一种乳酸杆菌培养基及其制备方法和乳酸杆菌的培养方法技术

技术编号:21267402 阅读:65 留言:0更新日期:2019-06-06 04:25
本发明专利技术属于微生物发酵技术领域,具体涉及一种动物饲料生产用乳酸杆菌发酵培养基及制备方法和乳酸杆菌培养方法。本发明专利技术乳酸菌培养基以大豆提取液和骨粉作为氮源,糖蜜和葡萄糖作为氮源,辅以乙酸钠、柠檬酸二铵、硫酸镁、硫酸锰、吐温‑80、抗坏血酸等营养因子,同时在培养过程中采用调节pH值法减少酸对乳酸杆菌生长过程中的抑制作用,以达到即可降低成本,又可提高产能的效果,同时对水产致病菌嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)还有一定的抑菌作用。

A Lactobacillus medium and its preparation method and the culture method of Lactobacillus

The invention belongs to the technical field of microbial fermentation, in particular to a lactobacillus fermentation medium for animal feed production, a preparation method and a Lactobacillus culture method. The lactic acid bacteria culture medium of the invention uses soybean extract and bone powder as nitrogen source, molasses and glucose as nitrogen source, supplemented by sodium acetate, ammonium citrate, magnesium sulfate, manganese sulfate, tween 80, ascorbic acid and other nutrient factors, and adopts the method of adjusting pH value to reduce the inhibitory effect of acid on the growth of Lactobacillus in the process of culture, so as to reduce the cost and improve the quality of lactobacillus. At the same time, it also has certain bacteriostatic effect on Aquatic Pathogenic Bacteria Aeromonas hydrophila.

【技术实现步骤摘要】
一种乳酸杆菌培养基及其制备方法和乳酸杆菌的培养方法
本专利技术属于微生物发酵
,具体涉及一种乳酸杆菌培养基及其制备方法和乳酸杆菌的培养方法。
技术介绍
乳酸菌是目前世界公认的益生菌,而乳酸杆菌是乳酸菌中最大的一个属,应用也是最为广泛,普遍应用于食品保健、产品发酵以及动物饲料中。乳酸杆菌通过发酵碳水化合物、蛋白质、氨基酸、脂类等产生多种代谢产物,其中大部分产物如乳酸、挥发性酸、过氧化氢、双乙酰及细菌素均具有一定的抗菌作用,还可以增强机体的抵抗力;乳酸杆菌在动物的肠道内也大量存在,起到调节微生物区系平衡的作用,同时对肠道的生长发育也有一定的贡献作用。MRS培养基是一种适用于乳酸菌富集的培养基,特别适合乳酸杆菌的生长。MRS培养基不仅是菌种生长迅速而且产量较高,一般菌浓可达到几亿级别,但是MRS作为实验室基础研究时最为好用,如果进行工业化大规模生产就会使成本升高造成不必要的浪费,且高成本势必会导致相关产品高售价,所以不合适大规模生产和商业化推广。目前已有许多科研人员使用中药、水果或者蔬菜等作为培养基来扩大乳酸菌的生长,但是这些材料原本为人类食用物资,如果大规模生产可能会产生使用竞争,从而导致资源的浪费或短缺,或是物价上涨,影响社会秩序。足见,寻找替代产品已变得很重要。
技术实现思路
鉴于此,有必要针对上述问题提供一种饲用乳酸杆菌液体发酵培养基及培养方法,配方中使用大豆提取液和骨粉作为氮源,糖蜜和葡萄糖作为碳源,同时在培养过程中采用调节pH值法减少酸对生长的抑制作用,以达到即可降低成本,又可提高产能的效果,同时还有一定的抑菌作用。本专利技术是通过以下技术方案实现的:一种乳酸杆菌发酵培养基,其氮源包括:大豆提取液、骨粉;碳源包括:糖蜜、葡萄糖。进一步的,所述乳酸杆菌发酵培养基,每1升包括组分:大豆提取液25-40g、骨粉20-30g、糖蜜10-15g、葡萄糖10-15g。进一步的,每升所述培养基中还包括抗坏血酸0.5-3g。进一步的,所述乳酸杆菌发酵培养基,每1升包括组分:大豆提取液25-40g、骨粉20-30g、糖蜜10-15g、葡萄糖10-15g、抗坏血酸0.5-3g、乙酸钠8-12g、柠檬酸二铵2-3g、MgSO4·7H2O0.2-0.5g、MnSO4·H2O0.2-0.5g、吐温-800.1-1ml。进一步的,所述乳酸杆菌发酵培养基,每1升包括组分:大豆提取液30g、骨粉25g、糖蜜10g、葡萄糖12g、抗坏血酸2g、乙酸钠8g、柠檬酸二铵3g、MgSO4·7H2O0.5g、MnSO4·H2O0.2g、吐温-801ml。进一步的,所述抗坏血酸为L-抗坏血酸。进一步的,所述发酵培养基中的大豆提取液的质量以豆粕计,即25-40g大豆提取液为市售豆粕25-40g加入蒸馏水中煮沸打浆过滤所得的所有滤液;蒸馏水用量为:所配培养基总体积的3/5。进一步的,所述培养基以NaOH调节至pH值6.0-6.5。进一步的,所述的乳酸菌发酵培养基中,制备大豆提取液所用市售豆粕的蛋白含量大于38%,骨粉蛋白含量不低于20%。所述的乳酸杆菌发酵培养基的制备方法,包括如下制备步骤:1)根据总体积,计算出个组分需要量;2)根据1)中所得数据,取豆粕制备大豆提取液;3)根据1)中所得数据,取骨粉、糖蜜、葡萄糖、乙酸钠、柠檬酸二铵、MgSO4·7H2O、MnSO4·H2O、吐温-80,加入到2)所得的滤液中,混匀,灭菌;4)根据1)中所得数据,称取抗坏血酸,溶解于适量蒸馏水水中,过滤除菌;5)在溶液3)中加入溶液4),混匀;6)用蒸馏水将混合液5)定容至总体积,调节pH值,即得。所述的乳酸杆菌发酵培养基的制备方法,其制备步骤如下:1)根据总体积,计算出个组分需要量;2)制备大豆提取液:按步骤1)所得数据取豆粕;取蒸馏水:每克豆粕小于20ml;将所述豆粕加入蒸馏水中煮沸打浆,四层纱布过滤,滤液待用,该滤液即为大豆提取液;3)取骨粉、糖蜜、葡萄糖、乙酸钠、柠檬酸二铵、MgSO4·7H2O、MnSO4·H2O、吐温-80,加入到2)所得的滤液中,混匀,121℃灭菌15分钟或115℃灭菌20min;4)称取抗坏血酸,溶于蒸馏水水中,用一次性无菌0.22μm滤膜过滤除菌;5)将灭菌后的溶液3)冷却至25-30℃,加入溶液4),混匀;6)用蒸馏水将混合液5)定容至总体积,以NaOH调节至pH值6.0-6.5,即得。进一步的,所述的乳酸杆菌发酵方法主要包括如下步骤:1)将保存于-80℃的乳酸杆菌菌种(分离与水产动物肠道)在MRS琼脂平板上三区划线活化两次,挑取单菌落接种于装有MRS肉汤的EP管中,30℃静置培养16-18h,以1-3%接种量转接于MRS液体培养基,30℃静置培养12-16h即为种子液;2)以3%~5%的接种量将步骤1)中所得的种子液接种于上述发酵培养基中,30℃静置;3)7-10h后测定pH值,用NaOH调节pH值至6.0以上,再添加2)质量5%-10%的浓度为20%的葡萄糖溶液,混匀,继续发酵;4)重复步骤3),静置培养至OD595吸光值达到稳定状态,即三次测定所得值相互之间差异小于0.2,即得到发酵产品。本专利技术有益效果:本专利技术所提供的饲用乳酸杆菌液体培养基,配方中以大豆提取液和骨粉作为氮源,糖蜜和葡萄糖作为碳源,同时在培养过程中采用调节pH值法以减少酸对菌体生长的抑制作用,以期达到提高生长菌浓的目的,此方法采用了低成本原料,不仅可以提高其生长性能,同时对水产致病菌嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)也起到了一定的抑制作用。本专利技术的方案适用于乳酸杆菌在大规模生产过程中使用的培养基及其培养方法。附图说明图1为四种乳酸菌的在实例1中的生长曲线;其中A曲线为本专利技术培养基的生长曲线;B曲线为对照MRS培养基生长曲线。图2为在实例2中淀粉乳杆菌和干酪乳杆菌的生长曲线图;其中A曲线为本专利技术培养基的生长曲线;B曲线为对照MRS培养基生长曲线。图3为在实例3中唾液乳杆菌和发酵乳杆菌的生长曲线图;其中A曲线为本专利技术培养基的生长曲线;B曲线为对照MRS培养基生长曲线。注:上述各附图中横坐标表示时间(h),纵坐标表示OD595值。具体实施方式为了更好地说明本专利技术所解决的问题、所采用的技术方案和所达到的效果,现结合具体实施例和相关资料进一步阐述。需要说明的是,本
技术实现思路
包含但不限于以下实施例及其组合实施方式。本专利技术实施例中未注明具体技术或条件的,按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购等途径获得的常规产品。实施例1本专利技术的培养基配制1升本专利技术的培养基,按如下组分及用量取料:大豆提取液30g、骨粉25g、糖蜜10g、葡萄糖12g、抗坏血酸2g、乙酸钠8g、柠檬酸二铵3g、MgSO4·7H2O0.5g、MnSO4·H2O0.2g、吐温-801ml、蒸馏水适量、NaOH适量。配制方法:1)按上述备料;2)取30g豆粕,加600ml蒸馏水,煮沸打成浆,用四层纱布过滤,滤液待用,该滤液即为30g大豆提取液;3)取骨粉25g、糖蜜10g、葡萄糖12g、乙酸钠8g、柠檬酸二铵3g、MgSO4·7H2O0.5g、MnSO4·H2O0.2g、吐温-801ml,加入到2)所得的滤液中,本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种乳酸杆菌发酵培养基,其特征在于,所述培养基氮源包括:大豆提取液、骨粉;碳源包括:糖蜜、葡萄糖。

【技术特征摘要】
1.一种乳酸杆菌发酵培养基,其特征在于,所述培养基氮源包括:大豆提取液、骨粉;碳源包括:糖蜜、葡萄糖。2.根据权利要求1所述的乳酸杆菌发酵培养基,其特征在于,所述培养基,每1升包括组分:大豆提取液25-40g、骨粉20-30g、糖蜜10-15g、葡萄糖10-15g。3.根据权利要求2所述的乳酸杆菌发酵培养基,其特征在于,每1升所述培养基中还包括抗坏血酸0.5-3g。4.根据权利要求3所述的乳酸杆菌发酵培养基,其特征在于,每1升所述培养基中还包括组分:乙酸钠8-12g、柠檬酸二铵2-3g、MgSO4·7H2O0.2-0.5g、MnSO4·H2O0.2-0.5g、吐温-800.1-1ml。5.根据权利要求4所述的乳酸杆菌发酵培养基,其特征在于,每1升所述培养基,包括组分:大豆提取液30g、骨粉25g、糖蜜10g、葡萄糖12g、抗坏血酸2g、乙酸钠8g、柠檬酸二铵3g、MgSO4·7H2O0.5g、MnSO4·H2O0.2g、吐温-801ml。6.根据权利要求1-5任意一项所述的乳酸杆菌发酵培养基,其特征在于,所述发酵培养基中的大豆提取液的质量以豆粕计:25-40g大豆提取液即为25-40g豆粕所制得的所有提取液。7.根据权利要求1-5任意一项所述的乳酸杆菌发酵培养基,其特征在于,所述培养基以NaOH调节至pH值6.0-6.5。8.根据权利要求1-5任意一项所述的乳酸杆菌发酵培养基,其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员:刘陈立刘明珠蒙海林何敬愉崔金明刘复荣
申请(专利权)人:广州中国科学院先进技术研究所深圳先进技术研究院
类型:发明
国别省市:广东,44

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