一种用于真姬菇菌种的木屑保藏培养基及其保藏方法技术

本发明专利技术公开了一种用于真姬菇菌种的木屑保藏培养基及其保藏方法，属于菌种保藏领域。所述木屑保藏培养基包括上下两层培养基，所述上层培养基由木屑、麸皮、石膏按照质量比10‑12：2‑3：0.2‑0.3组成，所述下层培养基由木屑组成，所述上层培养基与下层培养基质量比为12‑15：40‑45，所述木屑为浸泡于水或盐溶液至含水量达到最大值或自身含水量达最大值的木屑。本发明专利技术的保藏培养基可以使菌种在中期以及长期的保存中依然保持活力高、不退化的特性，且培养基制备以及保藏操作方法简便、培养基价格低廉、获得的菌种纯度高，可在工业生产中得到广泛应用，具有显著的市场前景。

A sawdust preservation medium for Agaricus blazei strains and its preservation method

The invention discloses a sawdust preservation medium for Agaricus blazei strains and a preservation method thereof, belonging to the field of strain preservation. The sawdust preservation medium comprises two layers, the upper layer medium is composed of sawdust, bran and gypsum according to the mass ratio of 10_12:2_3:0.2_0.3, the lower layer medium is composed of sawdust, the mass ratio of the upper layer medium to the lower layer medium is 12_15:40_45, and the sawdust is soaked in water or salt solution to reach the maximum water content or its own water content. Sawdust with maximum volume. The preservation medium of the invention can keep the bacteria high vitality and non-degradation in medium and long term preservation, and the preparation of the culture medium and the preservation operation method are simple, the cost of the culture medium is low, and the purity of the obtained bacteria is high. The preservation medium can be widely used in industrial production and has a significant market prospect.

【技术实现步骤摘要】
一种用于真姬菇菌种的木屑保藏培养基及其保藏方法
本专利技术属于菌种保藏领域，具体涉及一种真姬菇菌种的木屑保藏培养基及其保藏方法。
技术介绍
真姬菇(Hypslzygusmarmoreus)是目前进入工厂化生产的重要食用菌之一，是一种营养丰富的食用兼药用的珍稀食用菌，含有人体所需的八种必须氨基酸，具有提高人体免疫力、预防衰老、延长寿命等多种功效，享有“闻则松茸，食则玉蕈”的美誉。对于食用菌工厂化周期生产来说,菌种工作必然是重中之重,菌种的纯度和质量决定着后期出菇的产量和质量,而一株优良的菌种如何保藏下来延长使用周期则是菌种工作中必不可缺的一项工作。目前真姬菇的菌种保藏方法有斜面保藏法,麦粒保藏法,生理盐水保藏法等,斜面保藏法的保藏周期不长,一般半年左右,时间长,培养基干涸,菌丝变黄老化变异；麦粒保藏法制作工艺复杂,麦粒浸泡时间不好掌握,易产生粉孢子；生理盐水保藏操作简单,但存放时间长了,培养基易漂浮出水面,造成露出部分干涸,菌种老化,容易变异,活化时易产生粉孢子，影响出菇产量和质量。
技术实现思路
本专利技术所解决的技术问题是克服现有菌种保藏方法中存在的缺陷，提供一种保持真姬菇菌种活力高、不退化、操作简便、价格低廉、菌种纯度高、菌种活力高，且均无气生菌丝生成，易于推广的真姬菇菌种的木屑保藏方法，以拓宽真姬菇菌种保藏方法的范围。为了实现上述目的，本专利技术首先提供一种用于真姬菇菌种的木屑保藏培养基，所述木屑保藏培养基包括上下两层培养基，所述上层培养基由木屑、麸皮、石膏按照质量比10-12：2-3：0.2-0.3组成，所述下层培养基由木屑组成，所述上层培养基与下层培养基质量比为12-15：40-45，所述木屑为自身含水量达最大值的木屑，或将干木屑通过用水或盐溶液充分浸泡至木屑含水量达最大值的木屑。所述将干木屑通过浸泡得到的含水量达最大值的木屑中，所述含水量达最大值指的是将干木屑持续浸泡在水或盐溶液中，通过过滤定时测定木屑含水量，通过持续浸泡，不断测量木屑含水量，一直浸泡至木屑的含水量不再增加为止，即得到木屑含水量达最大值的木屑。所述木屑为自身含水量达最大值的木屑是指木屑自身含有水，经过滤，测量木屑的含水量后，即使经过持续浸泡后，木屑含水量也不再增加，则该木屑为自身含水量达最大值的木屑。所述过滤为常规用滤布进行的过滤操作。优选地，所述木屑的含水量最大值为30％-80％。优选地，所述木屑为栎木、杨木或腐木木屑中的一种。更优选地，所述木屑为栎木木屑，所述栎木木屑中，干栎木木屑与水或盐溶液浸泡比例为100g：400-450ml，浸泡时间为24-28h。经测定所述浸泡后栎木木屑的含水量最大值为40％-45％。更优选地，所述木屑为杨木木屑，所述杨木木屑中，干杨木木屑与水或盐溶液浸泡比例为100g：800-900ml，浸泡时间为5-7h。经测定所述杨木木屑的含水量最大值为55％-65％。更优选地，所述木屑为腐木木屑，所述腐木木屑无需浸泡水或盐溶液，自身含水量已达到最大值。所述腐木木屑的含水量最大值为65％-70％。优选地，所述盐溶液组成为：磷酸二氢钾0.05％，硫酸镁0.05％，余量为水，pH7.0的溶液。本专利技术的另一目的是提供利用上述木屑保藏培养基保藏真姬菇菌种的方法，具体步骤如下：(1)将干木屑过筛，选取粒径2-3目的木屑，浸泡于水或盐溶液中，直至过滤后木屑含水量达最大值，过滤，备用；或将自身含水量已达最大值的木屑经同样方法过筛后，选取粒径2-3目的木屑，过滤，备用；(2)将所述木屑保藏培养基的各成分按比例装入培养瓶中，将培养瓶包上透气膜，121℃，灭菌2.5h；(3)向所述培养瓶中接入真姬菇菌块，25℃恒温培养箱培养20天。(4)待所述培养瓶内的木屑保藏培养基表面长满菌丝后，将所述培养瓶置于4-10℃条件保藏。优选地，所述步骤(1)中，利用筛子进行过筛，所述筛子的孔径为2目和3目。优选地，所述步骤(2)中，所述培养瓶在装入木屑保藏培养基之前经121℃，灭菌1h。优选地，所述步骤(2)中，所述木屑保藏培养基在装入培养瓶时，需先装下层，边装边摇，后装上层，轻轻摇动，减少空隙，使装好的培养基分为上下两层，并保证培养瓶外表面及瓶口无培养基残留。优选地，所述步骤(3)中，所述真姬菇菌块为从供试菌种平板中筛选的生长健壮、长势良好的菌种。优选地，所述步骤(3)中，所述真姬菇菌块直径为6-12mm，接入菌块数目为2-3块。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为:本专利技术的木屑保藏培养基中具有的大量的有益真姬菇生长的木质素、微量元素等能满足真姬菇菌种的基本生长需要，又保持了菌种原有的活性，菌种纯度高，培养基内菌丝生长速度快，生长代谢活跃。本专利技术提供的真姬菇菌种的木屑保藏培养基及应用方法，保藏效果优于现有的斜面保藏法，保藏后菌丝活力与一代母种相同，为真姬菇菌种的简便保藏和规模化栽培提供了有力保障，具有较高的应用价值、经济意义及社会意义。1、本专利技术中采取双层培养基的结构，上层为木屑、麸皮、石膏混合物，下层为木屑，培养基的这种结构可有效保证菌块在接种后在25℃下继续生长20天，以保证保藏过程的菌丝需求量，而在此期间菌丝主要在上层培养基中生长，本专利技术的上层培养基可有效提供菌丝正常生长的需要的营养元素。另一方面，本专利技术双层培养基同时可有效满足此后培养瓶在进入低温条件下菌种保藏阶段的要求，有效保证菌丝处于新陈代谢最低水平，保持菌丝生长繁殖处于不活跃状态，符合菌体对于营养的较少的需求，本专利技术特将培养基下层设置为纯木屑。而经过对比实验发现，在使用双侧培养基时，对于保存的菌种的生长活性以及酶活性方面相较于单层的混合培养基均具有显著的提高，而仅适用单层的混合培养基则无法达到本专利技术的技术效果。2、充分浸泡木屑：本专利技术中先将木屑单独浸泡于水或盐溶液中，通过调整浸泡时间，实现木屑完全泡透，获得过滤后含水量达到最大值的浸泡后木屑，这样做不仅有效防止木屑出现夹心现象，避免在后续的灭菌过程中出现灭菌不彻底的情况，进而可避免染菌问题。3、单独浸泡木屑：区别于现有技术中培养基各成分混合浸泡水或盐溶液中，本专利技术仅将木屑单独浸泡于水或盐溶液中，一方面为培养基的后续分层装瓶提供方便。此外用盐溶液单独浸泡木屑，除了达到前面提到的目的外，还可以使木屑在浸泡过程中充分吸收和吸附一定浓度的营养成分，给保藏过程中的真姬菇菌丝提供营养补助，有效保存菌种的生长活性。此外仅浸泡木屑还可降低成本。本专利技术通过选择木屑粒径为2-3目，该粒径范围的木屑更能有效地促进菌丝体的生长。4、本专利技术采用石膏作为钙元素的主要来源，供给菌种的生长和保藏，而针对于真姬菇菌种的保藏，相比较于石灰粉等其他含钙成分，本专利技术对于菌种保藏后期的生长活性以及酶活性均有协同的促进作用。具体实施方式：下面通过具体的实施方案叙述本专利技术。除非特别说明，本专利技术中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本专利技术的范围，本专利技术的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本专利技术实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本专利技术的保护范围。以下结合具体实施例对本专利技术进行进一步说明。实施例1：纯水浸泡的栎木木屑保藏培养基在真姬菇菌种保藏中的应用(1)使用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于真姬菇菌种的木屑保藏培养基，其特征在于：所述木屑保藏培养基包括上下两层，所述上层培养基由木屑、麸皮、石膏按照质量比10‑12：2‑3：0.2‑0.3组成，所述下层培养基由木屑组成，所述上层培养基与下层培养基质量比为12‑15：40‑45，所述木屑为自身含水量达最大值的木屑，或将干木屑通过用水或盐溶液充分浸泡至木屑含水量达最大值的木屑。

【技术特征摘要】
1.一种用于真姬菇菌种的木屑保藏培养基，其特征在于：所述木屑保藏培养基包括上下两层，所述上层培养基由木屑、麸皮、石膏按照质量比10-12：2-3：0.2-0.3组成，所述下层培养基由木屑组成，所述上层培养基与下层培养基质量比为12-15：40-45，所述木屑为自身含水量达最大值的木屑，或将干木屑通过用水或盐溶液充分浸泡至木屑含水量达最大值的木屑。2.如权利要求1所述一种用于真姬菇菌种的木屑保藏培养基，其特征在于：所述木屑为栎木、杨木或者腐木木屑中的一种。3.如权利要求2所述一种用于真姬菇菌种的木屑保藏培养基，其特征在于：所述木屑为栎木木屑，所述栎木木屑中，干栎木木屑与水或盐溶液浸泡比例为100g：400-450ml，浸泡时间为24-28h。4.如权利要求2所述一种用于真姬菇菌种的木屑保藏培养基，其特征在于：所述木屑为杨木木屑，所述杨木木屑中，干杨木木屑与水或盐溶液浸泡比例为100g：800-900ml，浸泡时间为5-7h。5.如权利要求2所述一种用于真姬菇菌种的木屑保藏培养基，其特征在于：所述木屑为腐木木屑，所述腐木木屑含水量最大值为65％-70％。...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱华玲，班立桐，黄亮，王玉，杨红澎，孙宁，
申请(专利权)人：天津农学院，
类型：发明
国别省市：天津,12