The invention discloses a method for inducing decidualization of primary stromal cells of mouse uterus in vitro, which comprises the following operating steps: (1) taking tissue blocks of mouse uterus on the fourth day of normal pregnancy; (2) digesting the tissue blocks to obtain a single cell suspension of primary stromal cells of mouse uterus; (3) culturing the single cell suspension until the cell density reaches 75 85% and then changing the liquid to remove it. After removing the impurity cells, the inducing medium was added to induce decidualization of primary stromal cells of mouse uterus. The present invention provides a method for decidualization induction of mouse uterine primary stromal cells in vitro, which is simple to operate, can make the isolated mouse uterine primary stromal cells have a high survival rate, and has a high success rate of decidualization initiation, thus laying a foundation for researchers to study the mechanism of decidualization.
【技术实现步骤摘要】
一种小鼠子宫原代基质细胞体外诱导蜕膜化的方法
本专利技术细胞诱导
,具体涉及一种小鼠子宫原代基质细胞体外诱导蜕膜化的方法。
技术介绍
随着工业化的发展和人类生活方式的巨大改变,近年来全世界不孕不育症患者的比例逐年上升。目前,尽管人工助孕技术得到了较大的发展,但即使在高质量胚胎的情况下,依旧存在着胚胎移植的植入率低以及后续的妊娠成功率低的不足,这主要是由于子宫内膜的生长发育障碍所致。胚胎植入的成功与否,一方面取决于早期胚胎发育形成具有着床能力的囊胚,另一方面取决于子宫内膜协同性的进入接受状态,即胚胎植入的“窗口期”。在小鼠,囊胚与子宫上皮发生黏附反应以后,在甾体激素的影响下,围绕囊胚的子宫基质细胞开始广泛地增殖和分化(即子宫内膜的蜕膜化)。蜕膜化的作用主要是在有功能的胎盘形成之前,为胚泡的发育提供营养,且对发育初期的胚胎起到免疫性保护作用。目前,有关子宫内膜蜕膜化的机制及调节等仍不清楚。因此,研究子宫内膜蜕膜化的过程及相关的机制将具有重要的社会和理论意义。现有技术中,研究人员经常采用小鼠的子宫原代基质细胞作为实验对象,来研究子宫内膜蜕膜化的机制,但是存在着小鼠子宫原代基质细胞在诱导蜕膜化之前,死亡率较高的不足,并且存在着子宫原代基质细胞蜕膜化启动困难、成功率低的缺陷。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种小鼠子宫原代基质细胞体外诱导蜕膜化的方法,以解决现有技术中存在的小鼠子宫原代基质细胞的死亡率高,蜕膜化启动困难、成功率低的缺陷。本专利技术是通过以下技术方案实现的。一种小鼠子宫原代基质细胞体外诱导蜕膜化的方法,包括以下操作步骤:(1)取正常妊娠第4天小 ...
【技术保护点】
1.一种小鼠子宫原代基质细胞体外诱导蜕膜化的方法,其特征在于,包括以下操作步骤:(1)取正常妊娠第4天小鼠的子宫组织,采用胰酶溶液消化处理后,去除上皮细胞,得到组织块;(2)将组织块采用质量分数为0.2%的胶原酶II再次进行消化处理后,向其中加入组织块质量10‑15%的离心助剂,然后将混合物进行离心处理,弃去上清液后,加入质量分数为10%的PBS溶液调整细胞浓度,得到小鼠子宫原代基质细胞的单细胞悬液,其中离心助剂由以下重量份的组分制成:干酪素钠17‑22份、透明质酸钠25‑30份、α‑酮戊二酸13‑16份;(3)将步骤(2)得到的单细胞悬液培养至细胞密度达到75‑85%汇合后,换液,去除杂细胞后,向其中加入诱导培养基,诱导小鼠子宫原代基质细胞发生蜕膜化,其中诱导培养基为含有10‑15nM 17β‑雌二醇、1‑3μM孕酮、8‑12μM盐酸异丙肾上腺素和2%质量分数木炭处理胎牛血清的DMEM‑F12培养基。
【技术特征摘要】
1.一种小鼠子宫原代基质细胞体外诱导蜕膜化的方法,其特征在于,包括以下操作步骤:(1)取正常妊娠第4天小鼠的子宫组织,采用胰酶溶液消化处理后,去除上皮细胞,得到组织块;(2)将组织块采用质量分数为0.2%的胶原酶II再次进行消化处理后,向其中加入组织块质量10-15%的离心助剂,然后将混合物进行离心处理,弃去上清液后,加入质量分数为10%的PBS溶液调整细胞浓度,得到小鼠子宫原代基质细胞的单细胞悬液,其中离心助剂由以下重量份的组分制成:干酪素钠17-22份、透明质酸钠25-30份、α-酮戊二酸13-16份;(3)将步骤(2)得到的单细胞悬液培养至细胞密度达到75-85%汇合后,换液,去除杂细胞后,向其中加入诱导培养基,诱导小鼠子宫原代基质细胞发生蜕膜化,其中诱导培养基为含有10-15nM17β-雌二醇、1-3μ...
【专利技术属性】
技术研发人员:张晋平,谭毅,丁兰,丁艳平,孔维宝,王俊龙,罗文萍,傅龙飞,马君义,
申请(专利权)人:西北师范大学,
类型:发明
国别省市:甘肃,62
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