艾纳香药材中有效成分含量的检测方法技术

本方案公开了中药材药效成分的检测技术领域的一种艾纳香药材中有效成分含量的检测方法，所述方法包括：1)分别取芦丁(Rutin)、金丝桃苷(Hyperoside)等18种有效成分对照品溶于甲醇水溶液中，制成对照品溶液；2)取艾纳香药材供试品以甲醇水溶液提取后，过滤，制成供试品溶液；3)分别取等体积的对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪中，然后测定对照品溶液和供试品溶液的峰面积并进行计算，即得艾纳香药材供试品中芦丁、金丝桃苷等18种有效成分的含量。本发明专利技术为较全面的控制艾纳香药材及其制剂的质量提供了一种快速、准确的方法。

【技术实现步骤摘要】
艾纳香药材中有效成分含量的检测方法
本专利技术涉及中药材药效成分的检测
，具体涉及一种艾纳香药材中有效成分含量的检测方法。
技术介绍
艾纳香为菊科植物艾纳香Blumeabalsamifera(L.)DC.干燥地上部分。中药又称大风艾。主产于广西、贵州。据《广西中药材标准》(1990年版)记载，艾纳香(大风艾)性“辛、苦、温”，具“温中活血、调经、祛风除湿”之功效。现代药效学研究表明，艾纳香中的黄酮类化合物具有抗氧化、抗癌、抗辐射和急性肝损伤保护等多种作用[段震,周英.艾纳香化学成分及药理研究进展[J].中华现代临床医学杂志,2006,4(21):1941-1945.]。目前，有很多关于艾纳香有效成分含量测定的文献报道如：[黄永林,赵志国,文永新.不同部位艾纳香中总黄酮的含量测定[J].广西植物,2006,26(4):453-455.]、[姜建萍,杜秀,邱琴,蓝仁青,李生茂,甄汉深.不同产地滇桂艾纳香中总黄酮的含量测定[J].广西中医学院学报,2009,12(4):44-46.]、[谭道鹏,严启新,康晖等.一种以天然艾粉为原料制备花椒油素的方法-ZL201210184682.7]、[雷婷,林翠梧,陈海燕,等.反相高效液相色谱法测定滇桂艾纳香中绿原酸的含量[J].时珍国医国药,2008,19(9):2073-2074.]及[黄园,廖厚知,梁月钊,等.HPLC法测定滇桂艾纳香片中原儿茶酸的含量[J].广州化工,2012,40(19):99-100.]等。也有多篇关于艾纳香有效成分指纹图谱的文献报道，如：[杨留波,杨烨,王祥培,等.艾纳香药材UPLC指纹图谱鉴别[J].时珍国医国药,2016,27(9):2174-2176.]、[夏稷子,赵智,安军,等.不同产地艾纳香药材的GC指纹图谱研究[J].中国药事,2011,25(12):1191-1194.]、[冯华,杨烨,王祥培,等.艾纳香及其伪品假东风草的HPLC指纹图谱研究[J].中国药房,2017,28(9):1257-1261.]、[孙绪,付思红,熊丹丹,等.艾纳香及其提取物的GC-MS指纹图谱和相关性研究[J].中草药,2017,48(4):693-699.]等。现有的关于艾纳香药材中有效成分的含量测定方法主要分为三类：1)以紫外分光光度法测定总黄酮，紫外测定总黄酮受吸收波长的影响及其它类别成分的干扰具有较大的误差；2)以单一成分定量分析，单一成分的定量分析不能较全面反映药材质量；3)以指纹图谱定性分析，指纹图谱只能定性评价药材质量。因此，现有艾纳香药材的质量分析方法均有一定的局限性。为了更好地开发利用艾纳香药材、控制艾纳香药材质量，本专利技术对其质量控制进行了深入研究。
技术实现思路
本专利技术意在提供一种艾纳香药材中有效成分含量的检测方法，以解决现有检测方法存在对药效成分含量检测分析不全面的技术问题。本方案中的艾纳香药材中有效成分含量的检测方法，包括以下步骤：步骤1)、18种对照品溶液的制备：分别取芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、3,3',5,7-四羟基-4'-甲氧基二氢黄酮、3',5,5',7-四羟基二氢黄酮、槲皮素、3,3',4',5-四羟基-7-甲氧基二氢黄酮、猫眼草酚丙、香叶木素、柽柳黄素、3,5,7-三羟基-3',4'-二甲氧基黄酮、3,3',5-三羟基-4',7-二甲氧基二氢黄酮、艾纳香素、鼠李素、3',4',5-三羟基-3,7-二甲氧基黄酮、花椒油素、商路黄素、3,5-二羟基-3',4',7-三甲氧基黄酮对照品溶于甲醇水溶液中，制成对应的18种对照品溶液；步骤2)、取艾纳香药材供试品以甲醇水溶液提取后，过滤，制成供试品溶液；步骤3)、分别取对应的18种等体积的对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪中，然后测定每一个对照品溶液和供试品溶液的峰面积并进行计算，即得艾纳香供试品药材中以上18种有效成分的含量；其中，所述高效液相色谱仪的固定相为碳十八烷基键合硅胶，所述碳十八烷基键合硅胶的粒径为≤5μm；流动相为乙腈-酸水溶液，所述乙腈-酸水溶液为：以体积百分比计，20％～65％乙腈的梯度溶液。现有的高效液相分析方法不能够完全分离艾纳香药材中的有效成分，为此本专利技术首先通过对艾纳香药材有效成分高效液相分析色谱条件的摸索、优化，得到基本完全分离艾纳香有效成分的色谱条件，并对高效液相色谱中18中有效成分进行了对照品对照归属，明确出其具体有效成分；进一步，通过对提取条件研究，优化出能够同时对该18种有效成分基本提取完全的提取条件；并通过加样回收率、线性范围、精密度、重复性、稳定性等对该含量测定方法进行了方法学验证，结果表明本专利技术所建立的方法，即同时测定艾纳香药材中18种有效成分含量的方法，可以较为全面的对艾纳香药材中的有效成分进行分析。进一步，步骤3)中所述碳十八烷基键合硅胶的粒径为5μm或4μm或3.5μm。粒径小的碳十八烷基键合硅胶有助于成分之间的分离，粒径越小分离度约好，但5μm粒径已经可以满足各色谱峰的分离要求。进一步，步骤3)所述流动相中酸水为磷酸、乙酸、甲酸、三氟乙酸中的一种，酸水的体积浓度为0.01％～0.5％。该条件下能够促进待测有效成分色谱峰分离，呈现比较好的峰形，避免拖尾。进一步，步骤3)所述流动相中酸水为体积浓度0.2％的乙酸。该条件下能够使待测有效成分色谱峰完全分离，并且峰形好，没有拖尾。进一步，步骤3)中所述流动相为：以体积百分比计，如下表所示：在该梯度条件下，能够使待测定的18个有效成分得到完全分离，是分析结果更加可靠。进一步，步骤2)中所述的甲醇水溶液为以体积浓度计60％～80％的甲醇水溶液。进一步，艾纳香药材中有效成分含量的检测方法，包括以下步骤：步骤1)、18种对照品溶液的制备：分别取芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、3,3',5,7-四羟基-4'-甲氧基二氢黄酮、3',5,5',7-四羟基二氢黄酮、槲皮素、3,3',4',5-四羟基-7-甲氧基二氢黄酮、猫眼草酚丙、香叶木素、柽柳黄素、3,5,7-三羟基-3',4'-二甲氧基黄酮、3,3',5-三羟基-4',7-二甲氧基二氢黄酮、艾纳香素、鼠李素、3',4',5-三羟基-3,7-二甲氧基黄酮、花椒油素、商路黄素、3,5-二羟基-3',4',7-三甲氧基黄酮对照品溶于体积浓度为80％的甲醇水溶液中，制成0.01mg/ml～0.50mg/ml的对照品溶液；步骤2)、供试品溶液的制备：精密称取艾纳香药材粉末0.6g，置50ml圆底烧瓶中，精密加入25ml80％甲醇水溶液，称重，加热回流30分钟，放冷，补足重量，摇匀，滤过，即得供试品溶液；步骤3)、分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定对照品溶液及供试品溶液的峰面积，按外标法计算样品中以上18种有效成分的含量；其中，固定相为250×4.6mm，5μm的碳十八烷基键合硅胶柱，检测波长分别为：254nm、289nm，理论塔板数按3,3',5,7-四羟基-4'-甲氧基二氢黄酮峰计算不低于3000，流动相为乙腈-酸水溶液，所述乙腈-酸水溶液为：以体积百分比计，20％～65％乙腈的梯度溶液。附图说明图1是艾纳香药材及18种对照品HPLC色谱图。图中A:289nm波长下对照品色谱图；B:254nm波长下对照品色谱图；本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.艾纳香药材中有效成分含量的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1)、18种对照品溶液的制备：分别取芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、3,3',5,7‑四羟基‑4'‑甲氧基二氢黄酮、3',5,5',7‑四羟基二氢黄酮、槲皮素、3,3',4',5‑四羟基‑7‑甲氧基二氢黄酮、猫眼草酚丙、香叶木素、柽柳黄素、3,5,7‑三羟基‑3',4'‑二甲氧基黄酮、3,3',5‑三羟基‑4',7‑二甲氧基二氢黄酮、艾纳香素、鼠李素、3',4',5‑三羟基‑3,7‑二甲氧基黄酮、花椒油素、商路黄素、3,5‑二羟基‑3',4',7‑三甲氧基黄酮对照品溶于甲醇水溶液中，制成对应的18种对照品溶液；步骤2)、取艾纳香药材供试品以甲醇水溶液提取后，过滤，制成供试品溶液；步骤3)、分别取对应的18种等体积的对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪中，然后测定每一个对照品溶液和供试品溶液的峰面积并进行计算，即得艾纳香供试品药材中以上18种有效成分的含量；其中，所述高效液相色谱仪的固定相为碳十八烷基键合硅胶，所述碳十八烷基键合硅胶的粒径为≤5μm；流动相为乙腈‑酸水溶液，所述乙腈‑酸水溶液为：以体积百分比计，20％～65％乙腈的梯度溶液。...

【技术特征摘要】
1.艾纳香药材中有效成分含量的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1)、18种对照品溶液的制备：分别取芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、3,3',5,7-四羟基-4'-甲氧基二氢黄酮、3',5,5',7-四羟基二氢黄酮、槲皮素、3,3',4',5-四羟基-7-甲氧基二氢黄酮、猫眼草酚丙、香叶木素、柽柳黄素、3,5,7-三羟基-3',4'-二甲氧基黄酮、3,3',5-三羟基-4',7-二甲氧基二氢黄酮、艾纳香素、鼠李素、3',4',5-三羟基-3,7-二甲氧基黄酮、花椒油素、商路黄素、3,5-二羟基-3',4',7-三甲氧基黄酮对照品溶于甲醇水溶液中，制成对应的18种对照品溶液；步骤2)、取艾纳香药材供试品以甲醇水溶液提取后，过滤，制成供试品溶液；步骤3)、分别取对应的18种等体积的对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪中，然后测定每一个对照品溶液和供试品溶液的峰面积并进行计算，即得艾纳香供试品药材中以上18种有效成分的含量；其中，所述高效液相色谱仪的固定相为碳十八烷基键合硅胶，所述碳十八烷基键合硅胶的粒径为≤5μm；流动相为乙腈-酸水溶液，所述乙腈-酸水溶液为：以体积百分比计，20％～65％乙腈的梯度溶液。2.根据权利要求1所述的艾纳香药材中有效成分含量的检测方法，其特征在于：步骤3)中所述碳十八烷基键合硅胶的粒径为5μm或4μm或3.5μm。3.根据权利要求2所述的艾纳香药材中有效成分含量的检测方法，其特征在于：步骤3)所述流动相中酸水为磷酸、乙酸、甲酸、三氟乙酸中的一种，酸水的体积浓度为0.01％～0.5％。4.根据权利要求2所述的艾纳香药材中有效成分含量的检测方法，其特征在于：步骤3)所述流动相中酸水为体积浓度0.2％的乙酸。5.根据权利要求1～4中任一项所述的艾纳...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭道鹏，何芋岐，秦琳，杜艺玫，鲁艳柳，
申请(专利权)人：遵义医学院，
类型：发明
国别省市：贵州,52