一种基于HPLC多波长叠加的党参多组分含量测定方法技术

本方案公开了中药检测技术领域中的一种基于HPLC多波长叠加的党参多组分含量测定方法，以党参炔苷、丁香苷、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ和白术内脂Ⅲ为对照品，以乙腈为流动相A，水为流动相B，梯度洗脱程序为：0～3min，乙腈与水的体积比为96.5:3.5；20min，乙腈与水的体积比为86:14；35min，乙腈与水的体积比为77:23；60min，乙腈与水的体积比为28:72；76min，乙腈与水的体积比为5:95的高效液相色谱法。本方案的测定方法能一次性测定多种成分的含量，不仅可以节约时间和成本，还可以使得同一系统条件下的测试结果更稳定、可靠。

A method for determination of multicomponent content of Codonopsis pilosula based on multi-wavelength superposition of HPLC

This scheme discloses a multi-component content determination method of Codonopsis pilosula based on multi-wavelength superposition of high performance liquid chromatography in the field of traditional Chinese medicine detection technology. With Codonopsis pilosula alkyne glycoside, eugenoside, atractylolide I, atractylolide II and atractylolide III as control substances, acetonitrile as mobile phase A, water as mobile phase B, gradient elution procedure is 0-3 minutes, volume ratio of acetonitrile to water is 96.5:3.5, 20 minutes, acetonitrile and atractylolide as mobile phase B. The volume ratio of acetonitrile to water was 86:14; 35 min; the volume ratio of acetonitrile to water was 77:23; 60 min; the volume ratio of acetonitrile to water was 28:72; 76 min; the volume ratio of acetonitrile to water was 5:95 by high performance liquid chromatography. This method can determine the content of many components at one time. It can not only save time and cost, but also make the test results more stable and reliable under the same system conditions.

【技术实现步骤摘要】
一种基于HPLC多波长叠加的党参多组分含量测定方法
本专利技术属于中药检测
，具体涉及一种基于HPLC多波长叠加的党参多组分含量测定方法。
技术介绍
党参为桔梗科多年生草本植物党参、素花党参、川党参及其同属多种植物的根。党参为中国常用的传统补益药，古代以山西上党地区出产的党参为上品，具有补中益气，健脾益肺之功效。现代研究，党参含多种糖类、酚类、甾醇、挥发油、黄芩素葡萄糖甙、皂甙及微量生物碱，具有增强免疫力、扩张血管、降压、改善微循环、增强造血功能等作用。现有技术中，对于党参药材中党参炔苷、丁香苷、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ和白术内脂Ⅲ等成分含量的测定，最多只能同时测定两种成分的含量。而需要测定党参的多种成分时，需要多次测定才能得到党参中不同成分的含量，这样不仅耗费时间，而且需要耗费更多的党参及各种试剂。然而目前尚未有同时测定丹参多种组分的含量的相关报道。
技术实现思路
本专利技术意在提供一种利用HPLC多波长叠加来测定党参多组分含量的方法，能一次性测定多种成分的含量，不仅可以节约时间和成本，还可以使得同一系统条件下的测试结果更稳定、可靠。为了达到上述目的，本专利技术提供如下方案：一种基于HPLC多波长叠加的党参多组分含量测定方法，包括的步骤为：步骤一、设定色谱条件：流速为0.8mL/min，色谱柱的柱温为30℃，检测波长为220nm、267nm、276nm，以乙腈为流动相A，水为流动相B，梯度洗脱程序为：0～3min，乙腈与水的体积比为96.5:3.5；3～20min，乙腈与水的体积比为96.5:3.5～86:14；20～35min，乙腈与水的体积比为86:14～77:23；35～60min，乙腈与水的体积比为77:23～28:72；60～76min，乙腈与水的体积比为28:72～5:95；76～80min，乙腈与水的体积比为5:95；步骤二、对照品溶液的制备：取标准品党参炔苷、丁香苷、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ和白术内脂Ⅲ，分别加30％甲醇溶解，制成党参炔苷对照品溶液、丁香苷对照品溶液、白术内酯Ⅰ对照品溶液、白术内酯Ⅱ对照品溶液和白术内脂Ⅲ对照品溶液；步骤三、样品溶液的制备：取党参粉末1g，置于广口瓶中，加入30％甲醇30ml，称定重量，进行超声提取后冷藏，再次称重，用30％甲醇补足减失的重量，0.45μm微孔滤膜过滤得样品溶液；步骤四、高效液相色谱法测定：分别吸取对照品溶液与样品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，用220nm、267nm、和276nm三个检测波长叠加测定，记录色谱图，通过计算得到党参炔苷、丁香苷、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ和白术内脂Ⅲ的含量。优选的，步骤一中所述色谱条件中色谱柱选用InertsilODS～3。InertsilODS-3的硅胶颗粒有着近乎完美的球形表面和几乎一致的颗粒大小，能够避免因微小粒子的存在而引起柱压上升的问题，从而使检测结果更加准确。优选的，步骤二中所述党参炔苷对照品溶液的浓度为886μg/mL，所述丁香苷对照品溶液的浓度为130μg/mL，所述白术内酯Ⅰ对照品溶液的浓度为89.6μg/mL，所述白术内酯Ⅱ对照品溶液的浓度为50.5μg/mL，所述白术内脂Ⅲ对照品溶液的浓度为614μg/mL。采用本方案的对照品溶液浓度的目的是：高效液相色谱法测定时峰面积小，峰柱效提高，对称性好，积分准确，精密度高。优选的，步骤三中所所述超声提取时间为28～32min，冷藏时间为4.5～5.5min。在本方案的提取时间内党参的化学成分就能够基本溶解到溶剂中，而提取时间过短会导致提取不完全，提取时间太长会影响工作效率。本方案的有益效果为：本方案中利用乙腈-水作为流动相，梯度洗脱程序为：0～3min，乙腈与水的体积比为96.5:3.5；3～20min，乙腈与水的体积比为96.5:3.5～86:14；20～35min，乙腈与水的体积比为86:14～77:23；35～60min，乙腈与水的体积比为77:23～28:72；60～76min，乙腈与水的体积比为28:72～5:95；76～80min，乙腈与水的体积比为5:95，该流动相体系梯度条件下能够很好地对党参中五种组分进行分离，再辅以222nm、267nm和276nm三种波长叠加测定，通过这三种波长测定色谱图中成分和峰面积之比，再根据重叠峰的计算公式，即可算出各成分的含量。因此本方案能够同时测定出党参中五种成分(党参炔苷、丁香苷、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ和白术内脂Ⅲ)的含量，相对于现有技术需要多次测定才能检测出党参中五种成分的含量来说，不仅节约了时间和成本，而且处于同一测试条件下，避免了多次测试时空气环境条件、色谱条件可能发生的轻微变化导致测试结果存在差异，所以在同一条件下使得测试结果更稳定、可靠。附图说明图1为使用本方案测定的党参样品HPLC色谱图；图2为对照品的HPLC色谱图；图3为现有技术中不同检测波长条件下党参5种成分含量测定的HPLC色谱图。具体实施方式下面通过具体实施方式进一步详细的说明：实施例:一种基于HPLC多波长叠加的党参多组分含量测定方法，按照以下步骤测定：步骤一、设定色谱条件：采用仪器为Agilent1260高效液相色谱仪，KQ～500DV型数控超声波清洗器，RATANKVN1超纯水仪；色谱柱选用InertsilODS～3，规格为4.6mm×250mm，5μm；以乙腈(色谱级)为流动相A，水为流动相B，按表1的程序进行梯度洗脱，流速为0.8mL/min，柱温为30℃，检测波长为220nm、267nm、276nm；表1：时间/min流动相A/％流动相B/％096.53.5396.53.52086143577236028727659580595步骤二、对照品溶液的制备：分别精密称取标准品党参炔苷4.43mg、丁香苷1.3mg、白术内酯Ⅰ2.24mg、白术内酯Ⅱ1.01mg和白术内脂Ⅲ3.07mg，加30％甲醇溶解，制成886μg/mL的党参炔苷对照品溶液、130μg/mL的丁香苷对照品溶液、89.6μg/mL的白术内酯Ⅰ对照品溶液、50.5μg/mL的白术内酯Ⅱ对照品溶液、614μg/mL的白术内脂Ⅲ对照品溶液作为储备液；步骤三、样品溶液的制备：取党参粉末1.0g，置于50mL广口瓶中，加入30％甲醇30mL，称定重量，超声提取30min，冷藏5min，再次称重，用30％甲醇补足减失的重量，0.45μm微孔滤膜过滤得样品溶液；步骤四、高效液相色谱法测定：分别吸取对照品溶液与样品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，用220nm、267nm、276nm这三个检测波长叠加测定，记录色谱图，色谱图如图2、图3所示；通过高效液相色谱法，及三种波长测定色谱图中成分和峰面积之比，再根据重叠峰的计算公式:(AW1(X)+AW1(Y)+AW1(Z)＝AW1(X+Y+Z)；AW1(X)/R1(X)+AW1(Y)/R1(Y)+AW1(Z)/R1(Z)＝AW2(X+Y+Z)；AW1(X)/R2(X)+AW1(Y)/R2(Y)+AW1(Z)/R2(Z)＝AW3(X+Y+Z))，以及浓度与峰面积的计算公式(A＝k*C),即可算出党参炔苷、丁香苷、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ和白术内脂Ⅲ的含量。本专利技术可以同时对党参中苷类和三萜类两类共5种成分进行测定，为党参生本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于HPLC多波长叠加的党参多组分含量测定方法，其特征在于：包括的步骤为：步骤一、设定色谱条件：流速为0.8mL/min，色谱柱的柱温为30℃，检测波长为220nm、267nm、276nm，以乙腈为流动相A，水为流动相B，梯度洗脱程序为：0～3min，乙腈与水的体积比为96.5:3.5；3～20min，乙腈与水的体积比为96.5:3.5～86:14；20～35min，乙腈与水的体积比为86:14～77:23；35～60min，乙腈与水的体积比为77:23～28:72；60～76min，乙腈与水的体积比为28:72～5:95；76～80min，乙腈与水的体积比为5:95；步骤二、对照品溶液的制备：取标准品党参炔苷、丁香苷、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ和白术内脂Ⅲ，分别加30％甲醇溶解，制成党参炔苷对照品溶液、丁香苷对照品溶液、白术内酯Ⅰ对照品溶液、白术内酯Ⅱ对照品溶液和白术内脂Ⅲ对照品溶液；步骤三、样品溶液的制备：取党参粉末1g，置于广口瓶中，加入30％甲醇30ml，称定重量，进行超声提取后冷藏，再次称重，用30％甲醇补足减失的重量，0.45μm微孔滤膜过滤得样品溶液；步骤四、高效液相色谱法测定：分别吸取对照品溶液与样品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，用220nm、267nm、和276nm三个检测波长叠加测定，记录色谱图，通过计算得到党参炔苷、丁香苷、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ和白术内脂Ⅲ的含量。...

【技术特征摘要】
1.一种基于HPLC多波长叠加的党参多组分含量测定方法，其特征在于：包括的步骤为：步骤一、设定色谱条件：流速为0.8mL/min，色谱柱的柱温为30℃，检测波长为220nm、267nm、276nm，以乙腈为流动相A，水为流动相B，梯度洗脱程序为：0～3min，乙腈与水的体积比为96.5:3.5；3～20min，乙腈与水的体积比为96.5:3.5～86:14；20～35min，乙腈与水的体积比为86:14～77:23；35～60min，乙腈与水的体积比为77:23～28:72；60～76min，乙腈与水的体积比为28:72～5:95；76～80min，乙腈与水的体积比为5:95；步骤二、对照品溶液的制备：取标准品党参炔苷、丁香苷、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ和白术内脂Ⅲ，分别加30％甲醇溶解，制成党参炔苷对照品溶液、丁香苷对照品溶液、白术内酯Ⅰ对照品溶液、白术内酯Ⅱ对照品溶液和白术内脂Ⅲ对照品溶液；步骤三、样品溶液的制备：取党参粉末1g，置于广口瓶中，加入30％甲醇30ml，称定重量，进行超声提取后冷藏，再次称重，用30％甲醇补足...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴发明，刘付松，王道清，刘莎，陈翠莎，
申请(专利权)人：遵义医学院，
类型：发明
国别省市：贵州,52