机溶剂。重金属盐：硝酸银，碘化镉，硝酸铅，硫酸锰，硝酸钴等都会使MrpC变性。利用NDJ-1旋转粘度计，30r/min转速下室温测定1mg/mLMrpC的表观粘度为6mPa.S。粘度更小时，由于仪器的限制无法测定。当MrpC浓度达到30ug/mL时，就可保持多种藻细胞悬浮，推测此时的溶液的粘度几乎接近于水。实验室提取的MrpC经SDS-PAGE测定分子量为14Kda。ZilligesY等利用分子筛(体积排斥色谱)测得自然状态下MrpC分子量为120kDa-170kDa。多数纤维蛋白质由于其分子形状的高度不对称性，无法使用超速离心。对MrpC进行超速离心，当浓度为1.2mg/mL时发现MrpC无法被离心下来，将其稀释至60ug/mL时测得沉降系数为168S，而对1.2mg/mLMrpC超声(f＝20kHz，I＝10±5％W)60s时测得沉降系数为68S，初步推测自然状态下MrpC为高聚物。3.圆二色光谱(CD)测定MrpC二级结构蛋白质中氨基酸的碳原子是不对称碳原子，具有光学活性，当平面圆偏振光通过这些光活性的生色基团时，光活性中心对平面圆偏振光中的左、右圆偏振光的吸收不相同，产生吸收差值，由于这种吸收差的存在，造成偏振光矢量的振幅差，圆偏振光变成了椭圆偏振光，这就是蛋白质的圆二色性。圆二色光谱是研究稀溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种水飞蓟素混悬液助悬剂，其特征在于：其有效成分包括MrpC蛋白，该MrpC蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO 01所示。

【技术特征摘要】
1.一种水飞蓟素混悬液助悬剂，其特征在于：其有效成分包括MrpC蛋白，该MrpC蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO01所示。2.如权利要求1所述的一种水飞蓟素混悬液助悬剂，其特征在于：其有效成分为所述MrpC蛋白。3.如权利要求1或2所述的一种水飞蓟素混悬液助悬剂，其特征在于：所述MrpC蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO02所示。4.MrpC蛋白在助悬水飞蓟素混悬液中的应用，该MrpC...

【专利技术属性】
技术研发人员：章军，王秀敏，贺雪峰，刘承东，马薇薇，
申请(专利权)人：厦门大学，厦门科厦技术有限公司，
类型：发明
国别省市：福建,35