一种鱼鳞明胶高抗氧化性肽的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种鱼鳞明胶高抗氧化性肽的制备方法，以鱼鳞为原料，对鱼鳞进行脱钙，再采用碱性蛋白酶和胰蛋白酶对鱼鳞进行二步酶解，获得鱼鳞明胶高抗氧化性肽。本发明专利技术以草鱼加工副产物鱼鳞为原料，酸法脱钙加速胶原蛋白的溶出，提高抗氧化肽的纯度，先采用碱性蛋白酶一步酶解，后胰蛋白酶对酶解物进行二步酶解，增加抗氧化肽含量。本发明专利技术制备高抗氧化肽的方法操作简单，无毒无害，容易实现，制得的抗氧化肽的•OH清除能力高于二丁基羟基甲苯（BHT），有良好的抗氧化性，在保健食品、医药、化妆品等领域具有很高的实用价值。

Preparation of a high antioxidant peptide from fish scale gelatin

The invention discloses a preparation method of fish scale gelatin high antioxidant peptide, which takes fish scale as raw material, decalcifies fish scale, and then uses alkaline protease and trypsin to hydrolyze fish scale in two steps to obtain fish scale gelatin high antioxidant peptide. The present invention uses fish scale, a by-product of grass carp processing, as raw material, to accelerate the dissolution of collagen by acid decalcification and improve the purity of antioxidant peptide. First, alkaline protease is used for one-step enzymatic hydrolysis, and then trypsin is used for two-step enzymatic hydrolysis to increase the content of antioxidant peptide. The method for preparing the high antioxidant peptide of the invention is simple in operation, non-toxic, harmless and easy to realize. The OH scavenging ability of the prepared antioxidant peptide is higher than that of dibutyl hydroxytoluene (BHT), and has good antioxidant property, and has high practical value in the fields of health food, medicine and cosmetics.

【技术实现步骤摘要】
一种鱼鳞明胶高抗氧化性肽的制备方法
本专利技术属于鱼明胶材料
，尤其涉及一种鱼鳞明胶高抗氧化性肽的制备方法。
技术介绍
我国水域辽阔，淡水鱼资源十分丰富，近年来，随着淡水鱼产量不断增加，淡水鱼加工业也随着增加。但在鱼糜等水产品加工高速发展的同时也会产生大量的副产物。研究表明，这些副产物含有大量的蛋白质、脂肪、矿物质元素等营养活性物质，但副产物一直被人们简单加工成饲料或者作为废弃物处理，这样不仅造成了资源浪费，经济损失，还污染环境。鱼鳞是淡水鱼加工过程中主要的副产物之一，含有大量的胶原蛋白等营养物质，因鱼鳞表面被羟基磷灰石等矿物质附着，导致鱼鳞一直没有被有效利用。在食品加工过程中，为了提高产品的品质，或延长商品的货架期，通常会加入一定的食品添加剂（如二丁基羟基甲苯），虽然有效的清除自由基、减缓氧化反应，防止食品酸败，但其安全系数较低，对人体健康也存在致癌的风险。抗氧化肽，是蛋白质通过酶解得到的介于一定分子量范围的具有清除体内氧自由基的能力并且可以起到抗氧化、防衰老活性作用的多肽，已成为研究热点。现在由于疯牛病、猪瘟等动物疾病、宗教信仰和素食者的饮食需求，导致哺乳动物多肽的来源受到一定限制，人们逐渐将目光慢慢转移到水产动物上。
技术实现思路
本专利技术提供了一种鱼鳞明胶高抗氧化性肽的制备方法，以鱼鳞为原料，对鱼鳞进行脱钙，再采用碱性蛋白酶和胰蛋白酶对鱼鳞进行二步酶解，获得鱼鳞明胶高抗氧化性肽。进一步地，所述制备方法具体步骤为：1、原料预处理：剔除鱼鳞表面的杂质，冲洗干净，烘干，再采用酸液对鱼鳞进行脱钙处理，脱钙后的鱼鳞冲洗干净并烘干；2、草鱼鱼鳞明胶的制备：将上述烘干后的鱼鳞加入水中，加热提取，提取后抽滤获得提取液，提取液冷冻干燥，获得冻干的鱼磷明胶；3、一步酶解：将所述冻干的鱼磷明胶溶解在蒸馏水中得到鱼鳞明胶溶液，采用碱性蛋白酶对所述鱼鳞明胶溶液进行一步酶解处理，酶解结束后灭酶，酶解液离心分离，取上清液进行冷冻干燥，获得冻干的酶解物；4、二步酶解：将所述冻干的酶解物配制成酶解物溶液，用胰蛋白酶进行二步酶解，酶解结束后灭酶，离心取上清液，即获得所述鱼鳞明胶高抗氧化性肽。进一步地，所述步骤1中，酸液为浓度0.3～0.7mol/L的盐酸，鱼鳞与盐酸的料液比为1:10～30g:mL，脱钙时间为1～3h。进一步地，所述步骤2中，所述加热提取的参数为：料液比为1:15～20g:mL，pH5.0～6.0，在80℃的条件下水浴加热提取2h以上，pH通过向水中滴加稀盐酸进行调节。进一步地，所述步骤3中，所述鱼鳞明胶溶液中鱼磷明胶质量分数为10%，所述碱性蛋白酶添加量为鱼鳞明胶溶液中鱼鳞明胶质量的1%，一步酶解条件为pH8.0、酶解温度50℃、酶解时间4h，通过0.1mol/LNaOH溶液将pH调节到8.0。进一步地，所述步骤4中，所述酶解物溶液中冻干的酶解物配比为50～100mg/mL，胰蛋白酶的添加质量与酶解物溶液的质量比为0.5%～2%、二步酶解调条件为pH7～9、温度为40～60℃，酶解时间40～60min，通过0.1mol/LNaOH调节溶液pH。进一步地，所述二步酶解参数为：酶解物溶液中冻干的酶解物配比为100mg/mL、pH7.75、温度53.19℃、时间50min。进一步地，所述鱼鳞为草鱼鱼鳞。通过上述技术方案可知，本专利技术的有益效果在于：本专利技术以草鱼加工副产物鱼鳞为原料，酸法脱钙加速胶原蛋白的溶出，提高抗氧化肽的纯度，先采用碱性蛋白酶一步酶解，后胰蛋白酶对酶解物进行二步酶解，增加抗氧化肽含量。本专利技术制备高抗氧化肽的方法操作简单，无毒无害，容易实现，制得的抗氧化肽的•OH清除能力高于二丁基羟基甲苯（BHT），有良好的抗氧化性，在保健食品、医药、化妆品等领域具有很高的实用价值。具体实施方式下面结合实施例进行详细的说明：实施例1一种鱼鳞明胶高抗氧化性肽的制备方法，具体步骤为1、原料预处理：剔除草鱼鱼鳞表面中的杂质，用自来水冲洗干净，40℃烘干备用。采用0.3mol/L盐酸对鱼鳞进行脱钙，鱼鳞与盐酸的料液比为1:10（g:mL），脱钙时间为1h。脱钙之后用自来水冲洗3-5次，烘干。2、草鱼鱼鳞明胶的制备：将上述的干鱼鳞加入到蒸馏水中，鱼鳞与水的料液比为1:15（g:mL），pH5.5(用0.1mol/L的盐酸调节至指定pH)，在80℃的条件下水浴加热提取2h。抽滤之后的提取液进行冷冻干燥。3、一步酶解：用蒸馏水将冻干的鱼磷明胶溶解得到鱼鳞明胶质量配比为10%的鱼鳞明胶溶液。加入碱性蛋白酶进行酶解，碱性蛋白酶添加量为鱼鳞明胶质量的1%，酶解条件为pH8.0(用0.1mol/L的NaOH水溶液调节至指定pH)、温度50℃、时间4h。酶解结束之后煮沸10min进行灭酶，酶解液冷却后4000r/min离心10min，上清液进行冻干。4、二步酶解：将上述冻干的酶解物溶解在水中配制成酶解物配比为50mg/mL的溶液，加入胰蛋白酶进行酶解，胰蛋白酶的添加量为0.5%、pH7.8(用0.1mol/L的NaOH水溶液调节至指定pH)、温度为40℃，酶解时间40min。酶解结束后煮沸灭酶酶10min，离心取上清液，冷冻干燥，即获得所述鱼鳞明胶高抗氧化性肽。羟自由基清除能力测定将上述二步酶解的酶解物配制成1mg/mL的溶液。500μL的样品与150μL8mMFeSO4、125μL20mMH2O2、500μL3mM水杨酸（乙醇溶解），37°C水浴反应20min，离心1min。上清液于510nm处测吸光值。500μL蒸馏水代替样品的吸光值为，125μL甲醇代替H2O2的吸光值为。相同浓度的BHT作为阳性对照，实验重复三次。·OH清除率根据公式进行计算：实验研究表明，碱性-胰蛋白酶水解物的•OH清除率的IC50=0.66mg/mL，BHT的•OH清除率的IC50=0.78mg/mL。实施例2一种鱼鳞明胶高抗氧化性肽的制备方法，具体步骤为1、原料预处理：剔除草鱼鱼鳞表面中的杂质，用自来水冲洗干净，40℃烘干备用。采用0.3mol/L盐酸对鱼鳞进行脱钙，鱼鳞与盐酸的料液比为1:20（g:mL），脱钙时间为1h。脱钙之后用自来水冲洗3-5次，烘干。2、草鱼鱼鳞明胶的制备：将上述的干鱼鳞加入到蒸馏水中，鱼鳞与水的料液比为1:15（g:mL），pH5.5(用0.1mol/L的盐酸调节至指定pH)，在80℃的条件下水浴加热提取2h。抽滤之后的提取液进行冷冻干燥。3、一步酶解：用蒸馏水将冻干的鱼磷明胶溶解得到鱼鳞明胶质量配比为10%的鱼鳞明胶溶液。加入碱性蛋白酶进行酶解，碱性蛋白酶添加量为鱼鳞明胶质量的1%，酶解条件为pH8.0(用0.1mol/L的NaOH水溶液调节至指定pH)、温度50℃、时间4h。酶解结束之后煮沸10min进行灭酶，酶解液冷却后4000r/min离心10min，上清液进行冻干。4、二步酶解：将上述冻干的酶解物溶解在水中配制成酶解物配比为50mg/mL的溶液，加入胰蛋白酶进行酶解，胰蛋白酶的添加量为1%、pH7.8(用0.1mol/L的NaOH水溶液调节至指定pH)、温度为50℃，酶解时间50min。酶解结束后煮沸灭酶酶10min，离心取上清液，冷冻干燥，即获得所述鱼鳞明胶高抗氧化性肽。测定鱼鳞明胶高抗氧化性肽的·OH清除能力，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鱼鳞明胶高抗氧化性肽的制备方法，其特征在于，以鱼鳞为原料，对鱼鳞进行脱钙，再采用碱性蛋白酶和胰蛋白酶对鱼鳞进行二步酶解，获得鱼鳞明胶高抗氧化性肽。

【技术特征摘要】
1.一种鱼鳞明胶高抗氧化性肽的制备方法，其特征在于，以鱼鳞为原料，对鱼鳞进行脱钙，再采用碱性蛋白酶和胰蛋白酶对鱼鳞进行二步酶解，获得鱼鳞明胶高抗氧化性肽。2.根据权利要求1所述的一种鱼鳞明胶高抗氧化性肽的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体步骤为：1)、原料预处理：剔除鱼鳞表面的杂质，冲洗干净，烘干，再采用酸液对鱼鳞进行脱钙处理，脱钙后的鱼鳞冲洗干净并烘干；2)、草鱼鱼鳞明胶的制备：将上述烘干后的鱼鳞加入水中，加热提取，提取后抽滤获得提取液，提取液冷冻干燥，获得冻干的鱼磷明胶；3)、一步酶解：将所述冻干的鱼磷明胶溶解在蒸馏水中得到鱼鳞明胶溶液，采用碱性蛋白酶对所述鱼鳞明胶溶液进行一步酶解处理，酶解结束后灭酶，酶解液离心分离，取上清液进行冷冻干燥，获得冻干的酶解物；4)、二步酶解：将所述冻干的酶解物配制成酶解物溶液，用胰蛋白酶进行二步酶解，酶解结束后灭酶，离心取上清液，即获得所述鱼鳞明胶高抗氧化性肽。3.根据权利要求2所述的一种鱼鳞明胶高抗氧化性肽的制备方法，其特征在于，所述步骤1中，酸液为浓度0.3～0.7mol/L的盐酸，鱼鳞与盐酸的料液比为1:10～30g:mL，脱钙时间为1～3h。4.根据权利要求2所述的一种鱼鳞明胶高抗氧化性肽的制备方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：涂宗财，李军，张露，卢素珍，
申请(专利权)人：江西师范大学，
类型：发明
国别省市：江西,36