一种阿巴帕肽的制备方法技术

本发明专利技术涉及多肽药物制备技术领域，提供了一种阿巴帕肽的制备方法，首先在缩合体系作用下，以Fmoc保护的氨基树脂为载体，将全Fmoc保护氨基酸、Fmoc‑Leu‑Leu‑OH二肽片段和Fmoc‑Arg(Pbf)‑Arg(Pbf)‑Arg(Pbf)‑OH三肽片段按照阿巴帕肽主链肽序从C端至N端的顺序进行缩合，得到阿巴帕肽‑氨基树脂；再将阿巴帕肽‑氨基树脂进行裂解、纯化和冻干处理，得到阿巴帕肽。本发明专利技术提供的制备方法步骤简单、原料消耗低，并且产品产率高、纯度高，适合规模化工业生产。

A Method for the Preparation of Abapaptide

The invention relates to the field of polypeptide drug preparation technology, and provides a preparation method of abapa peptide. Firstly, under the action of condensation system, all Fmoc protected amino acids, Fmoc Leu OH dipeptide fragments and Fmoc Arg (Pbf)Arg (Pbf)Arg (Pbf)OH tripeptide fragments are condensed from C-terminal to N-terminal according to the sequence of main chain peptide of abapa peptide. Abapaptide and amino resin were obtained. Abapaptide was obtained by pyrolysis, purification and freeze-drying. The preparation method provided by the invention has simple steps, low consumption of raw materials, high yield and high purity, and is suitable for large-scale industrial production.

【技术实现步骤摘要】
一种阿巴帕肽的制备方法
本专利技术涉及多肽药物制备
，特别涉及一种阿巴帕肽的制备方法。
技术介绍
甲状旁腺激素(PTH)是一种由甲状旁腺主细胞分泌的，调节体内钙和磷代谢的多肽类激素，其C端肽链与PTH-II受体结合可促进骨细胞凋亡、N端肽链与PTH-I受体结合可促进骨骼重建。Lilly公司以人甲状旁腺素(hPTH)N-末端34个氨基酸残基研制的用于治疗骨质疏松症的药物特立帕肽(Teriparatide)于2002年12月被FDA批准上市。阿巴帕肽，英文名称为Abaloparatide，是由RadiusHealth公司研制的一种新型甲状旁腺激素相关肽(PTHrP)，它是PTH-I受体强有力的选择性激活剂，可以增加骨矿物质含量、骨密度以及骨强度，促进骨骼形成，已于2017年4月28日被FDA批准上市，其商品名称为Tymlos。阿巴帕肽经皮下注射，用于治疗处于骨折风险或对其它治疗药物无效的绝经后妇女的骨质疏松症，可有效降低新发椎体和非椎体骨折率。与特立帕肽相比，阿巴帕肽能够更好的降低骨折率和高钙血症发生率。阿巴帕肽是由34个氨基酸残基组成的多肽，分子式为C174H300N56O49，分子量为3960.64g/mol，CAS号为247062-33-5，其结构如下：Ala1-Val2-Ser3-Glu4-His5-Gln6-Leu7-Leu8-His9-Asp10-Lys11-Gly12-Lys13-Ser14-Ile15-Gln16-Asp17-Leu18-Arg19-Arg20-Arg21-Glu22-Leu23-Leu24-Glu25-Lys26-Leu27-Leu28-Aib29-Lys30-Leu31-His32-Thr33-Ala34-NH2。专利US6921750B2公开了Boc策略固相合成阿巴帕肽，该策略反复使用TFA切除Boc保护基，同时使用危险性的强酸氢氟酸对肽树脂进行裂解。专利CN106146648A公开了阿巴帕肽的制备方法，首先采用固相合成的方法合成3个肽树脂片段，随后将肽片段2和3与肽树脂片段1进行连接。然而该方法肽片段2和3进行缩合之前需要冻干过程，并且肽树脂片段2和3的生成需要使用大量昂贵的2-CTC树脂，导致生产成本增加。专利CN108047329A公开了阿巴帕肽的制备方法，首先采用液相合成法合成Fmoc-Thr(OtBu)-Ala-OH、Fmoc-Lys(Boc)-Gly-OH、Fmoc-Ala-Val-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Glu(OtBu)-OH，再以氨基树脂作为固相合成的载体，按照阿巴帕肽的氨基酸序列从C端至N端依次缩合α-NH2带有Fmoc保护基的全保护氨基酸和上述所合成的二肽片段、四肽片段。该方法液相合成短肽较多，制备过程非常繁琐。因此，亟待开发一种过程简单、成本低，且产品收率高的阿巴帕肽的制备方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种阿巴帕肽的制备方法。本专利技术提供的制备方法步骤简单、成本低且产品产率高、纯度高。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种阿巴帕肽的制备方法，包括以下步骤：(1)在缩合体系作用下，以Fmoc保护的氨基树脂为载体，将全Fmoc保护氨基酸、Fmoc-Leu-Leu-OH二肽片段和Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH三肽片段进行缩合反应，得到阿巴帕肽-氨基树脂；所述缩合反应按照阿巴帕肽主链肽序从C端至N端的顺序进行缩合；(2)将步骤(1)得到的阿巴帕肽-氨基树脂进行裂解，得到阿巴帕肽粗肽；(3)将所述阿巴帕肽粗肽依次进行纯化和冻干处理，得到阿巴帕肽。优选地，所述步骤(1)中的Fmoc-Leu-Leu-OH二肽片段由以下方法制备得到：(Ⅰ)将Fmoc-Leu-OH和HOSu在DCC的作用下发生偶联反应，生成Fmoc-Leu-OSu；(Ⅱ)将步骤(Ⅰ)所述的Fmoc-Leu-OSu和H-Leu-OH在碱催化作用下发生偶联反应，生成Fmoc-Leu-Leu-OH。优选地，所述步骤(1)中的Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH三肽片段由以下方法制备得到：(a)将Fmoc-Arg(Pbf)-OH和HOSu在DCC的作用下发生偶联反应，生成Fmoc-Arg(Pbf)-OSu；(b)将步骤(a)所述的Fmoc-Arg(Pbf)-OSu和H-Arg(Pbf)-OH在碱催化作用下发生偶联反应，生成Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH；(c)将步骤(b)所述的Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH和HOSu在DCC的作用下发生偶联反应，生成Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OSu；(d)将步骤(c)所述的Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OSu和H-Arg(Pbf)-OH在碱催化作用下发生偶联反应，生成Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH。优选地，所述步骤(1)中缩合反应具体为：(A)将Fmoc保护的氨基树脂溶胀后，在去保护溶液的作用下脱Fmoc保护，得到脱保护的氨基树脂；(B)分别将全Fmoc保护氨基酸、Fmoc-Leu-Leu-OH二肽片段和Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH三肽片段与缩合体系混合后活化，得到活化氨基酸和肽片段；(C)将步骤(B)所述的活化氨基酸和肽片段与步骤(A)所述的脱保护的氨基树脂混合，进行氨基酸的缩合反应，得到阿巴帕肽-氨基树脂；所述步骤(A)和步骤(B)没有时间顺序的要求。优选地，所述步骤(A)中去保护溶液为哌啶和DMF的混合溶液，所述混合溶液中哌啶和DMF的体积比为1:(2～5)。优选地，所述缩合体系包括缩合剂和反应溶剂；所述缩合剂为DIC/HOBt、PyBOP/HOBt/DIEA或HATU/HOBt/DIEA；所述反应溶剂为DMF、DCM、NMP和DMSO中一种或几种。优选地，所述缩合反应缩合全Fmoc保护氨基酸、Fmoc-Leu-Leu-OH二肽片段和Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH三肽片段的顺序依次为：Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Thr(OtBu)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Aib-OH、Fmoc-Leu-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-Leu-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Leu-Leu-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmo本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种阿巴帕肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在缩合体系作用下，以Fmoc保护的氨基树脂为载体，将全Fmoc保护氨基酸、Fmoc‑Leu‑Leu‑OH二肽片段和Fmoc‑Arg(Pbf)‑Arg(Pbf)‑Arg(Pbf)‑OH三肽片段进行缩合反应，得到阿巴帕肽‑氨基树脂；所述缩合反应按照阿巴帕肽主链肽序从C端至N端的顺序进行缩合；(2)将步骤(1)得到的阿巴帕肽‑氨基树脂进行裂解，得到阿巴帕肽粗肽；(3)将所述阿巴帕肽粗肽依次进行纯化和冻干处理，得到阿巴帕肽。

【技术特征摘要】
1.一种阿巴帕肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在缩合体系作用下，以Fmoc保护的氨基树脂为载体，将全Fmoc保护氨基酸、Fmoc-Leu-Leu-OH二肽片段和Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH三肽片段进行缩合反应，得到阿巴帕肽-氨基树脂；所述缩合反应按照阿巴帕肽主链肽序从C端至N端的顺序进行缩合；(2)将步骤(1)得到的阿巴帕肽-氨基树脂进行裂解，得到阿巴帕肽粗肽；(3)将所述阿巴帕肽粗肽依次进行纯化和冻干处理，得到阿巴帕肽。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的Fmoc-Leu-Leu-OH二肽片段由以下方法制备得到：(Ⅰ)将Fmoc-Leu-OH和HOSu在DCC的作用下发生偶联反应，生成Fmoc-Leu-OSu；(Ⅱ)将步骤(Ⅰ)所述的Fmoc-Leu-OSu和H-Leu-OH在碱催化作用下发生偶联反应，生成Fmoc-Leu-Leu-OH。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH三肽片段由以下方法制备得到：(a)将Fmoc-Arg(Pbf)-OH和HOSu在DCC的作用下发生偶联反应，生成Fmoc-Arg(Pbf)-OSu；(b)将步骤(a)所述的Fmoc-Arg(Pbf)-OSu和H-Arg(Pbf)-OH在碱催化作用下发生偶联反应，生成Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH；(c)将步骤(b)所述的Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH和HOSu在DCC的作用下发生偶联反应，生成Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OSu；(d)将步骤(c)所述的Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OSu和H-Arg(Pbf)-OH在碱催化作用下发生偶联反应，生成Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中缩合反应具体为：(A)将Fmoc保护的氨基树脂溶胀后，在去保护溶液的作用下脱Fmoc保护，得到脱保护的氨基树脂；(B)分别将全Fmoc保护氨基酸、Fmoc-Leu-Leu-OH二肽片段和Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH三肽片段与缩合体系混合后活化，得到活化氨基酸和肽片段；(C)将步骤(B)所述的活化氨基酸和肽片段与步骤(A)所述的脱保护的氨基树脂混合，进行氨基酸的缩合反应，得到阿巴帕肽-氨基树脂；所述步骤(A)和步骤(B)没有时间顺序的要求。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(A)中的去保护溶液为哌啶和DMF的混合溶液，所述混合溶液中哌啶和DMF的体积比为1:(2～5)。6.根据权利要求1或4所述的制备方法，其特征在于，所述缩合体系包括缩合剂和反应溶剂；所述缩合剂为DIC/HOBt、PyBOP/HOB...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾海东，金晶，胡琦玉，刘婷婷，陈英，陈丰，
申请(专利权)人：苏州科技大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32