一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌二联灭活疫苗及其应用制造技术

本发明专利技术属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌血清2型、5型、7型二联灭活疫苗。该疫苗是由猪肺炎支原体抗原、三种副猪嗜血杆菌血清型抗原以及免疫佐剂制成，其中猪肺炎支原体抗原为已灭活的猪肺炎支原体HNMhy1株抗原，所述猪肺炎支原体HNMhy1株，保藏编号为CGMCC NO：13858，保藏日期：2017年5月26日；所述三种副猪嗜血杆菌血清型抗原分别为已灭活的副猪嗜血杆菌2型HN1553株、5型HN1570株和7型HN1565株抗原，其中所述副猪嗜血杆菌2型HN1553株，保藏编号为CGMCC NO：16801；所述副猪嗜血杆菌血清5型HN1570株，保藏编号为CGMCC NO：16802；所述副猪嗜血杆菌血清7型HN1565株，保藏编号为CGMCC NO：16803；所述免疫佐剂为氢氧化铝胶佐剂。

A two inactivated vaccine of Mycoplasma pneumoniae and Haemophilus Haemophilus and its application

The invention belongs to the technical field of veterinary biologics, and specifically relates to a two inactivated vaccine of Mycoplasma pneumoniae and Haemophilus Haemophilus serotypes 2, 5 and 7. The vaccine is made from Mycoplasma pneumoniae antigens, three Haemophilus Haemophilus serotype antigens and immune adjuvants. Mycoplasma pneumoniae antigens are inactivated Mycoplasma pneumoniae HNMhy1 strain antigens. The Mycoplasma pneumoniae HNMhy1 strain is kept at CGMCC NO:13858 and the storage date is May 26, 2017. The three serotype antigens of Haemophilus Haemophilus are respectively Inactivated Haemophilus Haemophilus type 2 HN1553 strain, type 5 HN1570 strain and type 7 HN1565 antigen, of which the Haemophilus influenzae type 2 HN1553 strain is kept at CGMCC NO:16801; the Haemophilus Haemophilus sera 5 type HN1570 strain, the storage number is CGMCC NO:16802; the Haemophilus Haemophilus sera 7 type HN1565 strain, the preservation number is CGMCC HN1565; the immune adjuvant is Aluminum hydroxide gel adjuvant.

【技术实现步骤摘要】
一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌二联灭活疫苗及其应用
本专利技术属于兽用生物制品
，具体涉及一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌血清2型、5型、7型二联灭活疫苗制备及应用。
技术介绍
：猪肺炎支原体（Mycoplasmahyopneumoniae，Mhp）是猪支原体`肺炎（MycoplasmalpneumoniaofSwine，MPS）的主要病原。猪支原体肺炎是一种慢性、接触性传染病，具有高发病率和低病死率的特点，主要表现为食欲减退、发热、咳嗽、气喘、呼吸困难等症状，患病猪生长缓慢，饲料转化率下降，常诱发其他病原的感染，特别是免疫抑制性病原如猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRSV）、猪圆环病毒2型（Porcinecirovirus2，PCV-2），引起免疫抑制诱导，常因同时继发细菌感染引起死亡，是世界上最主要的猪病之一。本病广泛存在于世界各地，持续感染且难以治愈，同时由于感染猪较高的治疗费用并造成生产性能降低，从而给养猪业造成严重危害。副猪嗜血杆菌（Haemophilusparasuis,HPS）是巴氏杆菌科的一种革兰氏阴性多形态小杆菌，为猪副猪嗜血杆菌病的病原菌，主要引起猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎。本病在全世界范围内广泛存在，德国学者Glsser于1910年首先报道，又称为革拉氏病（Glsser'sdisease）。副猪嗜血杆菌可以感染各种年龄段的猪，主要发生在断奶后和保育阶段，主要感染2周龄到4月龄的猪，发病率一般在10%～15%，严重时死亡率可达50%，该病已成为近年来断奶、保育仔猪死亡的主要原因之一，是临床混合感染的主要病原之一，给养猪业造成较大的经济损失，严重影响养猪业的健康发展。副猪嗜血杆菌临床血清型较多，标准分型有15个血清型，临床上还有20%以上的不可分型菌株，该病原呈世界性分布，各地流行菌株血清型不一，各血清型之间缺乏免疫交叉保护能力。临床防控副猪嗜血杆菌病的两种途径有抗生素使用和疫苗免疫，但由于国内兽用抗生素不规范滥用及长期使用，导致越来越多的细菌对抗生素产生了耐用性，副猪嗜血杆菌临床分离株耐药现象越来越明显，严重影响了抗生素的杀菌作用。疫苗免疫接种是防控副猪嗜血杆菌病的最佳途径，应根据流行的血清型选择对应的单价或多价疫苗。国内副猪嗜血杆菌商品化疫苗多为针对血清4型、5型、13型的二价或三价疫苗，与各地区主要流行菌株血清型差异较大，导致防控效果不佳。副猪嗜血杆菌各血清型之间缺乏免疫交叉保护，副猪嗜血杆菌灭活疫苗只对同一血清型的菌株有抵抗保护作用，一旦流行菌株血清型与疫苗血清型不符，该疫苗对猪群就无保护作用。猪肺炎支原体在临床上与副猪嗜血杆菌经常混合感染或继发感染，二者症状相似，且药物治疗效果均不佳，2型、5型和7型副猪嗜血杆菌也是临床分离比例较高的血清型，因此，亟需一种新的具有安全、免疫原性好的菌株制备的疫苗对支原体肺炎和副猪嗜血杆菌病进行防治。
技术实现思路
：针对目前猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌混合感染，副猪嗜血杆菌各血清型之间缺少免疫交叉保护，副猪嗜血杆菌灭活疫苗只对同一血清型的菌株有抵抗保护的问题，本专利技术提供一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌血清2型、5型、7型二联灭活疫苗。本专利技术解决其技术问题所采用的方案是：一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌二联灭活疫苗，包括猪肺炎支原体抗原和三种副猪嗜血杆菌血清型抗原，所述猪肺炎支原体抗原为已灭活的猪肺炎支原体HNMhy1株抗原，所述猪肺炎支原体HNMhy1株，保藏编号为CGMCCNO：13858，保藏日期：2017年5月26日；所述三种副猪嗜血杆菌血清型抗原分别为已灭活的副猪嗜血杆菌2型HN1553株、5型HN1570株和7型HN1565株抗原，其中所述副猪嗜血杆菌2型HN1553株，保藏编号为CGMCCNO：16801；所述副猪嗜血杆菌血清5型HN1570株，保藏编号为CGMCCNO：16802；所述副猪嗜血杆菌血清7型HN1565株，保藏编号为CGMCCNO：16803；三株副猪嗜血杆菌的保藏日期均为2018年11月9日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。上述的一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌二联灭活疫苗，所述灭活疫苗中猪肺炎支原体抗原、副猪嗜血杆菌2型、5型和7型血清型抗原比例为1∶1∶1∶1。上述的一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌二联灭活疫苗，所述猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌血清2型、5型、7型抗原的含量均为1×1010CFU/mL。上述的一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌二联灭活疫苗，还包括兽医学可接受的免疫佐剂，所述免疫佐剂为氢氧化铝胶佐剂。以上任一项所述的二联灭活疫苗在制备预防和治疗肺炎支原体和副猪嗜血杆菌相关病的药物中的应用。本专利技术的有益效果：1、本专利技术中的猪肺炎支原体菌株HNMhy1分离自发生典型呼吸困难、肺脏发生实变的保育猪，对保育猪具有较强的致病力，能够引起保育猪发生典型的喘气病症状，且具有良好的免疫原性。2、本专利技术从临床分离株中筛选出优势流行菌株副猪嗜血杆菌血清2型HN1553株、5型HN1570株、7型HN1565株菌株，其中菌株HN1553株和HN1570株对保育仔猪具有较强的致病力，引起保育猪发病死亡；菌株HN1565株对保育仔猪致病力稍弱，但能引起保育仔猪呼吸道症状，发育迟缓，饲料报酬降低；通过试验发现这三株副猪嗜血杆菌均有良好的免疫原性。3、利用本专利技术中的猪肺炎支原体菌株HNMhy1和副猪嗜血杆菌血清2型HN1553株、5型HN1570株、7型HN1565作为菌株抗原制备的灭活疫苗，可以很好的预防临床猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌血清2型、5型和7型的感染，同时该疫苗制备工艺简单，且安全性好，免疫效果好、免疫期长。附图说明：图1为菌株HNMhy1菌落4×显微镜下形态；图2为菌株HNMhy1菌体吉姆萨染色100×显微镜下形态；图3为菌株HNMhy1的PCR鉴定结果，图中的Marker为DL2000bp，从上到下依次为2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp，100bp；泳道1为引物MB1，MB2对猪肺炎支原体疫苗株168株的扩增结果；泳道2、3为引物MB1、MB2对菌株HNMhy1的扩增结果；泳道4为阴性对照；从图中可以看出，模板PCR扩增片段约为1502bp，证明扩增片段为目的片段，符合预期设计大小；图4为菌株HN1553菌落形态；图5为菌株HN1553菌体革兰氏染色100×显微镜下形态；图6为菌株HN1553的PCR鉴定及血清型PCR鉴定结果，图中的Marker为DL2000bp，从上到下依次为2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp，100bp；泳道1为引物P1、P2扩增HN1553株16SrRNA基因结果；泳道2为引物P3、P4扩增HN1553株WZX基因结果；泳道3为阴性对照；图7为菌株HN1570菌落形态；图8为菌株HN1570菌体革兰氏染色100×显微镜下形态；图9为菌株HN1570的PCR鉴定及血清型PCR鉴定结果，图中的Marker为DL2000bp，从上到下依次为2000bp、1000bp、750bp、500bp、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌二联灭活疫苗，其特征在于：包括猪肺炎支原体抗原和三种副猪嗜血杆菌血清型抗原，所述猪肺炎支原体抗原为已灭活的猪肺炎支原体HNMhy1株抗原，所述猪肺炎支原体HNMhy1株，保藏编号为CGMCC NO：13858，保藏日期：2017年5月26日；所述三种副猪嗜血杆菌血清型抗原分别为已灭活的副猪嗜血杆菌2型HN1553株、5型HN1570株和7型HN1565株抗原，其中所述副猪嗜血杆菌2型HN1553株，保藏编号为CGMCC NO：16801；所述副猪嗜血杆菌血清5型HN1570株，保藏编号为CGMCC NO：16802；所述副猪嗜血杆菌血清7型HN1565株，保藏编号为CGMCC NO：16803；三株副猪嗜血杆菌的保藏日期均为2018年11月9日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

【技术特征摘要】
1.一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌二联灭活疫苗，其特征在于：包括猪肺炎支原体抗原和三种副猪嗜血杆菌血清型抗原，所述猪肺炎支原体抗原为已灭活的猪肺炎支原体HNMhy1株抗原，所述猪肺炎支原体HNMhy1株，保藏编号为CGMCCNO：13858，保藏日期：2017年5月26日；所述三种副猪嗜血杆菌血清型抗原分别为已灭活的副猪嗜血杆菌2型HN1553株、5型HN1570株和7型HN1565株抗原，其中所述副猪嗜血杆菌2型HN1553株，保藏编号为CGMCCNO：16801；所述副猪嗜血杆菌血清5型HN1570株，保藏编号为CGMCCNO：16802；所述副猪嗜血杆菌血清7型HN1565株，保藏编号为CGMCCNO：16803；三株副猪嗜血杆菌的保藏日期均为2018年11月9日，保...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐引弟，王治方，张青娴，朱文豪，许峰，焦文强，李海利，郎利敏，张立宪，游一，王克领，
申请(专利权)人：河南省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：河南,41