The invention relates to the field of Biomedical Engineering technology, and discloses a full-human PD_L1 monoclonal antibody and its preparation method, and identifies its biological activity. The human antibody provided by the invention is screened from the constructed human high throughput synthetic bacteriophage display library, has low immunogenicity, and can specifically bind to the extracellular domain PD_L1 protein, block the binding of PD1 to PD_L1, and restore the function of T cells. It can be used as an immunological checkpoint inhibitor to provide an effective means for the treatment of PD L1 positive cancers.
【技术实现步骤摘要】
全人源PD-L1单克隆抗体及其制备方法和应用
本专利技术属于生物医药工程
,具体涉及一种全人源PD-L1单克隆抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
T细胞的活化是免疫系统发挥作用的重要步骤,不仅需要抗原递呈细胞(APC)所提供的第一信号,同时也受到共刺激信号(第二信号)的调节。共刺激信号是一类细胞表面的膜蛋白,起到协同调节T细胞增殖、活化及分化的作用。程序性死亡因子1配体1(programmeddeath1ligand1,PD-L1)又称CD274,为B7家族成员,是PD-1的配体。PD-L1属于I型跨膜蛋白,共290个氨基酸,包含1个IgV样区、1个IgC样区、1个跨膜疏水区和1个由30个氨基酸组成的胞内区。与其他B7家族分子不同的是,PD-L1具有负向调节免疫应答的作用。研究发现,PD-L1主要表达于活化的T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突状细胞等,除淋巴细胞外,PD-L1也表达于其他多种组织如胸腺、心脏、胎盘等的内皮细胞,以及各类非淋巴系如黑色素瘤、肝癌、胃癌、肾细胞癌、卵巢癌、结肠癌、乳腺癌、食道癌、头颈癌等。PD-L1在调节自身反应性T、B细胞和免疫耐受方面具有一定广泛性,并且在外周组织T和B细胞应答中起作用。PD-L1在肿瘤细胞上的高表达与癌症患者的不良预后相关。与PD-L1相结合的程序性死亡因子1(programmeddeath-1,PD-1)又称CD279,是CD28家族成员,其胞质区含有2个酪氨酸残基,靠近N端的1个位于免疫受体酪氨酸抑制基序(immunoreceptortyrosine-basedinhibitorymotif,ITIM ...
【技术保护点】
1.一种全人源PD‑L1单克隆抗体,其特征在于:包含轻链LCDR1、LCDR2、LCDR3和重链HCDR1、HCDR2、HCDR3;所述轻链LCDR1序列是RASQTVIGX1YLA(SEQ ID NO:1)或与其具有至少80%序列同一性的同源序列;所述轻链LCDR2序列是FGTSFRAT(SEQ ID NO:2)或与其具有至少80%序列同一性的同源序列;所述轻链LCDR3序列是LQX2QGFPX3T(SEQ ID NO:3)或与其具有至少80%序列同一性的同源序列;所述重链HCDR1序列是SGFTFDX4YWMH(SEQ ID NO:4)或与其具有至少80%序列同一性的同源序列;所述重链HCDR2序列是X5IX6DX7GGX8TX9YADSVKS(SEQ ID NO:5)或与其具有至少80%序列同一性的同源序列;所述重链HCDR3序列是SQDLAY(SEQ ID NO:6)或与其具有至少80%序列同一性的同源序列;其中X1是S或R;X2是T或R;X3是Y或L;X4是R或E;X5是T或S;X6是D或T;X7是S或T;X8是E或V;X9是N或H。
【技术特征摘要】
1.一种全人源PD-L1单克隆抗体,其特征在于:包含轻链LCDR1、LCDR2、LCDR3和重链HCDR1、HCDR2、HCDR3;所述轻链LCDR1序列是RASQTVIGX1YLA(SEQIDNO:1)或与其具有至少80%序列同一性的同源序列;所述轻链LCDR2序列是FGTSFRAT(SEQIDNO:2)或与其具有至少80%序列同一性的同源序列;所述轻链LCDR3序列是LQX2QGFPX3T(SEQIDNO:3)或与其具有至少80%序列同一性的同源序列;所述重链HCDR1序列是SGFTFDX4YWMH(SEQIDNO:4)或与其具有至少80%序列同一性的同源序列;所述重链HCDR2序列是X5IX6DX7GGX8TX9YADSVKS(SEQIDNO:5)或与其具有至少80%序列同一性的同源序列;所述重链HCDR3序列是SQDLAY(SEQIDNO:6)或与其具有至少80%序列同一性的同源序列;其中X1是S或R;X2是T或R;X3是Y或L;X4是R或E;X5是T或S;X6是D或T;X7是S或T;X8是E或V;X9是N或H。2.一种如要求1所述的全人源PD-L1单克隆抗体的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)构建噬菌体展示文库:通过检索数据库人源和鼠源的抗体基因序列,比较分析抗体骨架序列和CDR区在人类抗体库中的出现频率和偏向性,确定了构建抗体库的germline基因和CDR区,其中,CDR区使用简并密码子进行了长度多样性和序列多样性设计,全部轻链CDR基因库和重链的CDR1及CDR2基因采用亚磷酰胺三酯基因合成方法合成,重链CDR3基因采用高通量芯片基因合成方法合成;(2)PD-L1的表达纯化:构建含有PD-L1-ECD序列(GenBankAccession:AY714...
【专利技术属性】
技术研发人员:徐婷,周伟,崔智强,叶洪涛,鲍文英,杨文静,宋玉,范清林,宋礼华,
申请(专利权)人:安徽安科生物工程集团股份有限公司,
类型:发明
国别省市:安徽,34
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