一种检测肺动脉高压的致病/易感基因的方法技术

本发明专利技术提供了一种检测肺动脉高压的致病和/或易感基因的试剂在制备诊断肺动脉高压的产品中的应用，所述的试剂可以捕获与肺动脉高压的致病和/或易感的多种基因，可最多检测27个相关基因。本发明专利技术所述的试剂、含有试剂的产品可以解释肺动脉高压患者的病因，评估患有肺动脉高压的风险、危险因素，为患病个体分子遗传学诊断，高发人群普查、筛查家属中的发病高危人群以及进行相应的遗传咨询及产前诊断干预提供参考，以期减少肺动脉高压的发病率。同时，本发明专利技术所述的探针组、芯片及试剂盒具有高效、检测位点多、准确、操作简便、特异性好、灵敏度高、快速、实用性强且成本低廉的优势。

A Method for Detecting Pathogenic/Susceptible Genes of Pulmonary Hypertension

The invention provides an application of a reagent for detecting pathogenic and/or susceptible genes of pulmonary hypertension in the preparation of products for diagnosing pulmonary hypertension. The reagent can capture a variety of pathogenic and/or susceptible genes of pulmonary hypertension, and can detect up to 27 related genes. The reagents and products containing reagents can explain the etiology of pulmonary hypertension patients, evaluate the risk and risk factors of pulmonary hypertension, and provide reference for molecular genetic diagnosis of individual, screening of high-risk population in high-risk population, screening of high-risk population in family members and corresponding genetic counseling and prenatal diagnosis intervention, so as to reduce the incidence of pulmonary hypertension. Rate. Meanwhile, the probe set, chip and kit of the invention have the advantages of high efficiency, multiple detection sites, accuracy, simple operation, good specificity, high sensitivity, high practicability and low cost.

【技术实现步骤摘要】
一种检测肺动脉高压的致病/易感基因的方法
本专利技术涉及基因工程及分子遗传学
，具体涉及一种用于肺动脉高压的致病和/或易感基因的个性化捕获、测序的探针组及试剂盒。
技术介绍
肺动脉高压(pulmonaryarterialhypertension，PAH)是最常见的一种肺血管疾病，以肺动脉压力进行性增高、弥漫性肺小动脉痉挛和肺血管重构为主要病理改变，最终导致患者因右心衰竭死亡。肺动脉高压定义为肺动脉平均压(mPAP)在静息状态下≥25mmHg(1mmHg＝0.133kPa)，同时肺毛细血管楔压(PCWP)或左心房压(LAP)≤15mmHg。目前将肺动脉高压分为(2013年尼斯第五次肺动脉高压会议)：动脉性肺动脉高压(包括特发性、遗传性、药物和/或毒素相关性、疾病相关性及新生儿持续性肺动脉高压等)、左心疾病相关性肺动脉高压、肺部疾病和/或缺氧相关的肺动脉高压、慢性血栓栓塞性肺动脉高压(chronicthromboembolismpulmonaryhypertension，CTEPH)以及多种未明机制所致肺动脉高压。其中，Adams-Oliver综合征或遗传性出血性毛细血管扩张症也是引起肺动脉高压的原因。Adams-Oliver综合征，是一种罕见的常染色体显性遗传的神经外胚叶综合征。症状表现包括严重的先天性头皮发育不良，可累及皮肤和颅骨，以及广泛的先天性毛细血管扩张性大理石样皮肤和肢体缺陷。其他表现还包括血管瘤、缩颌和小颌、斜视、房间隔缺损、肺动脉狭窄、肺动脉高压、肺狭窄等。此病预后较差，应加强保护，防止感染和出血。遗传性出血性毛细血管扩张症是遗传性血管壁结构异常所致的出血性疾病，患者部分毛细血管、小血管壁变薄，仅由一层内皮细胞组成，周围缺乏结缔组织支持，以致局部血管扩张，扭曲。常见于口腔、鼻粘膜、手掌、指甲床和耳部及消化道。相关表型有：结膜、舌、胃肠道、唇部、甲床、腭、鼻粘膜、指腹毛细血管扩张，腹腔及肠系膜血管动静脉瘘，脊髓、胃肠道、肺、脑、肝的动静脉畸形，蛛网膜下腔出血，黑便，腹腔及肠系膜血管静脉曲张，贫血，发绀，缺血性中风，自发反复性鼻衄。肺动静脉畸形可以引起严重的并发症，包括肺动脉高压，矛盾性栓塞，感染性心内膜炎，贫血、咯血、血胸、红细胞增多症、中风、偏头痛、短暂性脑缺血发作，脑脓肿，癫痫等，给患者的生命造成严重危害。肺动脉高压是一类发病机制复杂、多方面因素参与的综合征，因其起病隐匿，患者就诊时多已处于肺动脉高压心功能的Ⅲ～Ⅳ级，治疗难度大，药物敏感性低，心脏结构不可逆程度高，预后极差，通常从确诊到死亡绝大多数患者生存不足2年。目前PAH发病机制尚未完全阐明。但各种类型的PAH在晚期拥有相同的病理表现，提示其发病机制可能共享相同的分子通路。目前发现基因ARHGAP31、DOCK6、EOGT、RBPJ、DLL4与遗传性出血性毛细血管扩张症相关。ARHGAP31、DOCK6、EOGT、RBPJ、DLL4基因与Adams-Oliver综合征也有关。数十个基因异常与PAH相关，如BMPR2、SMAD9、CAV1、ENG等。其中，专利CN104650214A公开了肺动脉高压致病基因ACVRL1突变位点，通过检测该突变位点，预测待测样本是否患有肺动脉高压，可以作为治疗肺动脉高压的靶点。专利CN107602690A公开了肺动脉高压相关的PTGIS基因突变，该专利技术通过全基因组测序，发现PTGIS基因上存在3种与肺动脉高压紧密相关的PTGIS罕见变异，突变位点分别为c.755G>A、c.1339G>A以及位于内含子-外显子剪接位点的g.23867G>A。该专利技术有助于解释肺动脉高压患者的病因、该基因作为肺动脉高压的生物标志物或用于评估患者患肺动脉高压的风险。专利CN107760779A公开了肺动脉高压相关的突变型BMP9基因及其应用，通过检测生物样本的突变型BMP9基因或蛋白来检测、评估肺动脉高压。但是，均未公开本专利技术所述的肺动脉高压的致病和/或易感基因的组合，本专利技术所述的基因的组合中含有很多现有技术中没有公开的基因，其检测更加准确。随着基因测序技术的发展，基因组序列测定的费用越来越低，收集个体样本遗传信息的速度也越来越快。第二代高通量测序技术(next-generationsequencingtechnology)具有快速、准确、低成本的优点，可同时对多个基因的各种类型突变进行检测，已经被广泛应用于遗传缺陷的病因检测和分子遗传学诊断，然而到目前为止，一直尚未有专门针对肺动脉高压的致病和/或易感基因检测的高通量探针、芯片或试剂盒，使得本病相关领域的进展严重滞后，发病率高居不下，遗传咨询和必要的产前干预措施无法施行，本应早发现、早明确病因、早干预治疗甚至部分可治愈的本病患者不能及早得到关注，不仅给患者和其家庭带来的巨大的痛苦和沉重的经济负担，也严重阻碍了我国整体人口素质的大幅度提高。目前商售人类全基因组外显子测序的价格在6千到8千人民币之间，而本专利技术的探针组的基因测序成本只有2千到3千人民币，可以大大降低患者的经济负担，是一种非常实用的肺动脉高压的筛查工具。综上所述，开发一种高效、准确、快速、低价的肺动脉高压的致病和/或易感基因的探针组、芯片或试剂盒，用于肺动脉高压的致病和/或易感基因的基因筛查和分子遗传学诊断，意义非常重大。
技术实现思路
本专利技术人通过创造性劳动筛选出约27种与肺动脉高压的致病和/或易感相关的基因，根据这些基因的任意组合提供相应组合的探针组、芯片或试剂盒，可以判断是否患有肺动脉高压、解释肺动脉高压患者的病因、评估个体患肺动脉高压的风险、用于孕前预警指示突变基因携带者的后代患有肺动脉高压的风险或以各基因的变异位点作为靶点，为治疗肺动脉高压提供一种全新的思路和手段。为个体提供分子学遗传诊断，对患病家属的家系筛查，以及对突变携带者的早期干预治疗具有重要的临床意义，也可对再次妊娠的风险进行精确评估。同时，本专利技术所述的探针组、芯片及试剂盒具有高效、检测位点多、准确、快速、实用性强且成本低的优势。优选的，所述筛选的方法为结合大量数据库检索和/或对患者基因测序结果进行筛选。进一步优选的，所述的数据库为OMIM数据库，通过查询OMIM数据库及权威文献，确定以肺动脉高压为临床表型的疾病的致病基因。本专利技术的第一方面，提供了一种肺动脉高压的诊断标志物，所述的诊断标志物选自基因BMPR2、SMAD9、CAV1、KCNK3、ABCA3、SARS2、HTR2B、THBS1、TOPBP1、EIF2AK4、CPS1、KRT18、KRT8、ABCD4、PIEZO2、NFU1、BOLA3、ATP5A1、ARHGAP31、DOCK6、EOGT、RBPJ、DLL4、ENG、ACVRL1、GDF2或SMAD4中的一种或两种以上的组合以及各基因表达的蛋白或蛋白的组合。优选的，所述的生物标志物选自基因BMPR2、SMAD9、CAV1、KCNK3、ABCA3、SARS2、HTR2B、THBS1、TOPBP1、EIF2AK4、CPS1、KRT18、KRT8、ABCD4、PIEZO2、NFU1、BOLA3、ATP5A1、ARHGAP31、DOCK6、EOGT、RBPJ、DLL4、ENG、ACVRL1、GDF2或SMAD4中的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测肺动脉高压的致病和/或易感基因的试剂在制备诊断肺动脉高压的产品中的应用，其特征在于，所述肺动脉高压的致病和/或易感基因为BMPR2、SMAD9、CAV1、KCNK3、ABCA3、SARS2、HTR2B、THBS1、TOPBP1、EIF2AK4、CPS1、KRT18、KRT8、ABCD4、PIEZO2、NFU1、BOLA3、ATP5A1、ARHGAP31、DOCK6、EOGT、RBPJ、DLL4、ENG、ACVRL1、GDF2或SMAD4中的两种或两种以上的组合。

【技术特征摘要】
1.一种检测肺动脉高压的致病和/或易感基因的试剂在制备诊断肺动脉高压的产品中的应用，其特征在于，所述肺动脉高压的致病和/或易感基因为BMPR2、SMAD9、CAV1、KCNK3、ABCA3、SARS2、HTR2B、THBS1、TOPBP1、EIF2AK4、CPS1、KRT18、KRT8、ABCD4、PIEZO2、NFU1、BOLA3、ATP5A1、ARHGAP31、DOCK6、EOGT、RBPJ、DLL4、ENG、ACVRL1、GDF2或SMAD4中的两种或两种以上的组合。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肺动脉高压的致病和/或易感基因为KCNK3、ABCA3、SARS2、HTR2B、THBS1、TOPBP1、EIF2AK4、CPS1、KRT18、KRT8、ABCD4、PIEZO2、NFU1、BOLA3、ATP5A1、ACVRL1、GDF2或SMAD4中的两种或两种以上的组合。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述肺动脉高压的致病和/或易感基因为BMPR2、SMAD9、CAV1、ARHGAP31、DOCK6、EOGT、RBPJ、DLL4或ENG中的两种或两种以上的组合。4.根据权利要求1-3任一所述的应用，其特征在于，所述肺动脉高压的致病和/或易感基因为BMPR2、KCNK3、ACVRL1或ABCA3中的两种或两种以上的组合。5.根据权利要求1-4任一所述的应用，其特征在于，所述检测肺动脉高压的致病和/或易感基因的试剂为检测肺动脉高压的致病和/或易感基因的突变位点试剂。6.一种肺动脉高压的诊断标志物，其特征在于，所述的诊断标志物选自基因BMPR2、SMAD9、CAV1、KCNK3、ABCA3、SARS2、HTR2B、THBS1、TOPBP1、EIF2AK4、CPS1、KRT18、KRT8、ABCD4、PIEZO2、NFU1、BOLA...

【专利技术属性】
技术研发人员：何昆仑，伍建，石金龙，贾倩，贾志龙，赵晓静，于康，王依慧，马俊峰，张润敏，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院，北京迈基诺基因科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11