一种利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测烟用香料霉变的方法制造方法及图纸

本发明专利技术公开一种利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测烟用香料霉变的方法，包括如下步骤：(1)烟用香料样品提取回流；(2)烟用香料样品浓缩；(3)将步骤(2)浓缩后的待测样品利用LC‑MS进行分析。本发明专利技术自制一种带有固相萃取功能的索氏提取装置，该装置可在密闭条件下对样品进行分离提纯、浓缩，本发明专利技术无需像传统的分离提纯、浓缩需要多次转移、浓缩的操作步骤，大大提高了提取效率。

A Method for Detecting Mildew of Tobacco Flavors by Soxhlet Extraction Device with Solid Phase Extraction Function

The invention discloses a method for detecting mildew of tobacco flavor by Soxhlet extraction device with solid phase extraction function, which comprises the following steps: (1) extraction and reflux of tobacco flavor samples; (2) concentration of tobacco flavor samples; (3) analysis of the samples after concentration by LC MS. The Soxhlet extraction device with solid phase extraction function is self-made. The device can separate, purify and concentrate samples under closed conditions. The method does not need the operation steps of multiple transfers and concentrations as traditional separation and purification, and greatly improves the extraction efficiency.

【技术实现步骤摘要】
一种利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测烟用香料霉变的方法
本专利技术属于烟用香料化学分析
，特别涉及一种利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测烟用香料霉变的方法。
技术介绍
香精香料是一种重要的添加剂,与食品安全休戚相关，因此对香精香料进行霉变监控与预防具有重要的现实意义。麦角甾醇和麦角甾酮是真菌细胞膜中的主要甾体类化合物，主要存在于绝大多数的真菌细胞膜中，维系着真菌细胞的正常代谢，据报道麦角甾醇的量与真菌的生物量存在着相关关系(麦角甾醇可作为评价粮食质量安全的敏感指标之一)；因其在大部分植物中不含有或含量很小，其良好的特异性和稳定性使其可作为霉菌污染的标记物，作为质量安全指标在世界范围内得到了广泛的研究与应用。因此可以通过监控香精香料中麦角甾醇和麦角甾酮的含量，从而了解香精香料原料以及相关产品是否存在霉变的情况或者是否存在使用了霉变原料从而导致霉变污染的情况。目前.对麦角甾酮与麦角甾醇的定性与定量分析研究已经很多，主要报道的方法有毛细管电泳法，高效液相色谱法(HPLC)、LC-MS法和GC-MS法等。由于香精香料基质复杂，有些样品具有高水分高糖分的特点，单纯利用液相色谱紫外检测存在着色谱峰复杂，基质干扰大等定性困难的问题，而利用GC方法存在着前处理复杂的问题，LC/MS-MS在定性和定量方面都具有其优点。由于香精香料霉变不仅会给生产产品的质量安全带来致命的影响，还会给生产企业带来极大的经济损失，风险成本较大；因此亟待寻找一种可以有效判定香精香料是否霉变或者是否霉变污染的有效判别手段；同时鉴于香精香料的基质特点，以及麦角甾醇和麦角甾酮含量较低的现状，利用稳定、可靠性高的前处理方法是对样品检测准确性和可应用性的有效保障。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测烟用香料霉变的方法，其有效解决了提取烟用香料中香气成分时干扰大，香气成分回收率低的问题，并且无需多次提取、转移、浓缩等过程，整个样品前处理过程高效简便，保障了检测结果的准确性和精密度。除非另有说明，本专利技术所采用的百分数均为重量百分数。本专利技术第一方面涉及一种利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测烟用香料霉变的方法，包括如下步骤：(1)烟用香料样品提取回流：在固相萃取柱9中先后加入硅胶颗粒，称取1～10g烟用香料样品于样品筒8中，将样品筒8与固相萃取柱9密封连接，将色谱进样瓶与圆底烧瓶1的螺纹接口2密封连接，并在圆底烧瓶1中加入50～100mL的溶剂并加入浓度为50μg/mL的内标工作液200μL(50μg/mL的胆甾烷醇酮-6-酮溶液)；将固相萃取柱9通过溶剂回流管6与第二接口4密封连接，将隔热导气管5与第一接口3密封连接，将三通转接管7的三个接口分别与样品筒8、密封冷凝管10和隔热导气管5密封连接，密封冷凝管10接通冷凝水，最后将烧瓶置于水浴锅中，60～80℃加热，冷凝回流0.25～4h；(2)烟用香料样品浓缩：待步骤(1)样品回流提取完毕后，切换三通阀13，使其与外界空气导通，不断挥发的溶剂通过三通阀13流出并回收，烧瓶1中的溶液不断被浓缩至溶剂挥发完毕；(3)将步骤(2)浓缩后的待测样品利用LC-MS进行分析。本专利技术优选的实施方案中，步骤(1)加入烧瓶1中的溶剂为乙酸甲酯或二氯甲烷。本专利技术优选的实施方案中，步骤(1)还包括在硅胶颗粒上面覆盖无水硫酸钠。本专利技术优选的实施方案中，步骤(3)的分析条件为：液相色谱条件：色谱柱：ACQUITYUPLCTMBEHC18(1.7μm,2.1mm×100mm)；流速：0.4mL/min；柱温：40℃，进样量：5μL；流动相：A为水，B为HPLC级别乙腈；流动相梯度洗脱程序：0.0～6.0min,95％B递增至100％B；6.0～7.5min保持100％B；8.0min还原为初始状态95％B。质谱条件：电离方式：大气压化学电离源(APCI)；扫描方式：正离子模式扫描；检测方式：多反应监测(MRM模式)；电喷雾电压：5500V；离子源温度：650℃；离子对的驻留监测时间(dwelltime)：100ms；辅助气Gas1压力：60psi；辅助气Gas2压力：70psi。本专利技术第二方面涉及一种带固相萃取功能的索氏提取装置，包括如下部件：烧瓶1，烧瓶1上设有第一接口3、第二接口4和螺纹接口2，烧瓶1通过第一接口3与隔热导气管5气流导通连接，隔热导气管5另一端与三通转接管7气流导通连接，三通转接管7的另外两个接口分别与密闭冷凝管10和样品筒8气流导通连接，密闭冷凝管10上设有泄压阀11，样品筒8远离三通转接管7的一端设有筛板12并与固相萃取柱9气流导通连接，固相萃取柱9的另一端通过溶剂回流管6与第二接口4气流导通连接，溶剂回流管6内设有三通阀13。本专利技术优选的实施方案中，固相萃取柱9中容纳有硅胶颗粒。本专利技术优选的实施方案中，螺纹接口2与色谱进样瓶15可拆卸连接。本专利技术优选的实施方案中，隔热导气管5和溶剂回流管6采用软质材料，如PES；具有一定的伸缩性，方便操作过程中的组装连接。本专利技术优选的实施方案中，样品筒8和固相萃取柱9为耐有机溶剂腐蚀的塑料材质，筛板12为塑料筛板或金属筛板，其余部件，例如烧瓶1、三通阀13以及密闭冷凝管10为玻璃材质。本专利技术优选的实施方案中，密闭冷凝管10上设有泄压阀11，当加热回流时提取装置中压力过高时可自动泄压，防止压力过高对装置造成破坏。本专利技术优选的实施方案中，固相萃取柱9装填了硅胶颗粒，在进行样品前处理使用前预装填好固相萃取柱9，样品前处理过程中直接使用。本专利技术优选的实施方案中，溶剂回流管6内设置三通阀13，可切换溶剂流回烧瓶1或者流出到烧瓶1外，实现样品回流提取和浓缩的切换。本专利技术优选的实施方案中，提取装置中所有接口连接处均采用夹紧装置夹紧，接口带有密封环，保证提取装置在使用过程中的密封性，同时保证在泄压阀泄压的压力范围内各接口不会漏气。本专利技术中带固相萃取功能的索氏提取装置的工作过程如下：样品分析时，在固相萃取柱9中加入硅胶颗粒，在样品筒8中装入称量好的样品，并加入浓度为50μg/mL的内标工作液200μL(50μg/mL的胆甾烷醇酮-6-酮溶液)；在样品上方覆盖一层无水硫酸钠(用于除去溶剂及管道内的水分)，将样品筒8与固相萃取柱9密封连接，在烧瓶1中加入回流提取的溶剂(二氯甲烷和内标物)，将固相萃取柱9通过溶剂回流管6与第二接口4密封连接，将隔热导气管5与第一接口3密封连接，将三通转接管7的三个接口分别与样品筒8、密封冷凝管10和隔热导气管5密封连接，密封冷凝管10接通冷凝水，最后将烧瓶置于水浴锅或油浴锅中加热冷凝回流。样品提取过程中，溶剂回流管6的三通阀13与第二接口4气流导通，挥发的溶剂将固相萃取柱9中所提取的待测样品回流至烧瓶1中，当样品提取完毕后，把三通阀13调整为与外界空气导通的状态，不断挥发的溶剂通过三通阀13流出并回收，此时烧瓶1中的溶液不断被浓缩直至溶剂蒸发完，即可进行色谱检测。本专利技术有益效果：1、本专利技术自制一种带有固相萃取功能的索氏提取装置，该装置可在密闭条件下对样品进行分离提纯、浓缩，本专利技术无需像传统的分离提纯、浓缩需要多次转移、浓缩的操作步骤，大大提高了提取效率。2、本专利技术自制的提取装置采用全封闭的冷凝管，有效避免了提取溶本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测烟用香料霉变的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)烟用香料样品提取回流：在固相萃取柱(9)中先后加入硅胶颗粒，称取1～10g烟用香料样品于样品筒(8)中，将样品筒(8)与固相萃取柱(9)密封连接，将色谱进样瓶与圆底烧瓶(1)的螺纹接口(2)密封连接，并在圆底烧瓶(1)中加入50～100mL的溶剂和内标工作液200μL，将固相萃取柱(9)通过溶剂回流管(6)与第二接口(4)密封连接，将隔热导气管(5)与第一接口(3)密封连接，将三通转接管(7)的三个接口分别与样品筒(8)、密封冷凝管(10)和隔热导气管(5)密封连接，密封冷凝管(10)接通冷凝水，最后将烧瓶置于水浴锅中，60～80℃加热，冷凝回流0.25～4h；(2)烟用香料样品浓缩：待步骤(1)样品回流提取完毕后，切换三通阀(13)，使其与外界空气导通，不断挥发的溶剂通过三通阀(13)流出并回收，烧瓶(1)中的溶液不断被浓缩至溶剂挥发完毕；(3)将步骤(2)浓缩后的待测样品利用LC‑MS进行分析。

【技术特征摘要】
1.一种利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测烟用香料霉变的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)烟用香料样品提取回流：在固相萃取柱(9)中先后加入硅胶颗粒，称取1～10g烟用香料样品于样品筒(8)中，将样品筒(8)与固相萃取柱(9)密封连接，将色谱进样瓶与圆底烧瓶(1)的螺纹接口(2)密封连接，并在圆底烧瓶(1)中加入50～100mL的溶剂和内标工作液200μL，将固相萃取柱(9)通过溶剂回流管(6)与第二接口(4)密封连接，将隔热导气管(5)与第一接口(3)密封连接，将三通转接管(7)的三个接口分别与样品筒(8)、密封冷凝管(10)和隔热导气管(5)密封连接，密封冷凝管(10)接通冷凝水，最后将烧瓶置于水浴锅中，60～80℃加热，冷凝回流0.25～4h；(2)烟用香料样品浓缩：待步骤(1)样品回流提取完毕后，切换三通阀(13)，使其与外界空气导通，不断挥发的溶剂通过三通阀(13)流出并回收，烧瓶(1)中的溶液不断被浓缩至溶剂挥发完毕；(3)将步骤(2)浓缩后的待测样品利用LC-MS进行分析。2.根据权利要求1所述的利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测烟用香料霉变的方法，其特征在于，步骤(1)加入烧瓶(1)中的溶剂为乙酸甲酯或二氯甲烷。3.根据权利要求2所述的利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测烟用香料霉变的方法，其特征在于，步骤(1)还包括在硅胶颗粒上面覆盖无水硫酸钠。4.根据权利要求3所述的利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测烟用香料霉变...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晶，李雪梅，杨光宇，刘欣，许永，陈建华，杨叶昆，黄海涛，张承明，向明，
申请(专利权)人：云南中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：云南,53