一种从禽蛋、禽肉及猪肉中高效同时提取甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺多残留的方法技术

本发明专利技术涉及兽药残留检测领域，具体涉及一种从禽蛋、禽肉及猪肉中高效同时提取甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺多残留的方法，包括如下步骤：1）禽蛋、禽肉或猪肉样品提取与净化：针对禽蛋样品，以体积比为98:2乙腈:氨水为提取剂，针对禽肉或猪肉样品，以体积比为98:2的乙酸乙酯:氨水为提取剂；2）超高效液相色谱‑荧光检测。本发明专利技术以加速溶剂萃取法同时提取禽蛋、禽肉及猪肉中甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺残留，甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺在禽蛋、禽肉及猪肉中添加浓度分别为LOQ、0.5 MRL、1.0 MRL、2.0 MRL的提取回收率均在80.00%以上，满足兽药残留检测方法的需求。

An efficient and simultaneous extraction method of thiamphenicol, florfenicol and florfenicol residues from poultry eggs, meat and pork

The invention relates to the field of veterinary drug residue detection, in particular to a method for efficiently extracting thiamphenicol, florfenicol and florfenicol residues simultaneously from poultry eggs, poultry meat and pork, including the following steps: 1) extracting and purifying poultry eggs, poultry meat or pork samples: aiming at poultry eggs samples, with a volume ratio of 98:2 acetonitrile: ammonia water as extractant, aiming at poultry or pork samples; Ethyl acetate with volume ratio of 98:2: ammonia water as extractant; 2) Ultra-high performance liquid chromatography fluorescence detection. The present invention extracts thiamphenicol, florfenicol and its metabolite florfenicol amine residues in poultry eggs, poultry meat and pork simultaneously by accelerated solvent extraction method, and adds concentrations of thiamphenicol, florfenicol and its metabolite florfenicol amine in poultry eggs, poultry meat and pork at LOQ, 0.5 MRL, 1.0 MRL and 2.0 MRL respectively. The extraction recovery rate is above 80.00%, which meets the veterinary drug residue detection prescription. The needs of law.

【技术实现步骤摘要】
一种从禽蛋、禽肉及猪肉中高效同时提取甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺多残留的方法
本专利技术涉及兽药残留检测领域，具体涉及一种用加速溶剂萃取仪从禽蛋、禽肉及猪肉中同时高效提取甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺多残留的方法。
技术介绍
在对动物源性食品中的兽药进行检测时，只有将药物从样本中提取出来，才可能建立起高效的检测方法。甲砜霉素是氯霉素类衍生物，为白色或类白色的结晶性粉末或晶体，无臭，储存温度为20℃±4℃。在二甲基甲酰胺中的溶解性最强，溶于甲醇，微溶于水，几乎不溶于于乙醚或氯仿。熔点为162.6℃，0.5％水溶液的pH为5.9，最大吸收波长为224nm。氟苯尼考既是氯霉素的结构同系物也是甲砜霉素的结构类似物，为白色或类白色的结晶性粉末，无臭，味苦，储存温度为20℃±4℃，极易溶于二甲基甲酰胺，溶于甲醇，微溶于冰醋酸，极微溶于水或氯仿。熔点为154.9℃，0.5％水溶液的pH值为4.5-6.5，最大吸收波长为224nm。氟苯尼考胺为氟苯尼考在机体内的主要代谢产物。国内外关于动物源性食品中提取甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺的方法主要为液-液萃取法和固相萃取法，一般提取剂为碱性乙酸乙酯和碱性乙酸乙酯-乙腈溶液。但目前为止，采用加速溶剂萃取技术同时提取禽蛋、禽肉及猪肉中甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺残留的方法在国内外均尚未见报道。
技术实现思路
为解决从禽蛋、禽肉及猪肉中快速、高效同时提取甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺的问题。本专利技术采用加速溶剂萃取(ASE)技术同时提取禽蛋、禽肉及猪肉中甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺的残留。加速溶剂萃取技术因具有溶剂用量少、萃取速度快、效率高、回收率高、重现性好和自动化程度高等优势而被广泛应用在兽药残留分析领域。甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺化学性质稳定适合加速溶剂萃取，同时相比液-液萃取法，可以避免手动萃取带来的误差和重现性差等问题，耗时短、适合批量处理样品。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案为：一种从禽蛋、禽肉及猪肉中同时提取甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺残留的方法，包括如下步骤：1)禽蛋、禽肉或猪肉样品提取与净化：针对禽蛋样品，以体积比为98:2乙腈:氨水为提取剂，针对禽肉或猪肉样品，以体积比为98:2的乙酸乙酯:氨水为提取剂，提取温度为80±2℃；2)超高效液相色谱-荧光检测；a.超高效液相色谱；b.荧光检测：采用荧光检测器，激发波长233±2nm，发射波长284±2nm。步骤a中，超高效液相色谱条件：以ACQUITYBEHC18为色谱柱；以流动相A：含0.005mol/L的NaH2PO4、0.003mol/L十二烷基硫酸钠和0.05％的三乙胺的水溶液和流动相B：乙腈为流动相；流动相A的pH为5.3±0.1。在步骤a中，分离禽蛋中目标物时流动相A:B＝64:36V/V，分离禽肉及猪肉中目标物时流动相A:B＝65:35V/V；所述的目标物指甲砜霉素、氟苯尼考或氟苯尼考胺。步骤a中，所述的百分比为体积百分比。进样体积：10μL；流速：0.2mL/min；柱温：30℃。步骤(1)具体过程为：准确称取(2.0±0.02)g均质好的禽蛋、禽肉或猪肉空白样品放于研钵中，并加入适量硅藻土研磨，为了达到最佳的萃取效率，尽可能将样品研磨成小颗粒，装入22mL的萃取池中，在1500psi，80℃条件下用ASE萃取，萃取禽蛋样品时用乙腈:氨水(98:2，V/V)静态萃取2次，萃取禽肉和猪肉样品时用乙酸乙酯:氨水(98:2，V/V)静态萃取2次，每次静态萃取时间3min，氮气吹扫60s，收集萃取液待用；收集的萃取液转移至50mL离心管，置于50℃离心浓缩仪(2000×g)上浓缩至1-2mL；萃取液浓缩后，加入1mL纯乙腈，漩涡振荡混匀1min，加入10mL正己烷(用纯乙腈饱和)漩涡混匀，去脂，静置5min，弃去上层正己烷，重复去脂一次，然后再置于离心浓缩仪(2000×g)中浓缩至干；将浓缩干后的样品用2.0mL35％乙腈复溶，12100×g离心15min，过0.22μmPVDF滤器，滤液供UPLC-FLD检测。本试验比较了不同体积比例的乙腈:氨水(99:1，98:2，97:3，96:4，95:5，V/V)为禽蛋中提取剂时，乙腈:氨水(98:2，V/V)、乙酸乙酯:氨水(98:2，V/V)和乙腈:乙酸乙酯:氨水(49:49:2，V/V)为禽肉和猪肉中提取剂时的方法回收率，结果表明在禽蛋中以乙腈:氨水的比例为98:2，V/V时，禽肉和猪肉中以乙酸乙酯:氨水(98:2，V/V)作为提取剂时，目标化合物的回收率最高。本试验还对比了不同的ASE提取温度对提取回收率的影响，发现温度为80℃时的提取回收率最高，提取效果最好。因此，最终选择提取温度为80℃，以乙腈:氨水(98:2，V/V)为禽蛋中提取剂，乙酸乙酯:氨水(98:2，V/V)为禽肉和猪肉中的提取剂，该提取方法样品基质影响小、提取效率高、回收率高。相对于现有技术，本专利技术的有益效果为：本专利技术比较了禽蛋中不同提取剂(乙腈:氨水＝99:1，98:2，97:3，96:4，95:5，V/V)、禽肉和猪肉中不同提取剂(乙腈:氨水(98:2，V/V)、乙酸乙酯:氨水(98:2，V/V)和乙腈:乙酸乙酯:氨水(49:49:2，V/V))，以及不同提取方法(液-液萃取法和加速溶剂萃取法)对提取回收率的影响。最终选择在禽蛋中以乙腈:氨水(98:2，V/V)、禽肉和猪肉中以乙酸乙酯:氨水(98:2，V/V)作为提取剂，以加速溶剂萃取法同时提取禽蛋、禽肉及猪肉中甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺残留。甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺在禽蛋、禽肉及猪肉中添加浓度分别为LOQ、0.5MRL、1.0MRL、2.0MRL的提取回收率均在80.00％以上，满足兽药残留检测方法的需求。回收率详见表1-表9。具体实施方式在本专利技术中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。1.实验畜禽的饲养和样品采集分别选取28周龄产蛋京海黄鸡30只(江苏京海禽业集团有限公司)、28-30周龄产蛋高邮鸭30只(江苏高邮鸭集团)、30周龄产蛋扬州鹅48只(扬州天歌鹅业发展有限公司)、35周龄产蛋家鸽50只(江苏江南鸽业有限公司)、20周龄产蛋鹌鹑30只(兴化市安丰镇鹌鹑养殖有限公司)，试验前预饲1周，饲喂不含任何药物的全价饲料(江苏京海禽业集团有限公司饲料厂和扬州市扬大饲料厂提供)，自由饮水。试验期间均饲喂不含任何抗菌药物的全价饲料，于每天17:30-18:00收集禽蛋，连续收集10天，禽蛋样品保存在低温蛋库中。样品收集后分别将鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋、鸽蛋和鹌鹑蛋样品匀浆后分装，贴好标签，分别作为空白样品，置于-34℃冰箱中保存。随机选取112日龄京海黄鸡(江苏京海禽业集团有限公司)、142日龄高邮鸭(江苏高邮鸭集团)、70日龄扬州鹅(江苏天歌鹅业发展有限公司)各6只(公、母各半)，及180日龄三元(杜×长×大)杂交猪(常州康乐农牧有限公司)6头(公、母各半)，单笼(栏)饲养，饲喂不含任何药物的全价饲料(江苏京海禽业集团有限公司饲料厂和扬州市扬大饲料厂提供)，自由饮水。饲养2周后屠宰，分别取供试鸡、鸭本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从禽蛋、禽肉及猪肉中高效同时提取甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺多残留的方法，其特征在于，包括如下步骤：1）禽蛋、禽肉或猪肉样品提取与净化：针对禽蛋样品，以体积比为98:2乙腈:氨水为提取剂，针对禽肉或猪肉样品，以体积比为98:2的乙酸乙酯:氨水为提取剂，提取温度为80±2 °C；2）超高效液相色谱‑荧光检测；a. 超高效液相色谱；b.荧光检测：采用荧光检测器，激发波长233 ±2 nm，发射波长284 ±2 nm。

【技术特征摘要】
1.一种从禽蛋、禽肉及猪肉中高效同时提取甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺多残留的方法，其特征在于，包括如下步骤：1）禽蛋、禽肉或猪肉样品提取与净化：针对禽蛋样品，以体积比为98:2乙腈:氨水为提取剂，针对禽肉或猪肉样品，以体积比为98:2的乙酸乙酯:氨水为提取剂，提取温度为80±2°C；2）超高效液相色谱-荧光检测；a.超高效液相色谱；b.荧光检测：采用荧光检测器，激发波长233±2nm，发射波长284±2nm。2.根据权利要求1所述的一种从禽蛋、禽肉及猪肉中高效同时提取甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺多残留的方法，其特征在于，步骤a中，超高效液相色谱条件：以ACQUITYUPLC®BEHC18为色谱柱；以流动相A：含0.005mol/L的NaH2PO4、0.003mol/L十二烷基硫酸钠和0.05%的三乙胺的水溶液和流动相B：乙腈为流动相；流速：0.2mL/min；柱温：30°C。3.根据权利要求1所述的一种从禽蛋、禽肉及猪肉中高效同时提取甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺多残留的方法，其特征在于，步骤a中，流动相A的pH值为5.3±0.1。4.根据权利要求1所述的一种从禽蛋、禽肉及猪肉中高效同时提取甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺多残留的方法，其特征在于，在...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢恺舟，王波，赵霞，谢星，庞茂达，王雅娟，郭亚文，卜晓娜，刘楚君，王旭堂，刁志祥，张培杨，陈长宽，张跟喜，张涛，戴国俊，王冉，卜仕金，王金玉，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32