The invention relates to a high purity bovine serum albumin purification method suitable for pilot production, aiming at solving the technical problems of complicated production process and low purity of the product. The invention establishes a one-step chromatography technology, and establishes a product with 99.5% purity from purchased low purity bovine serum albumin raw material through anion exchange chromatography, ultrafiltration condensation and freeze-drying. The invention has the advantages of less process steps, short process flow, simple operation, convenient industrial production and high product purity.
【技术实现步骤摘要】
一种适合中试量产的高纯度牛血清白蛋白纯化工艺
本专利技术涉及白蛋白的制备方法,具体涉及一种适合中试量产的高纯度牛血清白蛋白纯化工艺。
技术介绍
白蛋白(Albumin)是一类能溶于水中、仅在高盐浓度下才能沉淀的蛋白质,又称清蛋白。它是血清(或血浆)含量中最为丰富的蛋白质,约占其总蛋白质含量的55-63%。由于其在脊椎动物血浆中含量最丰富且又极易纯化,在过去30年的时间里,它也是血浆中所有蛋白质中被研究的最早和最为清楚的一种。其中人的血清白蛋白(humanserumalbumin,HAS)以及牛的血清白蛋白(bovineserumalbumin,BSA)的氨基酸序列已于1975年获得。工业生产白蛋白仍以冷乙醇沉淀的工艺为主。工艺相对繁琐,纯度只能到达97%左右,血浆资源并不能得到很好的利用。目前关于白蛋白的层析工艺大多都是以阴离子交换和阳离子交换的方式,周期较长,耗费大量缓冲液。
技术实现思路
为解决现有技术问题,本专利技术提供了一种适合中试量产的高纯度牛血清白蛋白的纯化工艺。为实现上述目的,本专利技术是通过以下技术方案实现的一种适合中试量产的高纯度牛血清白蛋白提纯方法,包括以下步骤:一种适合中试量产的高纯度牛血清白蛋白纯化工艺,包括以下步骤:(1)上样样品的制备称取5~10g牛血清白蛋白原料,溶于800~100ml20~50mMNaAc+HAc中,调至pH4~9;(2)缓冲液的配制:配制3~4L平衡缓冲液A:10~20mMNaAc+HA2~4L洗脱缓冲液B:20~30mMNaAc+HAc5~10L洗脱缓冲液C:3~10MNaCl2~4L;(3)平衡与上样:在层 ...
【技术保护点】
1.一种适合中试量产的高纯度牛血清白蛋白纯化工艺,其特征在于:包括以下步骤:(1)上样样品的制备称取5~10g牛血清白蛋白原料,溶于800~100ml 20~50mM NaAc+HAc中,调至pH4~9;(2)缓冲液的配制:配制3~4L平衡缓冲液A:10~20mMNaAc+HA 2~4L洗脱缓冲液B:20~30mMNaAc+HAc 5~10L洗脱缓冲液C:3~10MNaCl 2~4L;(3)平衡与上样:在层析柱内装入填料,装好层析柱后用平衡液A平衡,流速为2~45ml/min,平衡约3~9个柱体积后,开始上样。继续用A液淋洗,淋洗至检测线平缓;(4)洗脱:用B液进行洗脱,收集洗脱峰并确定目标峰。紫外吸收降低至基线之后停止收峰,改用C液清洗柱子。最后用去离子水冲洗柱子,在将柱子保存在乙醇中。(5)置换与浓缩:用20~80kD 100~300cm
【技术特征摘要】
1.一种适合中试量产的高纯度牛血清白蛋白纯化工艺,其特征在于:包括以下步骤:(1)上样样品的制备称取5~10g牛血清白蛋白原料,溶于800~100ml20~50mMNaAc+HAc中,调至pH4~9;(2)缓冲液的配制:配制3~4L平衡缓冲液A:10~20mMNaAc+HA2~4L洗脱缓冲液B:20~30mMNaAc+HAc5~10L洗脱缓冲液C:3~10MNaCl2~4L;(3)平衡与上样:在层析柱内装入填料,装好层析柱后用平衡液A平衡,流速为2~45ml/min,平衡约3~9个柱体积后,开始上样。继续用A液淋洗,淋洗至检测线平缓;(4)洗脱:用B液进行洗脱,收集洗脱峰并确定目标峰。紫外吸收降低至基线之后停止收峰,改用C液清洗柱子。最后用去离子水冲洗柱子,在将柱子保存在乙醇中。(5)置换与浓缩:用20~80kD100~300cm2膜包将收集到的蛋白溶液进行浓缩与置换。(6)冷冻干燥为晶体状干粉。2.根据权利要求1所述适合中试量产的高纯度牛血清白蛋白纯化工艺,其特征在于:所述步骤(1)中,配成牛血清白蛋白的浓度为10~20mg/ml。3.根据权利要求1所述适合中试量产的高纯度牛血清白蛋白纯化工艺,其特征在于:所述步骤(2)中,配制平衡缓冲液A的pH为2~6。4.根据权利要求1所述适合中试量产的高纯度牛血清白蛋...
【专利技术属性】
技术研发人员:孙永跃,何程铖,
申请(专利权)人:天津理工大学,天津泰德合众生物科技发展有限公司,
类型:发明
国别省市:天津,12
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